脯氨酸氨肽酶在枯草芽孢杆菌中表达、发酵优化及应用
发布时间：2021-06-28 23:46
脯氨酸氨肽酶（PAP;E.C.3.4.11.5）是一种能特异地水解蛋白质或多肽N端脯氨酸残基的外肽酶,其在食品蛋白质水解脱苦、生物活性肽制备方面有着重要应用,同时在生物医药、检测方面的应用前景潜力巨大。本论文将来源于米曲霉的脯氨酸氨肽酶cDNA为模板,成功构建了产带有组氨酸标签的脯氨酸氨肽酶的重组枯草芽孢杆菌。培养基经单因素及正交实验获得优化组合:酵母膏60 g·L-1,葡萄糖20 g·L-1,鱼粉蛋白胨18.75 g·L-1,NH4Cl 6.25 g·L-1,KH2PO4 2.31 g·L-1,K2HPO4 12.54 g·L-1。优化后PAP总酶活达到103.1 U·mL-1。添加0.1%的植酸到培养基中PAP总酶活提高到111.1U·m L-1。摇瓶培养条件优化为初始pH 7.0、4%接种量、50 ...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒构建流程图
电泳结果如图 3-2所示。从图可以看出转化子中重组质粒为模板的 PCR 产物与原 PCR 产物条带一致（图3-2 a），进一步双酶切得到两个条带，其中一条与 PCR 产物条带一致（图 3-2 b），表明重组质粒构建成功，将重组质粒送生工测序，结果与原序列一致无碱基突变，可以进行下步工作。
图 3-2 转化子中重组质粒 PCR 扩增（a）和重组质粒双酶切验证（b）2：Marker；1~4：转化子中重组质粒的 PCR；5：PCR 产物；b：M1、M2：MBamH I 单酶切；2：Mlu I 单酶切；3：BamH I 和 Mlu I 双酶切；4：PCR 产物CR amplification of recombinant plasmid from transformants (a) and identificationrecombinant plasmid digested by BamH I and Mlu I (b)Marker; 1~4: PCR of recombinant his tag -pap from transformants; 5: PCR producter; 1: digested by BamH I; 2: digested by Mlu I; 3: digested by BamH I and Mlu I; 4products粒转化 B. subtilis WB600质粒电转化 B. subtilis WB600 感受态细胞，在 LBK 平板上筛选转化行菌落 PCR 及提取重组质粒双酶切验证，结果如图 3-3 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌ZJS18发酵生产γ-聚谷氨酸培养条件的优化[J]. 于平,黄星星,张一舒. 食品科学. 2018(22)
[2]亮氨酸氨肽酶的制备及在大米肽脱苦中的协同应用[J]. 朱强,吴警涛,田亚平. 食品工业科技. 2017(19)
[3]枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化[J]. 李洪康,李由然,李赢,顾正华,丁重阳,石贵阳,张梁. 食品与发酵工业. 2016(05)
[4]植酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的作用研究[J]. 刘秀侠,穆熙军,赵效南,王鑫,孙学森,谷巍. 中国酿造. 2015(06)
[5]氨肽酶对罗非鱼下脚料水解液脱苦的研究[J]. 李静,邓毛程,陆志鸿,王瑶,陈维新,庄妍玲. 食品研究与开发. 2014(21)
[6]牛乳中嗜冷菌危害及其检测方法研究进展[J]. 朱萍,李楠,任婧. 食品安全质量检测学报. 2014(10)
[7]条斑紫菜蛋白酶解产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂纯化及特性[J]. 周锋,刘冬冬,周楠迪,田亚平. 天然产物研究与开发. 2014(09)
[8]枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的发酵过程优化[J]. 刘文涛,刘柏宏,张娟,李江华,陈坚,堵国成. 食品与生物技术学报. 2014(05)
[9]氨肽酶N在结直肠癌中的表达及其临床意义[J]. 陈亚,崔淑香,孟庆大,张俊峰,潘荣辉. 现代生物医学进展. 2014(10)
[10]重组氨肽酶底物特异性及协同水解玉米蛋白质[J]. 林颖,孔峰,田亚平. 食品与生物技术学报. 2013(12)
博士论文
[1]海产低值鱼深度酶解工艺与机理研究[D]. 崔春.华南理工大学 2005
硕士论文
[1]脯氨酸氨肽酶在毕赤酵母中的高效表达及其特性表征[D]. 杨宏宇.江南大学 2017
[2]枯草芽孢杆菌脯氨酸氨肽酶高效表达与特性表征[D]. 汪克红.江南大学 2016
[3]米曲霉脯氨酸氨肽酶基因克隆及其异源表达[D]. 丁国伟.江南大学 2014
[4]耐热氨肽酶产生菌的筛选、酶的特性及基因克隆[D]. 吴延涛.江南大学 2014
