罗汉松化学成分分离及抑制酪氨酸酶活性研究

发布时间：2020-10-20 12:01

　　 桃拓酚(toratol)是一种典型的桃拓烷型二萜,最早是通过超临界CO_2技术从罗汉松属植物桃拓罗汉松的芯材中萃取而出的,并且显示出高效的生物活性、人体安全性和产品配方兼容性,在欧美均被列入药妆品范畴。本文以罗汉松枝叶(Podocarpus macrophyllus Thunb.D.Don)作为原材料,对其甲醇提取物中乙酸乙酯和氯仿极性部位进行系统分离,并对其抗氧化和抑制酪氨酸酶活性进行初步研究,旨在发掘罗汉松中的天然活性成分,寻找与toratol结构、活性类似的化合物作为替代资源,同时也为罗汉松在美白和抗衰老化妆品中的应用提供重要的科学依据。1.采用了罗汉松总二萜的检测方法。以totarol为对照品,采用紫外分光光度法测定罗汉松提取物的总二萜含量,得到线性方程为:A=0.0074C+0.0023,R~2=0.9998(浓度C/(mg/mL),吸光度/A)。利用超声波辅助提取优化罗汉松总二萜提取工艺。在单因素试验的基础上,采用响应面(Box-Behnken)试验设计,得到最佳提取工艺为:甲醇浓度80.00%、液料比26.00:1(mL:g);提取温度63.00℃、提取时间20 min,提取3次,总二萜得率为1.13%(RSD=0.89%)。以V_C作为阳性对照,考察罗汉松总二萜对DPPH自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O_2~-·)、羟基自由基(·OH)的清除能力。结果表明,罗汉松总二萜对三种自由基都有不同程度的清除效果,且在试验浓度范围内,其清除率与质量浓度呈线性关系。在罗汉松总二萜质量浓度为0.59 mg/mL时,其对DPPH·、O_2~-·和·OH自由基的最大清除率分别为81.71%、66.27%、38.60%。2利用浸提法,先以甲醇为溶剂提取罗汉松中的有效成分,将提取液浓缩成浸膏,加水制成悬浮液,再依次用石油醚,氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到四个不同极性部位,然后采用硅胶柱色谱、C-18反相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱、制备薄层色谱(PTLC)、半制备型高效液相色谱(RPLC)及重结晶等现代分离技术,从乙酸乙酯和氯仿萃取部位共分离得到7个化合物,利用核磁共振光谱(~1H-NMR、~(13)C-NMR、HMQC、HMBC)、质谱等现代光谱分析技术对所得化合物进行结构鉴定,确认得到的化合物为:totarol(1),4β-carbosy-19-nortotarol(2),1-deoxy-2α-hydroxy-nagilactone A(3),podocarpus flavone A(4),bilobetin(5),β-sitosterol(6),tridecanoic acid(7)。其中化合物1、3、4、5、7为首次从罗汉松中分离得到。3以L-dopa为底物考察罗汉松总二萜及获得的单体化合物对酪氨酸酶的抑制作用,结果表明:罗汉松总二萜和单体化合物对酪氨酸酶均有一定的抑制作用,且差异显著,抑制能力由强到弱依次为totarolbilobetin总二萜4β-carboxy-19-nortotarolβ-sitosterol。对抑制活性表现最好totarol进行动力学研究,利用Lineweaver-Burk双倒数作图法确定其对多酚氧化酶抑制作用的机制类型。结果表明:totarol属于可逆的混合型抑制剂,米氏常数K_m为0.33 mg/mL,抑制常数K_I为0.44 mg/mL,K_(IS)为0.85mg/mL。
【学位单位】：吉首大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TQ658
【部分图文】：

图 2.3 不同因素对罗汉松总二萜得率的影响Fig. 2.3 Response surface plots illustrating the mutual effects of factors on the yield of diterpenoids再对回归模型进行进一步典型性分析，得到最佳提取工艺条件为提取温度为62.68℃、甲醇浓度 80.46%、液料比 26.34(mL/g)，预测值为 1.14%。为方便操作，将最优方案定为提取温度 63.00℃、甲醇浓度 80.00%、液料比 26.00:1(mL/g)。按最

图3.1分离流程图
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本文编号：2848657