Pantoea dispersa蔗糖异构酶在芽孢杆菌中的表达及发酵优化

发布时间：2021-05-18 03:08

　　蔗糖异构酶（Surcose Isomerase,SIase）能将蔗糖分子内的α-1,2-糖苷键转位形成α-1,6-糖苷键或α-1,1-糖苷键,从而得到异麦芽酮糖或海藻酮糖,根据其主产物不同也被称作异麦芽酮糖合酶或海藻酮糖合酶。异麦芽酮糖与蔗糖在甜度、溶解度等物理性质比较相近。相对于蔗糖而言,异麦芽酮糖具有防龋齿、预防糖尿病、抗疲劳、易吸收等特点。生物酶法制备异麦芽酮糖转化率较高,反应条件温和,产物易分离,符合绿色环保的要求。本研究基于前期构建的产蔗糖异构酶重组菌Brevibacillus choshinensis/pNCMO2-SI,通过对摇瓶和3-L罐培养条件进行优化,并进一步筛选启动子提高了酶产量。同时将蔗糖异构酶基因在宿主菌Bacillus subtilis WSH11中进行表达,同时比较两个表达系统的优劣性。主要研究结果如下:（1）通过摇瓶优化,确定了重组菌B.choshinensis/pNCMO2-SI最佳培养条件为:葡萄糖10 g·L^-1,多聚蛋白胨8.5 g·L^-1,牛肉浸膏8.5 g·L^-1,NH

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 蔗糖异构酶的概述
        1.1.1 蔗糖异构酶的来源
        1.1.2 蔗糖异构酶的酶学性质
        1.1.3 蔗糖异构酶的制备
    1.2 异麦芽酮糖的概述
        1.2.1 异麦芽酮糖的理化性质
        1.2.2 异麦芽酮糖的功能
        1.2.3 异麦芽酮糖的生产
    1.3 短短芽孢杆菌的概述
    1.4 枯草芽孢杆菌的概述
    1.5 立题依据与研究意义
    1.6 主要研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 菌种及质粒
    2.2 主要试剂
    2.3 主要仪器
    2.4 培养基
    2.5 分子生物学操作
        2.5.1 不同重组质粒的构建与鉴定
        2.5.2 E.coli感受态细胞的制备及化学法转化
        2.5.3 短短芽孢杆菌感受态的制备及电击转化
        2.5.4 枯草芽孢杆菌感受态的制备及电击转化
    2.6 发酵方法
        2.6.1 不同重组短短芽孢杆菌的发酵培养
        2.6.2 不同重组枯草芽孢杆菌的发酵培养
    2.7 分析方法
        2.7.1 细胞浓度的测定
        2.7.2 DNA琼脂糖凝胶电泳
        2.7.3 SDS-PAGE分析
        2.7.4 蔗糖异构酶的酶活测定
        2.7.5 蛋白酶酶活的测定
        2.7.6 蛋白浓度的测定
        2.7.7 葡萄糖的测定
        2.7.8 残氮的测定
第三章 结果与讨论
    3.1 重组菌B.choshinensis/pNCMO2-SI的发酵优化
        3.1.1 重组菌B.choshinensis/pNCMO2-SI的摇瓶优化
        3.1.2 重组菌B.choshinensis/pNCMO2-SI的3-L发酵罐优化
    3.2 启动子对蔗糖异构酶在短短芽孢杆菌中重组表达的影响
        3.2.1 含不同启动子重组表达质粒的构建与重组酶的表达
        3.2.2 含不同启动子重组菌的摇瓶优化
        3.2.3 含不同启动子重组菌的3-L罐发酵
        3.2.4 重组短短芽孢杆菌发酵过程蛋白酶对酶活的影响分析
    3.3 蔗糖异构酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达
        3.3.1 重组菌BSpBS-SI的构建与表达
        3.3.2 重组菌BSpHY-SI的构建与表达
        3.3.3 重组菌BSpBS-SI的发酵优化
主要结论与展望
    主要结论
    展望
致谢
参考文献
附录 ：作者在攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3192992