裂殖壶菌脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质的研究
发布时间：2020-12-26 13:54
裂殖壶菌（Schizochytrium）是一种可在细胞内合成超长碳链脂肪酸的单细胞异养微藻。人们通过诱变筛选以及发酵优化等手段,实现了其高密度工业化生产。本实验室前期研究发现,裂殖壶菌在发酵后期细胞内脂肪酸发生选择性水解,从而导致DHA富集。为了揭示裂殖壶菌胞内参与脂肪酸水解的关键脂肪酶基因的作用机制,本论文克隆了Schizochytrium sp.S31中的脂肪酶基因STGL2和STGL3,并在毕赤酵母中进行表达,获得重组蛋白,系统分析了裂殖壶菌脂肪酶的酶学性质,为裂殖壶菌的基因工程改造提供了理论依据。首先,本研究在Schizochytrium sp.S31基因组测序的基础上,利用生物信息学手段筛选了两个脂肪酶基因STGL2和STGL3。以裂殖壶菌RNA为模板,反转录得到cDNA片段,再经过PCR扩增得到目的基因。随后将目的基因连接到pPIC9K载体上,获得重组质粒pPIC9K-STGL2和pPIC9K-STGL3。其次,将重组质粒pPIC9K-STGL2和pPIC9K-STGL3转染毕赤酵母SMD1168,筛选得到重组转化子SMD1168/pPIC9K-STGL2和SMD1168/...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脂肪酶空间结构
图 1-2 脂肪酶催化脂质水解的机制Fig. 1-2 The hydrolysis catalyzed mechanisms of lipase物脂肪酶性质及活性检测源的微生物理化性质差距较大且脂肪酶活性受到很多因素的影响响脂肪酶活性的主要因素。一般来说，真菌脂肪酶的最适反应温
码的氨基酸序列与酿酒酵母中 Tgl3p、Tgl4p 和 Tgl5p 进化树图谱基因与已知的脂肪酶序列相比于其他脂肪酶基因具有较高的同源表 2-7 Schizochytrium sp. S31 基因组脂肪酶信息Tab. 2-7 Genomic lipases information of Schizochytrium sp. S31名称 位置 编码 大小（bTGL2 scaffold70.t7 19075-20364(-) 1290TGL3 scaffold75.t2 1780-2649(-) 870
【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物脂肪酶的性质及应用研究[J]. 杨媛,张剑. 中国洗涤用品工业. 2017(04)
[2]微生物脂肪酶的研究进展及其在食品工业中的应用[J]. 申卫家,郦金龙,黎金鑫,李秀婷. 粮食与油脂. 2017(04)
[3]米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究[J]. 罗文,王治元,苗长林,吕鹏梅,何东,李惠文,杨玲梅,袁振宏. 林产化学与工业. 2016(01)
[4]细菌脂肪酶基因表达调控的研究进展[J]. 查代明,闫云君. 微生物学报. 2015(11)
[5]南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母中的分泌型表达及酶学性质初探[J]. 李迅,邓若冰,王飞. 四川师范大学学报(自然科学版). 2014(06)
[6]伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶的分离纯化及其酶学性质分析[J]. 刘艳如,邱芳锦,舒正玉,王作镇,邱黎清,李欣,江贤章,黄建忠. 福建师范大学学报(自然科学版). 2014(03)
[7]脂肪酶活力测定方法及其在筛选产脂肪酶微生物中的应用[J]. 王欢,何腊平,周换景,张义明,李翠芹,陶菡. 生物技术通报. 2013(01)
[8]裂殖壶菌诱变筛选的研究[J]. 许永,臧晓南,徐涤,张学成. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2012(12)
[9]橄榄油乳化法测定脂肪酶活性的优化研究[J]. 滕宏飞,王丹静,徐青,辛建美,罗红宇. 食品工业. 2011(06)
[10]裂殖壶菌发酵生产DHA研究进展[J]. 魏萍,马小琛,任路静,纪晓俊,何光华,刘臻,黄和. 食品工业科技. 2010(10)
博士论文
[1]脂肪酶高产菌的选育、酶的纯化和表征以及两种诱导方式产酶的机理研究[D]. 曹茜.浙江大学 2016
[2]圆弧青霉脂肪酶的异源表达、耐热性改造及底物专一性分析[D]. 谭中标.江南大学 2014
[3]氧对裂壶藻利用甘油产DHA影响机制及其高密度发酵控制策略的研究[D]. 常桂芳.江南大学 2013
[4]黑曲霉脂肪酶的酶学性质、基因克隆与表达及结构预测[D]. 舒正玉.华中科技大学 2007
硕士论文
[1]裂殖壶菌发酵过程中脂肪酸迁移规律的研究[D]. 张涛.江南大学 2017
[2]裂殖壶菌关键脂肪酶基因的转录和表达研究[D]. 娄菲.江南大学 2017
[3]热泉菌Bacillus sp.BI-19产耐高温脂肪酶的基因克隆及其酶学性质研究[D]. 刘秀萌.山东大学 2016
