大肠杆菌生物合成高谷氨酸

发布时间：2021-08-10 14:52

　　高谷氨酸（α-氨基己二酸）,是一种非蛋白质氨基酸,被广泛应用在医药化工等领域中,但目前主要依靠化学合成法生产,存在着成本高、收率低、污染严重的问题,因此采用经济、绿色友好的生物合成法来生产α-氨基己二酸具有研究价值。本论文设计了两条α-氨基己二酸的生物合成途径,通过体外酶活测试完成外源酶的筛选,将其导入大肠杆菌体内进行发酵,成功检测到目标产物,实现生物合成α-氨基己二酸,最后利用代谢工程改造大肠杆菌逐步提高目标产物产量。具体研究如下:1、两条合成路径均是分两步生成目标产物,第一步以赖氨酸为底物生成α-氨基己二酸-δ-半醛（AASA）,第二步用α-氨基己二酸-δ-半醛脱氢酶（AASADH）催化AASA生成α-氨基己二酸。首先测定酵母氨酸途径中第一步所用酿酒酵母（Sc）和阿维菌素链霉菌（Sa）来源的赖氨酸酮戊二酸还原酶（LKR）和酵母氨酸脱氢酶（SDH）的体外活性,发现只有酿酒酵母来源的ScLKR和ScSDH有体外活性。测定转氨酶途径中第一步所用红城红球菌（Re）和黄杆菌属（F1）来源的赖氨酸氨基转移酶（LAT）,发现均有活性且黄杆菌属来源的FlLAT活性较高转化速率可达17.47±0.3... 

【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－２质粒ｐＱＬ０２双酶切验证

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第二章酵母氨酸途径屮酶的筛选及体外酶话分析??０．２６?ｍｇ／ｍＬ、ＳａＳＤＨ?的浓度为?０．２２?ｍｇ／ｍＬ、ＳｃＬＫＲ?的浓度为?０．９０?ｍｇ／ｍＬ、ＳｃＳＤＨ??的浓度为０．４４?ｍｇ／ｍＬ。??ＢＣ?Ａ定量法测定蛋白浓度??０４－?ｙ＝０．７５１？ｒｘ??Ｒ２＝０．９９８６１?ｙ??〇？?０３－??ｉ?，??｜〇２－??。。１＾???００?０?２?０．４?０?６??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐｒｏｔｅｉｎ?（ｍｇ／ｍｉ）??图２－６蛋白浓度测定标准曲线。??Ｆｉｇ．２－６?Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．??２．４．４ＳａＬＫＲ、ＳｃＬＫＲ动力学常数测定??通过不断改变底物赖氨酸浓度，用非线性回归的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ方程进行??动力学测量，得到其动力学常数Ｖｍａｘ、／，再通过计算得到和值。??每组实验设置三个平行。??＼?Ｓｄ．ｋＲ（ＮＡＩ）Ｈ）??ｇ?ＳｃＬＩＣＲ（＼ＡＤＰＩｈ???０．００４－?＾??ｇ?／?ｇ?０．１Ｗ４－?／??％?〇?／?｜?Ｊ??Ｊ?０．００２－?／??／?／??０．０００＜?ｄ?０．０００？?ｄ??０?２?４?０?５?１０??［Ｓ｜（ｍ＼〇?丨?Ｓｌｍ＇ｌ??图２－７?ＳｃＬＫＲ酶促反应速率与底物浓度关系曲线。（Ａ＞?ＳｃＬＫＲ（ＮＡＤＨ）：?（Ｂ）?ＳｃＬＫＲ（ＮＡＤＰＨ）。??Ｆｉｇ．２－７?Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＳｃＬＫＲ?ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｒｅｌａｔｉｏｎ?ｒａｔｅ?ａｎｄ?ｓｕｂｓｔｒａ

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3334263