锰过氧化物酶的酵母异源表达及其降解黄曲霉毒素研究

发布时间：2021-05-12 07:11

　　黄曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）是一种天然的高毒性次级代谢产物,广泛存在于自然界,易污染花生、玉米、大米等谷物,被世界卫生组织的癌症研究机构（IARC）划定为Ⅰ类致癌物。AFB₁对人和家畜的健康安全都产生了极大的威胁,因此研究AFB₁的降解脱毒对食品和饲料加工工业具有重要意义。锰过氧化物酶（Manganese peroxidase,MnP）能够裂解AFB₁呋喃环上的8,9位双键,将AFB₁氧化生成AFB₁-8,9环氧化物,经Mn P氧化产生的环氧化物会自发水解为AFB₁-8,9-二氢二醇,从而达到对AFB₁降解脱毒的目的。本文在食品级乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中实现了三种不同来源的锰过氧化物酶的分泌表达,并对降解AFB₁效果最优的重组菌的诱导条件和反应条件进行优化,从而实现直接利用其发酵液高效降解... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩写词对照表
1 绪论
    1.1 黄曲霉毒素B_1的概述
        1.1.1 黄曲霉毒素的结构与理化性质
        1.1.2 黄曲霉毒素B_1的毒性位点及致毒机理
        1.1.3 黄曲霉毒素B_1的降解研究
        1.1.4 黄曲霉毒素B_1的检测方法
    1.2 锰过氧化物酶
        1.2.1 锰过氧化物酶的结构与性质
        1.2.2 锰过氧化物酶的锰结合位点与功能
        1.2.3 锰过氧化物酶分子水平的研究
        1.2.4 锰过氧化物酶基因的表达
        1.2.5 锰过氧化物酶的应用
    1.3 乳酸克鲁维酵母表达系统
        1.3.1 乳酸克鲁维酵母表达系统的优势
        1.3.2 乳酸克鲁维酵母的表达载体及其特点
        1.3.3 乳酸克鲁维酵母表达系统的应用
    1.4 课题的研究意义及内容
        1.4.1 课题的研究意义
        1.4.2 课题的研究内容
        1.4.3 课题的创新点
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株与质粒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 培养基
        2.1.5 主要试剂
    2.2 分析检测方法
        2.2.1 蛋白SDS-PAGE分析
        2.2.2 UPLC-TQD分析
    2.3 实验方法
        2.3.1 感受态细胞的制备与转化
        2.3.2 不同来源锰过氧化物酶重组酵母的构建、诱导表达及其对AFB_1的降解
        2.3.3 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)诱导表达条件的优化
        2.3.4 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)降解AFB_1反应条件的优化
        2.3.5 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)发酵液降解AFB_1产物研究
        2.3.6 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)发酵液对花生中AFB_1降解效果评估
        2.3.7 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)传代稳定性检测
    2.4 数据分析软件
3 结果与讨论
    3.1 重组酵母的构建和其发酵液降解AFB_1实验
        3.1.1 重组菌的构建
        3.1.2 锰过氧化物酶重组酵母的发酵培养与诱导表达
        3.1.3重组菌发酵液降解AFB_1
    3.2 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)诱导表达条件优化
        3.2.1 诱导温度的优化
        3.2.2 诱导时间的优化
        3.2.3 诱导转速的优化
        3.2.4 诱导培养基中Hemin浓度的优化
        3.2.5 诱导培养基初始pH优化
        3.2.6 诱导培养基中MnSO_4浓度的优化
        3.2.7 诱导培养基中半乳糖浓度的优化
        3.2.8 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)诱导表达条件优化正交试验
    3.3 重组菌发酵液降解AFB_1反应条件的优化
        3.3.1 反应时间的优化
        3.3.2 反应温度的优化
        3.3.3 反应体系pH的优化
        3.3.4 反应体系中MnSO_4浓度的优化
        3.3.5 反应体系中发酵液Phc Mn P含量的优化
        3.3.6 葡萄糖添加量的优化
        3.3.7 葡萄糖氧化酶添加量的优化
        3.3.8 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)发酵液降解AFB_1条件优化正交试验
    3.4 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)发酵液降解AFB_1产物研究
    3.5 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)发酵液对样品中AFB_1 降解效果评估
    3.6 重组菌GG799(p KLAC1-Phcmnp)传代稳定性研究
主要结论与展望
    主要结论
    展望
致谢
参考文献
附录 :作者在攻读硕士学位期间研究成果



本文编号：3182981