洗涤剂用蛋白酶的发酵及造粒技术研究

发布时间：2021-05-11 02:05

　　蛋白酶是一类能催化肽键水解的生物催化剂,常作为添加剂被应用在洗涤产品中。本文首先从解脂耶氏酵母菌株（W29）中提取DNA片段,运用反转录PCR扩增技术,从解脂耶氏酵母中克隆得到两种可能产蛋白酶的cDNA序列并连入pPICZα载体,之后将其导入到毕赤酵母GS115和X33中进行活性表达,共得到四种重组子,经筛选得到产蛋白酶的菌株P.pastoris GS115/pPICZα-AXP。其次,经摇瓶发酵筛选得到蛋白酶的高产菌株,从培养时间、碳源、培养环境pH和接种量上对发酵条件进行优化。最后,将重组毕赤酵母细胞在3L三角瓶中扩大培养,利用超滤手段对发酵液进行浓缩。流化床造粒工艺对酶液进行造粒处理,探究了造粒过程的影响因素,并对颗粒的性质进行比较检测,探究了最佳的造粒手段。主要研究内容和结果如下:（1）合成了外源载体表达工程菌株毕赤酵母GS115/pPICZα-AXP。重组毕赤酵母GS115/pPICZα-AXP菌株在酪平板培养基上菌落形态表现突出。利用高浓度的Zeocin（1000μg/mL）筛选多拷贝转化子,初步培养重组毕赤酵母经发酵所产酶活力为18.9U/mL。（2）摇瓶发酵培养P.pa... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 洗涤剂用碱性蛋白酶的概述
        1.1.1 洗涤剂用酶的发展
        1.1.2 洗涤剂用酶
    1.2 蛋白酶的微生物表达
        1.2.1 蛋白酶在微生物中表达的研究进展
        1.2.2 巴斯德毕赤酵母表达系统
    1.3 蛋白酶的造粒处理
        1.3.1 蛋白酶造粒的目的
        1.3.2 蛋白酶造粒的前景与发展
        1.3.3 蛋白酶造粒的影响因素
    1.4 本课题研究的目的和意义
第二章 重组蛋白酶工程菌株的构建
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验仪器和试剂
    2.3 实验过程
        2.3.1 W29基因组DNA的提取与处理
        2.3.2 构建基因克隆的运载体(质粒)
        2.3.3 表达载体的构建
        2.3.4 SDS-PAGE电泳验证
    2.4 实验结果
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第三章 重组蛋白酶工程菌株的培养发酵
    3.1 引言
    3.2 实验试剂
    3.3 实验仪器
    3.4 实验方法
        3.4.1 毕赤酵母重组表达菌株的发酵
        3.4.2 酶活力测定
        3.4.3 去污力测定
    3.5 实验结果与分析
        3.5.1 高产酶的筛选
        3.5.2 最佳培养天数选择
        3.5.3 最佳培养碳源选择
        3.5.4 碳源浓度对蛋白酶生产的影响
        3.5.5 最佳初始培养pH选择
        3.5.6 最佳接种量选择
        3.5.7 去污力测定
    3.6 讨论
    3.7 本章小结
第四章 蛋白酶造粒技术的研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料
    4.3 实验仪器
    4.4 实验过程与方法
        4.4.1 造粒前预处理
        4.4.2 流化床造粒
        4.4.3 处方影响因素考察
        4.4.4 工艺影响因素考察
        4.4.5 酶活力测定
        4.4.6 颗粒性质检测
    4.5 实验结果与分析
        4.5.1 预处理结果
        4.5.2 处方因素影响
        4.5.3 工艺因素影响
        4.5.4 颗粒热稳定性检测
        4.5.5 包衣含酶颗粒粒径分布
    4.6 讨论
    4.7 本章小结
第五章 总结与展望
    5.1 全文总结
    5.2 展望与建议
参考文献
作者简介与攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3180504