基于新型标记物及异源竞争系统提高免疫学分析方法灵敏度的研究
发布时间：2021-06-24 04:57
免疫学分析方法因其独特的优势在检测领域备受关注。侧向流动免疫层析法（Lateral flow immunochromatography,LFI）和酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）作为免疫学分析中最常用且发展最为成熟的两大筛查平台,因其简便、快速、特异性强且成本低等优势被广泛应用于临床诊断、环境监控以及食品安全检测等领域。然而,这两种免疫学分析方法的最大局限在于其检测灵敏度偏低,无法对微量及痕量目标物进行准确的定性及定量分析,难以满足某些实际应用的需求。如何提高这两种免疫学分析方法的灵敏度已成为当前亟待解决的主要问题。既往研究表明寻找新型标记物以及优化抗原（Antigen,Ag）与单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb）亲和力是提高LFI和ELISA灵敏度的有效途径,本研究探讨了新型标记物及异源竞争系统提高检测灵敏度的可行性,从而拓宽了其在超灵敏检测中的应用范围。第一章绪论对包括LFI和ELISA在内的免疫学分析方法系统地进行了介绍;对本研究中所涉及到的喹诺酮类（FQs）及磺胺类（SAs）药物进行了分述,...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：169 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１时间分辨荧光ＬＦＩ检测生牛乳中ＳＭＺ原理阁??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ＥｕＮＰ－ＬＦＩ?ｆｏｒ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＭＺ?ｉｎ?ｒａｗ?ｍｉｌｋ??３７??
光免疫层析法超灵敏检测生牛乳中磺胺二甲基嘧啶残留??２．０１???ｐ?－?－?ＳＭＺ??ＢＳＡ??１６＿?／?ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ???ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ??Ｓ?１－２－／??ｃ?／?＾?＼??ＣＯ?／?＇??１?；?＼?＼??兰?０．８－?、?＼??＜?，＇??，?＇?＼??，?＇??０．４－?＾?＇??＼?????〇〇Ｊ?ｒ－—??ｎ??—??３００?４００?５００?６００??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??图２．３两种检测抗原的紫外表征图??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｔｈｅ?ＵＶ－ｖｉｓ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ｔｗｏ?ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ?ａｎｔｉｇｅｎｓ??２．３．３抗体与两种检测抗原的亲和力??生物膜层干涉是一种能够实时监测抗原抗体相互作用的技术，且不需要酶、??荧光物质或放射性物质等标记物的参与。检测过程中，抗体会与ＡＭＣ传感器表??面的Ｆｃ片段形成一层生物膜；当抗原与抗体反应时，该生物膜层的厚度会发生??改变［１１６］。仪器通过获取反应前后生物膜层厚度的改变值以及预先输入的反应体??系浓度，在内置数据处理软件的辅助下计算出抗原抗体之间的结合常数、解离常??数及亲和力常数。由图２．５所示，抗体与ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ和ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ的亲和??力常数分别为３．８７５Ｘ１０－９和３．２１４ｘｌ〇－５?Ｍ。由于抗体是由ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ作为免??疫原制备而来，因此两者的亲和力较大。ＳＭＺ与ＢＳＡ通过戊二醛法共价偶联制??备的ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ，由于连接臂的差异，导致ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ和ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ??的抗原决定簇处产生差异。ＢＬ１
