白蚁球菌的复壮保藏和活性物质测定
发布时间：2021-06-07 11:25
药食用真菌以其独特的天然活性和药用价值越来越被科研工作者所重视,尤其昆虫寄生真菌如冬虫夏草、蛹虫草等已被研究证明具有极高的药用价值。白蚁球菌Fibularhizoctonia sp.是在圆唇散白蚁巢穴中发现的共生真菌,前期研究发现其菌丝体生长繁殖能力强、产量高,富含三萜类化合物和真菌多糖等生物活性物质,在真菌资源可利用方面,具有非常好的开发前景。本论文主要针对白蚁球菌的退化与复壮、菌丝体安全性和活性物质,开展白蚁球菌在扩大培养中质量检测指标和潜在药食用价值方面的研究,以期为白蚁球菌未来的开发提供依据。主要研究结果如下:（1）菌株复壮。为保持菌种的优良性状,通过对不同传代次数菌株质量的显微检测,制定了其优良性状的观察指标和保藏方法,菌丝结构粗壮强健、菌丝洁白、分枝繁茂具有良好扩散活性即可作为传代和保藏的母株,而且要严格控制传代次数在3代以内,当发生退化老化现象时应及时进行质量检测筛选,可通过改良的尖端分离复壮技术筛选保持原有繁殖能力的菌株。（2）菌丝体安全性。急性毒性试验表明,雌雄大鼠未有死亡,试验动物解剖显示各器官未出现明显的病理性变化雌雄大鼠经口最大耐受剂量（MTD）灌胃,显示该菌丝...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
第二章白蚁球菌的生殖方式及复壮培养19图2-1不同传代次数的菌核形态Fig.2-1Sclerotiamorphologyatdifferentpassages附注1：图A为原始正常菌核形状，图B为第3代转接后成熟菌核形状，图C、D分别为第4和第5代转接后成熟的菌核形状。2.4.2菌种的生殖方式扫描电镜下我们观察其菌丝体特征，发现液体培养条件下没有产生孢子，也没有产生孢子的孢子梗或孢子囊，因此我们推断该菌丝体的生长是通过极化的方式进行极性生长（polarizedgrowth），通过产生丰富的营养菌丝，依赖顶端的顶体（Spitzenkrper）等结构进行极性生长。目前，在实验室人工培养状态下尚未发现该菌丝体有进行其他方式的生长繁殖，但在图2-2中B和D图倍数下，我们可以清晰看到菌丝体明显具有锁状联合的突起结构存在，具有双核菌丝特征，与单核菌丝相比，它在基质上生长速度更快、菌丝结构更粗壮强舰分枝更加繁茂，是优良遗传性状的表现，为其扩大培养提供了生殖优势，同时双核菌丝也是担子菌类药（食）用营养菌丝存在的主要形式。
西北大学硕士学位论文20图2-2扫描电镜下的菌丝形态Fig.2-2Mycelialmorphologyunderscanningelectronmicroscope附注2：图A-D为菌丝体在不同倍数下的场发射扫描电镜图2.4.3尖端分离复壮菌株长势传代培养至3代以后的菌株在固体培养基继续培养时，菌丝日平均生长速度为0.43cm/d，远低于3代以前0.62cm/d的速度，菌核成熟期变为12d以上，传代次数越多生长越缓慢，甚至不再能全部形成成熟菌核；同时转接至液体条件下培养时，干燥的纯菌丝所得量由1.02g/80mL降低至0.56g/80mL及以下，菌丝体扩大培养出现明显下降。经改良后的尖端分离复壮培养，筛选出的菌株恢复至0.55～0.62cm/d的生长速度，且液体培养纯菌丝量平均可达到0.98g/80mL，继续作为菌株母种保藏并进行繁殖培养，但传代次数应当控制于三代以内。图2-3为菌种筛选培养过程中菌丝在不同时间段内的生长扩散情况，在筛选过程中，我们将具有扩散能力强的菌核及扩散出的尖端菌丝大量转接至固体培养基中，发现转接的绝大部分菌丝生长繁殖旺盛，在13d时长满固体培养基，但并不会成为成熟菌核，而是依旧具有扩散能力，继续分离培养时可再次形成圆球菌种菌核形态。
【参考文献】：
期刊论文
[1]HPLC法测定发酵冬虫夏草菌丝粉中麦角甾醇的含量[J]. 董笑菲. 现代食品. 2019(18)
[2]鸡枞菌食药用价值及产品研究现状[J]. 何容,罗晓莉,张沙沙,张微思. 农产品加工. 2019(14)
[3]药用炭角菌的研究进展[J]. 闻绍锋,曹瑶,杨林雷,周忠发,李荣春. 食药用菌. 2019(02)
[4]灵芝孢子粉中麦角甾醇的测定分析及其脂溶性成分指纹图谱[J]. 王金艳,冯娜,刘艳芳,严培兰,唐庆九. 菌物学报. 2018(09)
[5]食用菌菌种保藏方法的研究进展[J]. 刘远超,梁晓薇,莫伟鹏,卓丽君,胡惠萍,黄龙花,谢意珍. 中国食用菌. 2018(05)
[6]冬虫夏草繁育品和野生品虫草酸含量比较[J]. 李文庆,李文佳,董彩虹,周建桥,钱正明. 菌物研究. 2018(02)
