TSLP及其抗体复合物的结构生物学研究
发布时间：2021-06-07 02:44
胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）的表达分布广泛,主要包括肺、皮肤和肠道屏障表面的上皮细胞等。呼吸道被过敏原或病原微生物刺激后,TSLP的表达会上调。TSLP可以促进DC细胞（树突状细胞）成熟。成熟的DC细胞会诱导过敏性哮喘。基因组学研究发现,TSLP是过敏性炎症的相关位点。在小鼠过敏原诱导哮喘模型和灵长类过敏原诱导的哮喘模型中,已经证实胸腺基质淋巴细胞生成素在诱导过敏性哮喘中扮演了关键角色。本实验构建了 TSLP及WM35-Fab（TSLP抗体）两种瞬转和稳转质粒,在瞬转确认了 TSLP及WM35-Fab在293E中可顺利表达后,我们构建TSLP及WM35-Fab稳转的CHO细胞株。为了便于纯化,我们在TSLP及WM35-Fab蛋白C端连接组氨酸标签。TSLP及WM35-Fab his标签蛋白通过Ni柱亲和层析和分子排阻色谱层析拿到了高纯度蛋白。TSLP及WM35-Fab蛋白由于是稳转细胞株表达,均一性较高。我们尝试不同孵育比例后,发现WM35-Fab:TSLP摩尔比在1:3时,W35-Fab/TSLP蛋白复合物孵育效果最好。...
【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１ＴＳＬＰ与哮喘的关系［２ＱＩ??Ｆｉｇ．?１－ｌＴｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＴＳＬＰ?ａｎｄ?ａｓｔｈｍａ?剛??
?第一章绪论???他杂质的分离。??１．２．２．１．１亲和层析原理??ｅ的产物?！＞＾?□?〇??－－ｙｒｙ＾ｒｙｒｙ＊?＂＇?￣＇?????＼??介质??图１－２亲和层析的原理ｄ??Ｆｉｇ．１－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?Ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?卩７］??蛋白亲和层析技术利用柱子基质所偶联的特殊蛋白或者分子与目的蛋白可以特??异性亲和吸附这一生物特性，直接从成分复杂的上清培养液中捕获目的蛋白一步纯化??就可以得到高纯度的目的蛋白。由于基质填料所偶联的特殊蛋白或者分子与目的蛋白??具有高亲和力，目的蛋白在成分复杂上清中即使浓度很低也可以捕获。??本实验主要使用的是镍离子纯化柱。镍离子纯化柱主要原理：在目的蛋白序列的??Ｎ端或Ｃ端加上六个特定的肽段序列：ＨＨＨＨＨＨ，?ＨＨＨＨＨＨ又称为ｈｉｓ标签［３８］。镍??柱基质上偶联的镍离子可以特异性的捕获ｈｉｓ标签，让目的蛋白与培养液上清其他复??杂杂质分离。Ｎｉ２＋与ｈｉｓ标签特异性结合原理：ｈｉｓ又称组氨酸，组氨酸Ｒ基上是五元??杂环化合物，Ｒ基可以Ｎｉ２＋结合。咪唑的空间结构和组氨酸上的Ｒ基类似，也可以??Ｎｉ２＋结合［％。因为在镍柱亲和层析中选用咪唑作为流动相。蛋白纯化上样前通常在含??有Ｈｉｓ标签的目的重组蛋白的培养上清中加入一定低浓度的咪唑，通常是２０ｍＭ，低??浓度的咪唑可以与培养上清中的无关杂质和Ｎｉ２＋的竞争性结合，避免杂质被镍离子吸??附，从而获得高纯度的目的重组蛋白。??１．２．２．１．２亲和层析标签??在所有的亲和标签中，ｈｉｓ标签最常用。Ｈｉｓ标签具有很多有点，例如配体简单，??７??
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【参考文献】：
硕士论文
[1]胸腺基质淋巴细胞生成素和调节性T细胞在慢性鼻—鼻窦炎中的表达及其临床意义[D]. 朱慧涛.山东大学 2015
[2]抗胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）全人源单链抗体的筛选及特性分析[D]. 朱建光.四川医科大学 2015
[3]人胸腺基质淋巴细胞生成素在特应性皮炎和湿疹发病机制中的作用[D]. 贾鑫璇.泸州医学院 2013
[4]亲和层析技术的研究及应用[D]. 王桂珍.暨南大学 2011
[5]哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的表达以及布地奈德、卡介苗干预的影响[D]. 王淑丽.苏州大学 2009
[6]胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在鼻息肉的表达及意义[D]. 赵菲.山西医科大学 2007
本文编号：3215683
【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１ＴＳＬＰ与哮喘的关系［２ＱＩ??Ｆｉｇ．?１－ｌＴｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＴＳＬＰ?ａｎｄ?ａｓｔｈｍａ?剛??
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【参考文献】：
硕士论文
[1]胸腺基质淋巴细胞生成素和调节性T细胞在慢性鼻—鼻窦炎中的表达及其临床意义[D]. 朱慧涛.山东大学 2015
[2]抗胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）全人源单链抗体的筛选及特性分析[D]. 朱建光.四川医科大学 2015
[3]人胸腺基质淋巴细胞生成素在特应性皮炎和湿疹发病机制中的作用[D]. 贾鑫璇.泸州医学院 2013
[4]亲和层析技术的研究及应用[D]. 王桂珍.暨南大学 2011
[5]哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的表达以及布地奈德、卡介苗干预的影响[D]. 王淑丽.苏州大学 2009
[6]胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在鼻息肉的表达及意义[D]. 赵菲.山西医科大学 2007
本文编号：3215683
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