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【参考文献】：
期刊论文
[1]新中国成立70周年食品安全演进、特征与愿景[J]. 张蓓,马如秋,刘凯明. 华南农业大学学报(社会科学版). 2020(01)
[2]食品安全问题和食品检测的发展及优化[J]. 孙正宏,王娟. 现代食品. 2019(24)
[3]超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中氟喹诺酮类药物[J]. 张梦雪,刘松雁,王志恒,高庆辉,刘冰,张琼. 今日畜牧兽医. 2019(12)
[4]肉制品中磺胺类药物残留危害及检测方法的研究进展[J]. 危梦,王卫,雷英杰,陈泓帆,刘文龙. 中国调味品. 2019(12)
[5]食品安全免疫层析检测技术研发及应用进展[J]. 王忠兴,郭玲玲,匡华. 生物产业技术. 2019(04)
[6]禽肉中磺胺药物残留分析及其累积性膳食暴露评估[J]. 曹爱巧,罗燕,丁艳玲,胡祥娜. 国外畜牧学(猪与禽). 2019(06)
[7]液相色谱-质谱联用技术在磺胺类药物残留检测中的应用[J]. 李翠萍. 食品安全导刊. 2019(06)
[8]HPLC-Q-TOF/MS法同时测定渔用饲料中磺胺类和喹诺酮类药物残留[J]. 柯庆青,李诗言,贝亦江,周凡,郑重莺,王鼎南,丁雪燕,王扬. 浙江农业科学. 2019(01)
[9]动物源性食品检测磺胺类残留ELISA试剂盒的研制[J]. 谢体波,龚维瑶,钟新敏,吴紫洁,程茹,张凯,袁光宇. 食品与发酵工业. 2018(12)
[10]酶联免疫法测定肌肉中氟喹诺酮类药物效果探讨[J]. 李建鲲,俞成山,刘冬梅,刘晓蓉. 食品安全质量检测学报. 2018(13)
博士论文
[1]提高免疫学检测灵敏度的新型信号传导系统研究[D]. 黄小林.南昌大学 2018
[2]食品中真菌毒素抗体制备及其快速检测方法研究[D]. 孔德昭.江南大学 2017
[3]四类重要抗生素残留的免疫快速检测方法的研究[D]. 陈燕妮.江南大学 2017
[4]量子点和金纳米颗粒的生物标志物体外检测方法的构建[D]. 武玉东.天津大学 2017
[5]三类重要渔药残留免疫快速检测技术[D]. 彭娟.江南大学 2017
[6]黄曲霉毒素纳米抗体研制及其免疫分析技术研究[D]. 何婷.中国农业科学院 2016
[7]氟喹诺酮类药物多残留免疫学检测技术研究[D]. 邢广旭.河南农业大学 2013
硕士论文
[1]五种肉类基质对磺胺二甲基嘧啶胶体金免疫层析法的影响及鸡肉前处理方法的研究[D]. 刘娜梅.南昌大学 2018
[2]具有聚集诱导发光和压致变色性质的磷光金属铱配合物的合成及其应用[D]. 蒋洋.东北师范大学 2018
[3]肉鸡组织中氟喹诺酮类抗生素快速检测的胶体金技术研究[D]. 孙晓峥.河北工程大学 2018
[4]牛病毒性腹泻病毒（BVDV）纳米抗体生物学特性研究及ELISA检测方法的建立[D]. 丁金花.石河子大学 2017
[5]免疫层析定量检测氟苯尼考和莱克多巴胺的研究[D]. 胡莉明.南昌大学 2017
[6]粮油中真菌毒素量子点纳米球同步检测技术研究[D]. 欧阳岁燕.中国农业科学院 2017
[7]兽药及非法添加物量子点标记检测试纸条研制[D]. 孔智辉.天津科技大学 2017
[8]用于食品安全检测的上转换荧光试纸条检测仪的设计[D]. 赵翔.河北工业大学 2016
[9]牛可食性组织25种喹诺酮类药物LC-MS/MS检测方法研究[D]. 权丹.华南农业大学 2016
[10]荧光免疫层析法快速定量检测前白蛋白和骨特异性碱性磷酸酶[D]. 杨亚杰.南昌大学 2016
本文编号：3246414
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：169 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１时间分辨荧光ＬＦＩ检测生牛乳中ＳＭＺ原理阁??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ＥｕＮＰ－ＬＦＩ?ｆｏｒ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＭＺ?ｉｎ?ｒａｗ?ｍｉｌｋ??３７??
