山东省设施蔬菜根结线虫调查及生防菌AMCC1001028的生防试验和发酵优化

发布时间：2020-10-27 01:12

　　 根结线虫是山东省设施蔬菜中普遍存在的一种植物寄生性线虫,每年都会造成严重的经济损失,成为制约设施蔬菜发展的重要因素。化学农药的使用造成环境污染和生态破坏,同时也对蔬菜作物的品质有很大的影响,生物防治受到人们的关注。本研究对山东省部分设施蔬菜进行样品采集,鉴定根结线虫的种类,并以此为依据探究生防菌株AMCC1001028对南方根结线虫的生防试验和生防菌株发酵工艺条件的初步优化。主要获得以下结果:(1)对山东德州、济南、潍坊和临沂四个地区的七个地点进行采样,检测土样中的虫口密度和线虫的种类。结果表明,样品中根结线虫种群密度最高的为96.2 ind·g~(-1)soil。利用SCAR-PCR检测四种常见根结线虫,能够检测到南方根结线虫、花生根结线虫和北方根结线虫,其中单独侵染样品有6份,复合侵染样品有1份,南方根结线虫为优势种群。(2)生防菌株AMCC1001028发酵上清液对南方根结线虫的二龄幼虫的致死试验结果表明,该菌株培养48h发酵上清液处理二龄幼虫12h和24h的校正致死率分别为87.22%和100%,并且经过酸碱处理和冷热处理依然有很高的杀线虫活性。生防菌AMCC1001028的盆栽试验表明,使用该生防菌处理50d番茄的根结数和卵囊数分别降低了28.81%和50.85%。说明该生防菌有防治根结线虫的生防潜力,具有一定的开发前景。(3)生防菌株AMCC1001028的发酵条件优化。通过对十种现有的基础培养基进行筛选,确定了一组菌体量和芽孢数最高的培养基作为发酵优化的基础培养基。对摇瓶培养条件进行单因素试验,确定了最佳培养温度为37℃,最佳装液量为10%,最佳接种量为4%,最佳初始pH为7.0。通过单因素试验验证了发酵基础培养基中玉米粉为最佳碳源,发酵基础培养基中豆饼粉为最佳氮源。通过进行Plackett-Burman试验筛选出对菌体量有显著影响的因素为玉米粉、豆饼粉和碳酸钙。利用Box-Behnken中心组合设计对三个显著因素进行优化,确定了三者的最优点为X_1=2.94,X_2=2.46,X_3=0.18。优化后的发酵培养基为玉米粉29.4g/L,豆饼粉24.6g/L,碳酸钙1.82 g/L,硫酸铵1.0g/L,硫酸镁0.1g/L,磷酸二氢钾2.1g/L,硫酸锰0.5g/L。利用优化培养基进行发酵,检测发酵液菌体量为1.50×10~(10)CFU/mL,比发酵基础培养基提高了30.43%。
【学位单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S476;S436.3;TQ920.6
【部分图文】：

鉴定方法是形态学特征鉴定。鉴定四种最常见根纹、雌虫的口针、雄虫的头部和口针以及二龄幼，会阴花纹比较容易准备光镜检查的切片。表 1-1 四种常见根结线虫的重要形态学特征总结ary of important diagnostic characters of the four most common Melo弓 侧脊 条纹 ，方形侧脊无，条纹有裂痕、分叉粗糙，光滑，波浪状有时是锯齿状，圆形 明显的侧脊粗糙，光滑，略带波浪，圆形，近侧方凹痕侧脊无，条纹短、不规则、分叉粗糙，光滑，略带波浪，圆形 侧脊无细腻，光滑，略带波浪

潍坊寿光 黄瓜 15.3 M. incognita M临沂沂水 甜瓜 23.7 M. incognit临沂莒南 甜瓜 13.5 M. arenari济南济阳 茄子 29.1 M. incognit潍坊寿光 丝瓜 96.2 M. incognit德州德州 番茄 43.5 M. incognit看出不同蔬菜种植地区根结线虫病害严重程度不物病虫害严重程度也不相同，寿光地区的丝瓜地区的黄瓜虫口密度为 15.3 ind·g-1soil。R-PCR 鉴定根结线虫的特异性引物对山东地区部分蔬菜大棚 鉴定，并根据扩增条带确定根结线虫的种类，电泳

图 3-2 SCAR-PCR 扩增结果（南方根结线虫和北方根结线虫Fig. 3-2 SCAR-PCR amplification results (M. ingenita and M. h注：M: DNA Marker DL 2000；1、2 南方根结线虫；3、4 北方根-PCR 扩增条带的结果可知，在 7 份样品中检测南方根结线虫，1 份为花生根结线虫；复合侵染线虫混合种群，未检测到爪哇根结线虫。从调查线虫为主，为下一步试验提供了依据。CC1001028 生防试验虫的获取
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本文编号：2857796