[7]食用菌菌种退化机制及预防措施的最新研究进展[J]. 李亚娇,孙国琴,郭九峰,王海燕,庞杰. 黑龙江农业科学. 2018(02)
[8]重金属胁迫对罗非鱼血细胞DNA损伤的影响[J]. 张来军,李晓梅,陈永敢,陈攀,杭瑜瑜,公维洁. 海南热带海洋学院学报. 2017(05)
[9]白蚁危害程度评价探讨[J]. 胡寅,于保庭,沈坚,宋晓钢. 中华卫生杀虫药械. 2017(02)
[10]高效降解木质纤维素的白蚁肠道微生物组[J]. 李丹红,王誉,杨红. 微生物学报. 2017(06)
本文编号：3216486
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
第二章白蚁球菌的生殖方式及复壮培养19图2-1不同传代次数的菌核形态Fig.2-1Sclerotiamorphologyatdifferentpassages附注1：图A为原始正常菌核形状，图B为第3代转接后成熟菌核形状，图C、D分别为第4和第5代转接后成熟的菌核形状。2.4.2菌种的生殖方式扫描电镜下我们观察其菌丝体特征，发现液体培养条件下没有产生孢子，也没有产生孢子的孢子梗或孢子囊，因此我们推断该菌丝体的生长是通过极化的方式进行极性生长（polarizedgrowth），通过产生丰富的营养菌丝，依赖顶端的顶体（Spitzenkrper）等结构进行极性生长。目前，在实验室人工培养状态下尚未发现该菌丝体有进行其他方式的生长繁殖，但在图2-2中B和D图倍数下，我们可以清晰看到菌丝体明显具有锁状联合的突起结构存在，具有双核菌丝特征，与单核菌丝相比，它在基质上生长速度更快、菌丝结构更粗壮强舰分枝更加繁茂，是优良遗传性状的表现，为其扩大培养提供了生殖优势，同时双核菌丝也是担子菌类药（食）用营养菌丝存在的主要形式。
西北大学硕士学位论文20图2-2扫描电镜下的菌丝形态Fig.2-2Mycelialmorphologyunderscanningelectronmicroscope附注2：图A-D为菌丝体在不同倍数下的场发射扫描电镜图2.4.3尖端分离复壮菌株长势传代培养至3代以后的菌株在固体培养基继续培养时，菌丝日平均生长速度为0.43cm/d，远低于3代以前0.62cm/d的速度，菌核成熟期变为12d以上，传代次数越多生长越缓慢，甚至不再能全部形成成熟菌核；同时转接至液体条件下培养时，干燥的纯菌丝所得量由1.02g/80mL降低至0.56g/80mL及以下，菌丝体扩大培养出现明显下降。经改良后的尖端分离复壮培养，筛选出的菌株恢复至0.55～0.62cm/d的生长速度，且液体培养纯菌丝量平均可达到0.98g/80mL，继续作为菌株母种保藏并进行繁殖培养，但传代次数应当控制于三代以内。图2-3为菌种筛选培养过程中菌丝在不同时间段内的生长扩散情况，在筛选过程中，我们将具有扩散能力强的菌核及扩散出的尖端菌丝大量转接至固体培养基中，发现转接的绝大部分菌丝生长繁殖旺盛，在13d时长满固体培养基，但并不会成为成熟菌核，而是依旧具有扩散能力，继续分离培养时可再次形成圆球菌种菌核形态。
【参考文献】：
期刊论文
[1]HPLC法测定发酵冬虫夏草菌丝粉中麦角甾醇的含量[J]. 董笑菲. 现代食品. 2019(18)
[2]鸡枞菌食药用价值及产品研究现状[J]. 何容,罗晓莉,张沙沙,张微思. 农产品加工. 2019(14)
[3]药用炭角菌的研究进展[J]. 闻绍锋,曹瑶,杨林雷,周忠发,李荣春. 食药用菌. 2019(02)
[4]灵芝孢子粉中麦角甾醇的测定分析及其脂溶性成分指纹图谱[J]. 王金艳,冯娜,刘艳芳,严培兰,唐庆九. 菌物学报. 2018(09)
[5]食用菌菌种保藏方法的研究进展[J]. 刘远超,梁晓薇,莫伟鹏,卓丽君,胡惠萍,黄龙花,谢意珍. 中国食用菌. 2018(05)
[6]冬虫夏草繁育品和野生品虫草酸含量比较[J]. 李文庆,李文佳,董彩虹,周建桥,钱正明. 菌物研究. 2018(02)
[7]食用菌菌种退化机制及预防措施的最新研究进展[J]. 李亚娇,孙国琴,郭九峰,王海燕,庞杰. 黑龙江农业科学. 2018(02)
[8]重金属胁迫对罗非鱼血细胞DNA损伤的影响[J]. 张来军,李晓梅,陈永敢,陈攀,杭瑜瑜,公维洁. 海南热带海洋学院学报. 2017(05)
[9]白蚁危害程度评价探讨[J]. 胡寅,于保庭,沈坚,宋晓钢. 中华卫生杀虫药械. 2017(02)
[10]高效降解木质纤维素的白蚁肠道微生物组[J]. 李丹红,王誉,杨红. 微生物学报. 2017(06)
本文编号：3216486
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