[5]产氨肽酶甲基营养型芽孢杆菌的鉴定、发酵优化及酶学性质研究[D]. 向军.华南理工大学 2012
[6]淡水鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究[D]. 刘冰心.集美大学 2007
[7]枯草芽孢杆菌氨肽酶的研究[D]. 须瑛敏.江南大学 2005
本文编号：3255272
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒构建流程图
电泳结果如图 3-2所示。从图可以看出转化子中重组质粒为模板的 PCR 产物与原 PCR 产物条带一致（图3-2 a），进一步双酶切得到两个条带，其中一条与 PCR 产物条带一致（图 3-2 b），表明重组质粒构建成功，将重组质粒送生工测序，结果与原序列一致无碱基突变，可以进行下步工作。
图 3-2 转化子中重组质粒 PCR 扩增（a）和重组质粒双酶切验证（b）2：Marker；1~4：转化子中重组质粒的 PCR；5：PCR 产物；b：M1、M2：MBamH I 单酶切；2：Mlu I 单酶切；3：BamH I 和 Mlu I 双酶切；4：PCR 产物CR amplification of recombinant plasmid from transformants (a) and identificationrecombinant plasmid digested by BamH I and Mlu I (b)Marker; 1~4: PCR of recombinant his tag -pap from transformants; 5: PCR producter; 1: digested by BamH I; 2: digested by Mlu I; 3: digested by BamH I and Mlu I; 4products粒转化 B. subtilis WB600质粒电转化 B. subtilis WB600 感受态细胞，在 LBK 平板上筛选转化行菌落 PCR 及提取重组质粒双酶切验证，结果如图 3-3 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌ZJS18发酵生产γ-聚谷氨酸培养条件的优化[J]. 于平,黄星星,张一舒. 食品科学. 2018(22)
[2]亮氨酸氨肽酶的制备及在大米肽脱苦中的协同应用[J]. 朱强,吴警涛,田亚平. 食品工业科技. 2017(19)
[3]枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化[J]. 李洪康,李由然,李赢,顾正华,丁重阳,石贵阳,张梁. 食品与发酵工业. 2016(05)
[4]植酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的作用研究[J]. 刘秀侠,穆熙军,赵效南,王鑫,孙学森,谷巍. 中国酿造. 2015(06)
[5]氨肽酶对罗非鱼下脚料水解液脱苦的研究[J]. 李静,邓毛程,陆志鸿,王瑶,陈维新,庄妍玲. 食品研究与开发. 2014(21)
[6]牛乳中嗜冷菌危害及其检测方法研究进展[J]. 朱萍,李楠,任婧. 食品安全质量检测学报. 2014(10)
[7]条斑紫菜蛋白酶解产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂纯化及特性[J]. 周锋,刘冬冬,周楠迪,田亚平. 天然产物研究与开发. 2014(09)
[8]枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的发酵过程优化[J]. 刘文涛,刘柏宏,张娟,李江华,陈坚,堵国成. 食品与生物技术学报. 2014(05)
[9]氨肽酶N在结直肠癌中的表达及其临床意义[J]. 陈亚,崔淑香,孟庆大,张俊峰,潘荣辉. 现代生物医学进展. 2014(10)
[10]重组氨肽酶底物特异性及协同水解玉米蛋白质[J]. 林颖,孔峰,田亚平. 食品与生物技术学报. 2013(12)
博士论文
[1]海产低值鱼深度酶解工艺与机理研究[D]. 崔春.华南理工大学 2005
硕士论文
[1]脯氨酸氨肽酶在毕赤酵母中的高效表达及其特性表征[D]. 杨宏宇.江南大学 2017
[2]枯草芽孢杆菌脯氨酸氨肽酶高效表达与特性表征[D]. 汪克红.江南大学 2016
[3]米曲霉脯氨酸氨肽酶基因克隆及其异源表达[D]. 丁国伟.江南大学 2014
[4]耐热氨肽酶产生菌的筛选、酶的特性及基因克隆[D]. 吴延涛.江南大学 2014
[5]产氨肽酶甲基营养型芽孢杆菌的鉴定、发酵优化及酶学性质研究[D]. 向军.华南理工大学 2012
[6]淡水鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究[D]. 刘冰心.集美大学 2007
[7]枯草芽孢杆菌氨肽酶的研究[D]. 须瑛敏.江南大学 2005
本文编号：3255272
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3255272.html
最近更新
教材专著
