产纤溶酶乳酸菌的筛选及酶学性质研究

发布时间：2021-06-16 17:21

　　血栓栓塞类疾病的发病率近年来不断上升。利用纤溶酶溶解是血栓栓塞类疾病治疗的重要方法,而微生物是非常重要的纤溶酶来源,且具有种类多、易于培养、繁殖快,人们的提取工艺也较为成熟的优点。乳酸菌广泛存在于发酵食品中,并且大多数乳酸菌是肠道内的有益微生物。因此,从传统发酵食品中筛选产纤溶酶的乳酸菌,并对其产生的纤溶酶进行研究,对开发预防血栓栓塞类疾病的保健食品具有重要的意义。本研究从传统发酵食品中分离筛选产溶纤酶的乳酸菌,对其进行形态特征、生理生化特征、16S rDNA基因序列综合鉴定,以确定菌株的种属;对目的菌株进行安全性的初步评估,选取安全的菌株进行后续研究。进行菌株的基本生物学特性的研究;对菌株所产的纤溶酶进行分离纯化,并对酶学性质进行研究;采用响应面的方法对该菌株进行产酶条件优化。主要研究结果如下:（1）从传统发酵食品中经初筛、纤维蛋白平板复筛,筛选出2株溶解纤维蛋白的菌株,分别命名为HYD09和HYN06。测定两株菌的发酵上清液酶活,其分别是115.3 U/mL和107.2 U/mL。根据菌株菌体特征、菌落特征、生理生化特征和16S rDNA序列比对结果,判定两株菌均为粪肠球菌（Ent... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

纤维蛋白平板复筛图

1：1号菌株发酵上清液；2：2号菌株发酵上清液；3：3号菌株发酵上清液；4：4号菌株发酵上清液；5：5号菌株发酵上清液；6：6号菌株发酵上清液；7：7号菌株发酵上清液；8：8号菌株发酵上清液；9：9号菌株发酵上清液。3.1.2 纤溶活性的测定分别取 31.25，62.5，125，250，500 U/mL 尿激酶标准品 20 μL 点样于纤维蛋白平板，37 ℃培养 18 h，测定溶解圈的垂直直径。以标准尿激酶浓度的对数值为横坐标，解圈面积的对数值为纵坐标作图，如图 3。由图得到标准曲线方程为 y=0.3409x-0.412相关系数 R2=0.9991。说明此标准曲线线性关系良好，可用于后续酶活的测定。

.1.3.2 生理生化鉴定参照《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》[85]以及《伯杰氏细菌鉴定手册》[86]YD09 和菌株 HYN06 进行生理生化鉴定，结果如表 11。表 11 细菌生理生化特征 Table 11 Physiological and biochemical characters特征 HYD09 HYN06 特征 HYD09 HYN运动性 - - 蜜二糖 - -精氨酸双水解酶 + + 棉子糖 - -葡萄糖- - 山梨糖 - -葡萄糖酸盐 + 乳糖 + +L-阿拉伯糖 半乳糖 + +D-阿拉伯糖醇 - - 10 ℃ 生长 生图 4 菌株 HYD09 的菌落形态Fig.4 The colony morphology ofstrain HYD09图 5 菌株 HYD09 的革兰氏镜检结果Fig.5 Results of the gram-microscopic examof the strain HYD09

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[2]益生性肠球菌的生物学特性和安全性评价[D]. 雷鸣.中国计量学院 2014
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[4]纳豆激酶高产菌株筛选及发酵工艺优化研究[D]. 王乐.山东轻工业学院 2009
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[6]产纳豆激酶菌株的分离筛选与鉴定[D]. 马明.山东农业大学 2007
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本文编号：3233479