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酒糟粗提物对肝癌HepG2细胞的抑制作用及相关机制

发布时间:2020-11-21 13:38
   目的:初步测定酒糟粗提物的成分并探讨酒糟粗提物对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其相关作用机制。方法:使用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)分析酒糟粗提物的成分。采用RTCA检测不同浓度酒糟粗提物对肝癌HepG2细胞的抑制作用。在不同浓度酒糟粗提物刺激肝癌HepG2细胞24h后,利用流式细胞仪检测的细胞周期分布,使用Real-Time qPCR及Western Blot检测周期周期相关蛋白及其依赖性激酶的表达量的变化;使用Transwell实验检测其迁移及侵袭能力的变化;利用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化情况,Real-Time qPCR及Western Blot检测凋亡相关标志性分子表达量的变化;Western Blot检测PI3K-AKT通路相关分子表达量的变化。结果:LC-MS测得酒糟粗提物中含有43种物质;浓度为24.9μg/ml的酒糟粗提物对肝癌HepG2细胞的增殖影响不大(p0.05),浓度为49.5μg/ml的酒糟粗提物在12h对肝癌HepG2细胞的增殖影响不大(p0.05),除此外,随酒糟粗提物浓度及刺激时间的增加,与对照组0μg/ml相比,处理组的肝癌HepG2细胞增殖能力受到了明显抑制(p0.05),作用24h后的半数抑制浓度IC50为75.5μg/ml。HepG2细胞的侵袭迁移能力受到了明显抑制,并且受抑制的HepG2细胞数随酒糟粗提物浓度的增加而增多(p0.05);随酒糟粗提物浓度的增加,肝癌HepG2细胞的S期占比逐渐升高,S期相关蛋白CyclinA及其激酶CDK2的表达逐渐降低;处理组肝癌HepG2细胞的促凋亡分子Bax、CYTC、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3表达量逐渐升高(p0.05),而抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3表达逐渐降低(p0.05);PI3K-AKT通路中p-PI3K及p-AKT表达逐渐降低(p0.05),t-PI3K及t-AKT未发生明显变化(p0.05)。结论:酒糟粗提物含多种活性物质;酒糟粗提物呈时间浓度依赖性抑制HepG2细胞的增殖;酒糟粗提物呈浓度依赖性抑制HepG2细胞迁移侵袭;酒糟粗提物通过下调S期相关蛋白CyclinA及其激酶CDK2的表达,诱导肝癌HepG2细胞主要阻滞在细胞周期S期;酒糟粗提物通过抑制PI3K-AKT通路,激活介导凋亡的线粒体通路,引起肝癌HepG2细胞凋亡。
【学位单位】:川北医学院
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2019
【中图分类】:TS261.9;TQ460.6;R735.7
【部分图文】:

酒糟粗提物对肝癌HepG2细胞的抑制作用及相关机制


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剂量反应曲线,点对,药物,HepG2细胞


图 2 A:RTCA 结果;B:不同浓度药物在加药后不同时间点对 HepG2 细胞 NCI 值的影响。C: 24h 的剂量反应曲线。注:*** p<0.001(与对照组 0μg/ml 相比)

酒糟,粗提物,HepG2细胞,肝癌


3 酒糟粗提物抑制 HepG2 细胞的迁移及侵袭结果表明,随着酒糟粗提物浓度升高,在迁移组和侵袭组中穿ranswell小室的肝癌HepG2细胞数量均明显减少,表明经酒糟粗提物后肝癌HepG2细胞的迁移、侵袭能力降低,与对照组0μg/ml相比有显异(p<0.05),见图3。
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本文编号:2893083

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