光免疫层析法超灵敏检测生牛乳中磺胺二甲基嘧啶残留??２．０１???ｐ?－?－?ＳＭＺ??ＢＳＡ??１６＿?／?ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ???ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ??Ｓ?１－２－／??ｃ?／?＾?＼??ＣＯ?／?＇??１?；?＼?＼??兰?０．８－?、?＼??＜?，＇??，?＇?＼??，?＇??０．４－?＾?＇??＼?????〇〇Ｊ?ｒ－—??ｎ??—??３００?４００?５００?６００??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??图２．３两种检测抗原的紫外表征图??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｔｈｅ?ＵＶ－ｖｉｓ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ｔｗｏ?ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ?ａｎｔｉｇｅｎｓ??２．３．３抗体与两种检测抗原的亲和力??生物膜层干涉是一种能够实时监测抗原抗体相互作用的技术，且不需要酶、??荧光物质或放射性物质等标记物的参与。检测过程中，抗体会与ＡＭＣ传感器表??面的Ｆｃ片段形成一层生物膜；当抗原与抗体反应时，该生物膜层的厚度会发生??改变［１１６］。仪器通过获取反应前后生物膜层厚度的改变值以及预先输入的反应体??系浓度，在内置数据处理软件的辅助下计算出抗原抗体之间的结合常数、解离常??数及亲和力常数。由图２．５所示，抗体与ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ和ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ的亲和??力常数分别为３．８７５Ｘ１０－９和３．２１４ｘｌ〇－５?Ｍ。由于抗体是由ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ作为免??疫原制备而来，因此两者的亲和力较大。ＳＭＺ与ＢＳＡ通过戊二醛法共价偶联制??备的ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ，由于连接臂的差异，导致ＳＭＺ－ＤＺ－ＢＳＡ和ＳＭＺ－ＧＡ－ＢＳＡ??的抗原决定簇处产生差异。ＢＬ１
６５?２２０?２７６?３３０?３８５?４４０?４９?Ｓ?５５０??Ｓｉｚｅ?（ｄ．ｎｍ）??Ｃ?１－°１?｜?【）私?ｊ??Ｋ?０．８－??｜?＾?２２－??！０６－?ｆ??Ｉ?Ｉ?０???？〇．４－?ｌ??Ｉ?２?Ｉ－２２－??札，，？＞?一，—?一，??０．０?Ｊ?■■■■?■■■?■■■?—??????＼?＼?＼?＼?＼?＼?、、、、、、??＼?＼?＼?＼?＼?＇??々?＾?＾?％?々?＾?４?％?％??图２．４ＥｕＮＰ与ＥｕＮＰ－ｍＡｂ的表征：（Ａ）?ＥｕＮＰ的透射电镜图；（Ｂ）动态光散射监测ＥｕＮＰ??与?ＥｕＮＰ－ｍＡｂ?的水化粒径；（Ｃ）?ＥｕＮＰ?与?ＥｕＮＰ－ｍＡｂ?的?ＰＤＩ；?（Ｄ）?ＥｕＮＰ?与?ＥｕＮＰ－ｍＡｂ?的??Ｚｅｔａ电位。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｕＮＰ?ａｎｄ?ＥｕＮＰ－ｍＡｂ?ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．?（Ａ）?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ＥｕＮＰ．?（Ｂ）??Ｓｉｚｅ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｕＮＰ?ａｎｄ?ＥｕＮＰ－ｍＡｂ?ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ?ｂｙ?ｄｙｎａｍｉｃ?ｌｉｇｈｔ?ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ．?