红花药渣中总亚精胺制备方法及抗抑郁活性初步研究

发布时间：2020-11-06 08:35

　　 中药红花是菊科红花属植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥管状花,具有活血通经、抗炎镇痛及抗氧化等药理作用,是中药注射剂红花注射液和红花口服液的主要原料。在生产红花注射液或口服液过程中主要采用的是水提工艺,利用水提取工艺主要将大部分水溶性成分红花黄色素、黄酮苷类等在水中具有一定溶解度的化合物提取出来,提取后的药渣中还含有红色素和亚精胺类物质等脂溶性较强的化学成分。本课题组的前期研究表明红花中亚精胺类物质具有抑制5-HT再摄取的作用,提示其具有潜在的抗抑郁作用。为合理开发利用红花药渣资源,进一步探究亚精胺的潜在生物活性,本文针对红花药渣中的总亚精胺类物质的提取方法、制备方法和亚精胺类单体化合物的分离进行了研究,并采用行为药理学手段对总亚精胺的抗抑郁活性进行了初步评价。本文研究内容如下:1.红花药渣中总亚精胺提取方法研究运用已建立的红花中亚精胺类物质的高效液相色谱含量测定方法,以红花药渣中的四个亚精胺物质的总提取率为指标,考察了自然光照、提取溶剂、提取方法、料液比、提取时间及次数等6个因素对红花药渣中总亚精胺提取率的影响。根据单因素试验结果,进一步利用正交试验法确定了红花药渣中总亚精胺的最适提取条件:用无水甲醇以料液比1:35回流提取3次,每次提取2 h,得到红花药渣中总亚精胺的提取率为(2.894±0.011)mg/g,较之前所建立的红花中亚精胺的超声提取方法高36.38%。2.红花药渣中总亚精胺制备工艺研究及亚精胺类单体化合物分离在已建立的红花药渣中总亚精胺的提取方法基础上,进一步优化了用于制备工艺研究的总亚精胺的提取溶剂,并运用已建立的红花中亚精胺类物质的高效液相色谱含量测定方法,以红花药渣中的四个亚精胺物质的总含量为指标,考察了分离制备总亚精胺的前处理条件(浓缩条件、洗涤条件)及柱分离材料;在此基础上,应用中低压柱色谱快速纯化总亚精胺,考察了上样量及上样浓度对总亚精胺分离效果的影响。研究表明,在红花药渣提取液前处理的基础上,采用C18中低压柱色谱分离制备总亚精胺,最佳条件为:当洗脱流速固定为15 mL/min时,W_1/W_2为4.65(mg/g),(W_1为待分离样品质量,W_2为C18柱分离材料的质量),上样浓度为90mg/mL,最终产品中总亚精胺的纯度达到50%以上。此外,在分离纯化总亚精胺的过程中还分离得到亚精胺类化合物N~1,N~5,N~(10)-(E)-tri-p-coumaroylspermidine。3.红花药渣中总亚精胺抗抑郁活性初步研究应用小鼠悬尾实验(TST)及强迫游泳实验(FST)等行为绝望模型,以实验中小鼠的不动时间作为评价指标,初步评价了红花药渣中总亚精胺的抗抑郁活性并筛选有效剂量。结果发现,与空白对照组相比,当总亚精胺剂量为25 mg/kg、50 mg/kg时,对小鼠悬尾及强迫游泳不动状态有显著改善作用。因此,推测其可能具有抗抑郁活性。并进一步运用行为绝望抑郁模型验证总亚精胺(剂量分别设置为25 mg/kg,50 mg/kg,100 mg/kg)的抗抑郁活性,结果再次证明,亚精胺对小鼠行为绝望状态有改善作用。由此得出结论,红花药渣中的总亚精胺具有一定抗抑郁活性。
【学位单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TQ28
【部分图文】：

红花药渣中总亚精胺制备方法及抗抑郁活性初步研究2.2.1.2 对照品溶液制备分别准确称取适量亚精胺类物质 1, 3, 4, 5 的标准品，加入甲醇溶解并定容于 10mL 棕色容量瓶中，避光保存，备用。2.2.1.3 色谱分析条件及线性方程参考文献[74]中方法，采用 Agilent C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)，流动相为甲醇(B)-水(A)，等度洗脱（0-40 min，47%甲醇），流速 1.0 mL/min，柱温 30℃，检测波长 270 nm，280 nm，290 nm，300 nm，进样体积 10 μL。色谱图见图 2-1。4

第三章 红花药渣总亚精胺制备工艺研究液透明，再加水洗至无醇味，并经酸碱预处理，水洗至中性备用。取经过“3.2.6.1”项下处理的样品 1 g 用 25%乙醇水溶液溶解，均匀载入预处理后 D101 大孔树脂层析柱中（柱内径 1.5 cm，柱高 20 cm），依次用 25%、45%、95%醇水溶液梯度洗脱，洗脱流速 15 mL/min，检测波长 280 nm，根据中低压制备色的紫外吸收峰收集馏分，下图为 D101 大孔树脂中低压制备总亚精胺图谱及 HPLC谱。

第三章 红花药渣总亚精胺制备工艺研究中(43 g，40-60 μm，60 )，依次用 20%、50%、95%乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱流速 15 mL/min，检测波长 280 nm，根据中压制备色谱的紫外吸收峰收集馏分，下图为 C18 中压制备总亚精胺图谱及 HPLC 图谱。
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本文编号：2872910