重组双加氧酶合成羟基异亮氨酸的转化系统与过程调控

发布时间：2021-08-08 12:51

　　4-羟基异亮氨酸（4-hydroxyisoleucine,4-HIL）是一种具有促进胰岛素分泌、调节血脂异常、促进脂肪代谢等功能的非蛋白质氨基酸,在治疗糖尿病方面具有潜在的价值。实验前期研究已从土壤中筛选获得一株含异亮氨酸双加氧酶（ido）基因的芽孢杆菌,并在大肠杆菌中克隆表达,构建了将L-异亮氨酸（L-isoleucine,L-ILe）一步催化合成4-HIL的重组菌。本研究基于重组IDO催化异亮氨酸羟基化的性质和条件对反应过程进行调控,扩大转化体系探究高底物浓度下的转化效率,进一步提高4-HIL的产量。其主要研究结果如下:（1）外源添加L-ILe,以重组大肠杆菌E.coli BL21/pET28a-ido作为催化酶源,基于IDO催化异亮氨酸羟基化的生物转化条件,在摇瓶水平进行单因素优化,发现采用诱导16 h的静止态全细胞作为催化剂的转化效果最佳,且在α-酮戊二酸（α-KG）与底物摩尔浓度比为1:1,Fe²⁺2 g·L^-1、Vc 5 mmol·L^-1条件下,全细胞催化效率最好,在300mmol·L^-... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

加氧酶催化典型的反应Fig.1-3Oxygenasecatalyzestypicalreactions

图 2-1 底物 L-Ile 浓度与峰面积的关系Fig. 2-1 Relationship between L-Ile concentrarion and peak area得到峰面积-L-Ile 浓度标准曲线方程为： 0.0185 R2=0.9994面积 y：L-Ile 浓度（g·L-1）

图 2-2 产物 4-HIL 浓度与峰面积的关系Fig. 2-2 Relationship between 4-HILconcentration and peak area得到峰面积-4-HIL 浓度标准曲线方程为：7 0.1024 R2=0.9991峰面积 y：4-HIL 浓度（g·L-1）

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]重组L-异亮氨酸双加氧酶酶学特性及其重组体系合成羟基异亮氨酸的研究[D]. 文方.江南大学 2016
[2]微生物异亮氨酸双加氧酶的筛选和表达及其转化合成羟基异亮氨酸[D]. 付敏杰.江南大学 2014



本文编号：3329989