[4]产脂肪酶菌株Serratia marcescens Lipa1318的分离鉴定、发酵条件优化及其脂肪酶基因的克隆表达[D]. 杜萍萍.河北农业大学 2015
[5]裂殖壶菌产DHA的发酵工艺研究及高产菌株选育[D]. 王申强.江南大学 2013
[6]Geotrichum sp. SYBC WU-3产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究[D]. 王蕾.江南大学 2008
本文编号：2939826
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脂肪酶空间结构
图 1-2 脂肪酶催化脂质水解的机制Fig. 1-2 The hydrolysis catalyzed mechanisms of lipase物脂肪酶性质及活性检测源的微生物理化性质差距较大且脂肪酶活性受到很多因素的影响响脂肪酶活性的主要因素。一般来说，真菌脂肪酶的最适反应温
码的氨基酸序列与酿酒酵母中 Tgl3p、Tgl4p 和 Tgl5p 进化树图谱基因与已知的脂肪酶序列相比于其他脂肪酶基因具有较高的同源表 2-7 Schizochytrium sp. S31 基因组脂肪酶信息Tab. 2-7 Genomic lipases information of Schizochytrium sp. S31名称 位置 编码 大小（bTGL2 scaffold70.t7 19075-20364(-) 1290TGL3 scaffold75.t2 1780-2649(-) 870
【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物脂肪酶的性质及应用研究[J]. 杨媛,张剑. 中国洗涤用品工业. 2017(04)
[2]微生物脂肪酶的研究进展及其在食品工业中的应用[J]. 申卫家,郦金龙,黎金鑫,李秀婷. 粮食与油脂. 2017(04)
[3]米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究[J]. 罗文,王治元,苗长林,吕鹏梅,何东,李惠文,杨玲梅,袁振宏. 林产化学与工业. 2016(01)
[4]细菌脂肪酶基因表达调控的研究进展[J]. 查代明,闫云君. 微生物学报. 2015(11)
[5]南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母中的分泌型表达及酶学性质初探[J]. 李迅,邓若冰,王飞. 四川师范大学学报(自然科学版). 2014(06)
[6]伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶的分离纯化及其酶学性质分析[J]. 刘艳如,邱芳锦,舒正玉,王作镇,邱黎清,李欣,江贤章,黄建忠. 福建师范大学学报(自然科学版). 2014(03)
[7]脂肪酶活力测定方法及其在筛选产脂肪酶微生物中的应用[J]. 王欢,何腊平,周换景,张义明,李翠芹,陶菡. 生物技术通报. 2013(01)
[8]裂殖壶菌诱变筛选的研究[J]. 许永,臧晓南,徐涤,张学成. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2012(12)
[9]橄榄油乳化法测定脂肪酶活性的优化研究[J]. 滕宏飞,王丹静,徐青,辛建美,罗红宇. 食品工业. 2011(06)
[10]裂殖壶菌发酵生产DHA研究进展[J]. 魏萍,马小琛,任路静,纪晓俊,何光华,刘臻,黄和. 食品工业科技. 2010(10)
博士论文
[1]脂肪酶高产菌的选育、酶的纯化和表征以及两种诱导方式产酶的机理研究[D]. 曹茜.浙江大学 2016
[2]圆弧青霉脂肪酶的异源表达、耐热性改造及底物专一性分析[D]. 谭中标.江南大学 2014
[3]氧对裂壶藻利用甘油产DHA影响机制及其高密度发酵控制策略的研究[D]. 常桂芳.江南大学 2013
[4]黑曲霉脂肪酶的酶学性质、基因克隆与表达及结构预测[D]. 舒正玉.华中科技大学 2007
硕士论文
[1]裂殖壶菌发酵过程中脂肪酸迁移规律的研究[D]. 张涛.江南大学 2017
[2]裂殖壶菌关键脂肪酶基因的转录和表达研究[D]. 娄菲.江南大学 2017
[3]热泉菌Bacillus sp.BI-19产耐高温脂肪酶的基因克隆及其酶学性质研究[D]. 刘秀萌.山东大学 2016
[4]产脂肪酶菌株Serratia marcescens Lipa1318的分离鉴定、发酵条件优化及其脂肪酶基因的克隆表达[D]. 杜萍萍.河北农业大学 2015
[5]裂殖壶菌产DHA的发酵工艺研究及高产菌株选育[D]. 王申强.江南大学 2013
[6]Geotrichum sp. SYBC WU-3产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究[D]. 王蕾.江南大学 2008
本文编号：2939826
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/2939826.html
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