蜂蛹多肽的分离纯化及其免疫调节活性研究
发布时间：2021-03-26 08:53
蜂蛹是蜂的幼虫和蛹,含有丰富的营养物质,其中主要包括蛋白质、脂肪和微量元素。蜂蛹蛋白具有抗氧化、免疫调节和抗肿瘤等生物活性,但目前国内对蜂蛹只进行简单的生产加工,绝大多数的蜂蛹资源未得到有效地开发利用,造成蜂蛹资源的浪费,对蜂蛹多肽的制备、纯化及其生物活性的研究较少。本课题组前期对蜂蛹多肽进行了初步研究,表明其纯化组分有较好的抗氧化活性,值得进一步研究。本文将在前期工作基础上,利用碱性蛋白酶对蜂蛹蛋白进行酶法水解制备蜂蛹多肽,并采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子层析法和Sephadex G-25凝胶柱层析法对蜂蛹多肽进行分离纯化,得到两种多肽纯化组分BPP-21和BPP-22,并对这两种纯化组分进行初步表征;以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,研究蜂蛹多肽纯化组分的体外免疫调节活性及其调节机制;采用环磷酰胺致免疫抑制小鼠模型,研究蜂蛹多肽纯化组分的体内免疫调节活性,该研究可为蜂蛹多肽功能食品的研究与开发提供基础,为蜂蛹资源的综合利用提供新途径。主要研究内容如下:（1）蜂蛹多肽的制备、纯化和初步表征。采用酶解法制备蜂蛹多肽,选用碱性蛋白酶水解蜂蛹蛋白得到...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BPP-21和BPP-22的凝胶电泳Figure2.3Tricine-SDS-PAGEgelelectrophoresisoftheBPP-21andBPP-22
江苏大学硕士学位论文29图3.1BPP-21（a）和BPP-22（b）对RAW264.7细胞活力的影响；*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组相比Figure3.1EffectofBPP-21(a)andBPP-22(b)ontheproliferationofRAW264.7cells.*P<0.05,**P<0.01vs.Blankgroup.3.3.2BPP-21和BPP-22对RAW264.7巨噬细胞吞噬能力的影响巨噬细胞在炎症的发生、维持、宿主防御、促进和解决中起着至关重要的作用[92]，其吞噬功能是机体最重要的非特异性免疫反应之一。因此，本研究采用不同浓度的BPP-21和BPP-22处理RAW264.7细胞，研究蜂拥多肽的免疫活性。不同浓度的PP-21和BPP-22对巨噬细胞吞噬能力的影响结果如图3.2所示，与空白组相比，BPP-21和BPP-22在浓度为25μg/mL时，可以显著提高RAW264.7细胞的吞噬能力（P<0.05），在浓度为50、100和200μg/mL时，可以极显著提高细胞的吞噬能力（P<0.01），并呈剂量依赖关系。表明BPP-21和BPP-22可激活巨噬细胞，增强其吞噬能力。与BPP-21相比，BPP-22使RAW264.7巨噬细胞具有更强的吞噬能力。
蜂蛹多肽的分离纯化及其免疫调节活性研究30图3.2BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞吞噬能力的影响；*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组相比Figure.3.2EffectofBPP-21andBPP-22onthephagocytosisofRAW264.7cells.*P<0.05,**P<0.01vs.Blankgroup.3.3.3BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞分泌细胞因子的影响3.3.3.1BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ水平的影响当机体受到炎症病理损伤，受到外在病原体攻击，会引起细胞分泌IL-6、TNF-α等细胞因子。活化的巨噬细胞可产生多种细胞因子来调节细胞和体液免疫反应，如TNF-α、IL-2和IFN-γ[93-95]。BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ水平的影响结果如图3.3所示，与空白对照组相比，BPP-21和BPP-22在实验设计剂量25、50、100和200μg/mL下均可极显著提高IL-2和TNF-α的分泌量（P<0.01），在实验设计剂量范围内均可极显著提高IFN-γ的分泌量（P<0.01），表明BPP-21和BPP-22都对RAW264.7细胞具有激活作用，使细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量显著增加。
本文编号：3101327
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BPP-21和BPP-22的凝胶电泳Figure2.3Tricine-SDS-PAGEgelelectrophoresisoftheBPP-21andBPP-22
江苏大学硕士学位论文29图3.1BPP-21（a）和BPP-22（b）对RAW264.7细胞活力的影响；*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组相比Figure3.1EffectofBPP-21(a)andBPP-22(b)ontheproliferationofRAW264.7cells.*P<0.05,**P<0.01vs.Blankgroup.3.3.2BPP-21和BPP-22对RAW264.7巨噬细胞吞噬能力的影响巨噬细胞在炎症的发生、维持、宿主防御、促进和解决中起着至关重要的作用[92]，其吞噬功能是机体最重要的非特异性免疫反应之一。因此，本研究采用不同浓度的BPP-21和BPP-22处理RAW264.7细胞，研究蜂拥多肽的免疫活性。不同浓度的PP-21和BPP-22对巨噬细胞吞噬能力的影响结果如图3.2所示，与空白组相比，BPP-21和BPP-22在浓度为25μg/mL时，可以显著提高RAW264.7细胞的吞噬能力（P<0.05），在浓度为50、100和200μg/mL时，可以极显著提高细胞的吞噬能力（P<0.01），并呈剂量依赖关系。表明BPP-21和BPP-22可激活巨噬细胞，增强其吞噬能力。与BPP-21相比，BPP-22使RAW264.7巨噬细胞具有更强的吞噬能力。
蜂蛹多肽的分离纯化及其免疫调节活性研究30图3.2BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞吞噬能力的影响；*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组相比Figure.3.2EffectofBPP-21andBPP-22onthephagocytosisofRAW264.7cells.*P<0.05,**P<0.01vs.Blankgroup.3.3.3BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞分泌细胞因子的影响3.3.3.1BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ水平的影响当机体受到炎症病理损伤，受到外在病原体攻击，会引起细胞分泌IL-6、TNF-α等细胞因子。活化的巨噬细胞可产生多种细胞因子来调节细胞和体液免疫反应，如TNF-α、IL-2和IFN-γ[93-95]。BPP-21和BPP-22对RAW264.7细胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ水平的影响结果如图3.3所示，与空白对照组相比，BPP-21和BPP-22在实验设计剂量25、50、100和200μg/mL下均可极显著提高IL-2和TNF-α的分泌量（P<0.01），在实验设计剂量范围内均可极显著提高IFN-γ的分泌量（P<0.01），表明BPP-21和BPP-22都对RAW264.7细胞具有激活作用，使细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量显著增加。
本文编号：3101327
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