（Ｃ）?ＰＤＩ?ｏｆ??ＥｕＮＰ?ａｎｄ?ＥｕＮＰ－ｍＡｂ?ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．?（Ｄ）?Ｚｅｔａ?ｐｏｔｅｎｔｉａｌ?ｏｆ?ＥｕＮＰ?ｂｅｆｏｒｅ?ａｎｄ?ａｆｔｅｒ?ｃｏｕｐｌｉｎｇ?ｗｉｔｈ??ｍＡｂ．??４５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]新中国成立70周年食品安全演进、特征与愿景[J]. 张蓓,马如秋,刘凯明. 华南农业大学学报(社会科学版). 2020(01)
[2]食品安全问题和食品检测的发展及优化[J]. 孙正宏,王娟. 现代食品. 2019(24)
[3]超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中氟喹诺酮类药物[J]. 张梦雪,刘松雁,王志恒,高庆辉,刘冰,张琼. 今日畜牧兽医. 2019(12)
[4]肉制品中磺胺类药物残留危害及检测方法的研究进展[J]. 危梦,王卫,雷英杰,陈泓帆,刘文龙. 中国调味品. 2019(12)
[5]食品安全免疫层析检测技术研发及应用进展[J]. 王忠兴,郭玲玲,匡华. 生物产业技术. 2019(04)
[6]禽肉中磺胺药物残留分析及其累积性膳食暴露评估[J]. 曹爱巧,罗燕,丁艳玲,胡祥娜. 国外畜牧学(猪与禽). 2019(06)
[7]液相色谱-质谱联用技术在磺胺类药物残留检测中的应用[J]. 李翠萍. 食品安全导刊. 2019(06)
[8]HPLC-Q-TOF/MS法同时测定渔用饲料中磺胺类和喹诺酮类药物残留[J]. 柯庆青,李诗言,贝亦江,周凡,郑重莺,王鼎南,丁雪燕,王扬. 浙江农业科学. 2019(01)
[9]动物源性食品检测磺胺类残留ELISA试剂盒的研制[J]. 谢体波,龚维瑶,钟新敏,吴紫洁,程茹,张凯,袁光宇. 食品与发酵工业. 2018(12)
[10]酶联免疫法测定肌肉中氟喹诺酮类药物效果探讨[J]. 李建鲲,俞成山,刘冬梅,刘晓蓉. 食品安全质量检测学报. 2018(13)
博士论文
[1]提高免疫学检测灵敏度的新型信号传导系统研究[D]. 黄小林.南昌大学 2018
[2]食品中真菌毒素抗体制备及其快速检测方法研究[D]. 孔德昭.江南大学 2017
[3]四类重要抗生素残留的免疫快速检测方法的研究[D]. 陈燕妮.江南大学 2017
[4]量子点和金纳米颗粒的生物标志物体外检测方法的构建[D]. 武玉东.天津大学 2017
[5]三类重要渔药残留免疫快速检测技术[D]. 彭娟.江南大学 2017
[6]黄曲霉毒素纳米抗体研制及其免疫分析技术研究[D]. 何婷.中国农业科学院 2016
[7]氟喹诺酮类药物多残留免疫学检测技术研究[D]. 邢广旭.河南农业大学 2013
硕士论文
[1]五种肉类基质对磺胺二甲基嘧啶胶体金免疫层析法的影响及鸡肉前处理方法的研究[D]. 刘娜梅.南昌大学 2018
[2]具有聚集诱导发光和压致变色性质的磷光金属铱配合物的合成及其应用[D]. 蒋洋.东北师范大学 2018
[3]肉鸡组织中氟喹诺酮类抗生素快速检测的胶体金技术研究[D]. 孙晓峥.河北工程大学 2018
[4]牛病毒性腹泻病毒（BVDV）纳米抗体生物学特性研究及ELISA检测方法的建立[D]. 丁金花.石河子大学 2017
[5]免疫层析定量检测氟苯尼考和莱克多巴胺的研究[D]. 胡莉明.南昌大学 2017
[6]粮油中真菌毒素量子点纳米球同步检测技术研究[D]. 欧阳岁燕.中国农业科学院 2017
[7]兽药及非法添加物量子点标记检测试纸条研制[D]. 孔智辉.天津科技大学 2017
[8]用于食品安全检测的上转换荧光试纸条检测仪的设计[D]. 赵翔.河北工业大学 2016
[9]牛可食性组织25种喹诺酮类药物LC-MS/MS检测方法研究[D]. 权丹.华南农业大学 2016
[10]荧光免疫层析法快速定量检测前白蛋白和骨特异性碱性磷酸酶[D]. 杨亚杰.南昌大学 2016
本文编号：3246414
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