抗Aβ纳米抗体的固载和应用初试
发布时间：2021-05-07 21:24
阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）是慢性并且渐进发展的中枢神经系统退行性疾病,占总痴呆类型的60%-70%左右,研究有效的阿尔兹海默症治疗及预防策略具有十分重大的意义。淀粉样蛋白级联假说被广泛认可,它认为患者大脑中的老年斑的主要成分Aβ是阿尔兹海默症主要的致病因子,由Aβ形成的可溶性聚集体对神经系统的毒性作用更强,因此针对Aβ可溶性聚集体的抗体对AD的治疗有重要意义。纳米抗体分子量小、特异性和稳定性高、亲水性强且易于修饰,是良好的吸附剂配体。因为纳米抗体的结构特点,需要采用合适的固载方法保证其活性尽可能不受损失。Co3+可以介导His标签蛋白和NTA之间的相互作用。Co3+-Pr-NTA的复合物具有热动力学稳定性,与螯合剂或还原剂反应微弱,可用于纳米抗体的固载。本研究探究了纳米抗体的固载条件,将固载的纳米抗体用于Aβ的检测和Aβ的吸附去除,初步探究脑脊液Aβ的去除效果。（1）本研究原核表达纯化了两种抗Aβ纳米抗体SDP6和SH2,并进行了活性测定。结果显示经过一次固定化金属离子亲和层析后的SDP6的纯度在90%以上,...
【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1.文献综述
1.1 阿尔兹海默症的机理、诊断和治疗
1.1.1 阿尔兹海默症
1.1.2 阿尔兹海默症的致病机制
1.1.3 阿尔兹海默症的治疗
1.1.4 靶向Aβ治疗阿尔兹海默症的策略
1.2 纳米抗体
1.2.1 纳米抗体
1.2.2 纳米抗体的应用
1.3 纳米抗体的固载
1.3.1 蛋白固载
1.3.2 纳米抗体的固载
1.4 脑脊液循环
1.5 本研究的目的、意义与内容
2.抗Aβ纳米抗体的表达纯化及活性检测
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 材料及试剂
2.2.2 主要仪器与耗材
2.3 实验方法
2.3.1 重组纳米抗体的诱导表达
2.3.2 菌体破碎
2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.3.4 固定化金属离子亲和层析
2.3.5 纳米抗体的超滤换液、浓缩与保存
2.3.6 重组蛋白浓度测定
2.3.7 重组蛋白纯度分析及回收率计算
2.3.8 ELISA法检测纳米抗体活性
2.3.9 ThT-F法测定纳米抗体活性
2.3.10 Biacore测定纳米抗体亲和常数
2.4 实验结果及讨论
2.4.1 重组抗Aβ纳米抗体的表达和纯化
2.4.2 ELISA法检测纳米抗体活性
2.4.3 ThT-F法检测纳米抗体活性
2.4.4 Biacore测定纳米抗体亲和常数
2.5 本章小结
3.吸附剂的制备
3.1 引言
3.2 实验材料与仪器
3.2.1 材料与试剂
3.2.2 主要仪器与耗材
3.3 实验方法
3.3.1 纳米抗体的固载
3.3.2 H_2O_2影响SH2纳米抗体的活性
3.3.3 固载后纳米抗体的稳定性检测
3.3.4 吸附剂对Aβ的吸附动力学考察
3.3.5 吸附剂对Aβ的血清吸附考察
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 纳米抗体的固载条件的选择
3.4.2 固载后纳米抗体的稳定性检测
3.4.3 吸附剂对Aβ的吸附动力学考察
3.4.4 吸附剂对Aβ的血清吸附考察
3.5 本章小结
4 吸附剂的应用
4.1 引言
4.2 实验材料与仪器
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 主要仪器与耗材
4.3 实验方法
4.3.1 吸附剂用于对Aβ的夹心法免疫检测
4.3.2 AD模型小鼠的模拟脑脊液微透析
4.3.3 APP/PS1双转基因小鼠模型的建立
4.3.4 AD模型小鼠的行为学检测
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 吸附剂用于对Aβ的夹心法免疫检测
4.4.2 AD模型小鼠的脑脊液微透析
4.4.3 APP/PS1双转基因小鼠模型的建立
4.4.4 AD模型小鼠的行为学检测
4.5 本章小结
结论
参考文献
附录A SDP6和SH2的蛋白序列
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
本文编号：3174082
【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1.文献综述
1.1 阿尔兹海默症的机理、诊断和治疗
1.1.1 阿尔兹海默症
1.1.2 阿尔兹海默症的致病机制
1.1.3 阿尔兹海默症的治疗
1.1.4 靶向Aβ治疗阿尔兹海默症的策略
1.2 纳米抗体
1.2.1 纳米抗体
1.2.2 纳米抗体的应用
1.3 纳米抗体的固载
1.3.1 蛋白固载
1.3.2 纳米抗体的固载
1.4 脑脊液循环
1.5 本研究的目的、意义与内容
2.抗Aβ纳米抗体的表达纯化及活性检测
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 材料及试剂
2.2.2 主要仪器与耗材
2.3 实验方法
2.3.1 重组纳米抗体的诱导表达
2.3.2 菌体破碎
2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.3.4 固定化金属离子亲和层析
2.3.5 纳米抗体的超滤换液、浓缩与保存
2.3.6 重组蛋白浓度测定
2.3.7 重组蛋白纯度分析及回收率计算
2.3.8 ELISA法检测纳米抗体活性
2.3.9 ThT-F法测定纳米抗体活性
2.3.10 Biacore测定纳米抗体亲和常数
2.4 实验结果及讨论
2.4.1 重组抗Aβ纳米抗体的表达和纯化
2.4.2 ELISA法检测纳米抗体活性
2.4.3 ThT-F法检测纳米抗体活性
2.4.4 Biacore测定纳米抗体亲和常数
2.5 本章小结
3.吸附剂的制备
3.1 引言
3.2 实验材料与仪器
3.2.1 材料与试剂
3.2.2 主要仪器与耗材
3.3 实验方法
3.3.1 纳米抗体的固载
3.3.2 H_2O_2影响SH2纳米抗体的活性
3.3.3 固载后纳米抗体的稳定性检测
3.3.4 吸附剂对Aβ的吸附动力学考察
3.3.5 吸附剂对Aβ的血清吸附考察
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 纳米抗体的固载条件的选择
3.4.2 固载后纳米抗体的稳定性检测
3.4.3 吸附剂对Aβ的吸附动力学考察
3.4.4 吸附剂对Aβ的血清吸附考察
3.5 本章小结
4 吸附剂的应用
4.1 引言
4.2 实验材料与仪器
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 主要仪器与耗材
4.3 实验方法
4.3.1 吸附剂用于对Aβ的夹心法免疫检测
4.3.2 AD模型小鼠的模拟脑脊液微透析
4.3.3 APP/PS1双转基因小鼠模型的建立
4.3.4 AD模型小鼠的行为学检测
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 吸附剂用于对Aβ的夹心法免疫检测
4.4.2 AD模型小鼠的脑脊液微透析
4.4.3 APP/PS1双转基因小鼠模型的建立
4.4.4 AD模型小鼠的行为学检测
4.5 本章小结
结论
参考文献
附录A SDP6和SH2的蛋白序列
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
本文编号：3174082
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3174082.html
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