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油酸水合酶的分子改造及羰基硬脂酸合成反应优化

发布时间:2021-08-16 22:26
  油酸是一种可再生的生物质资源,通过油酸水合酶(PaOH)的催化可以转化为10-羟基硬脂酸;后者在醇脱氢酶(ADH)作用下可转化为10-羰基硬脂酸,再通过进一步酶法转化,可以生产中等链长(C8-C10)的脂肪醇、脂肪酸、羟基脂肪酸、氨基脂肪酸及二元酸。因此,10-羟基硬脂酸和10-羰基硬脂酸成为油酸生物炼制过程的关键中间体,同时也是高价值的精细化学品。ADH催化的氧化反应需要辅酶NAD+的参与,在反应过程中需要对NAD+进行循环再生以降低反应成本。本论文对油酸水合酶PaOH进行分子改造,提高了其催化活性及热稳定性;选择NADH氧化酶催化NAD+再生,并通过耦联过氧化氢酶,原位分解双氧水提供氧气作为NAD+再生的辅底物,降低了 10-羰基硬脂酸的生产成本。(1)建立油酸水合酶高通量筛选方法。利用M luteus WIUJH20来源的MlADH,催化10-羟基硬脂酸脱氢反应将NAD+还原为NADH,加入过量的吩嗪乙基硫酸盐(PES)和噻唑蓝(MTT)与NADH反应,可定量地生成一种蓝紫色产物,该物质在580 nm处具有可见光吸收峰,可使用分光光度计进行定量检测。此方法对10-羟基硬脂酸的检测... 

【文章来源】:华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:74 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

油酸水合酶的分子改造及羰基硬脂酸合成反应优化


图2.2?A44〇随底物浓度变化散点图??Figure?2.2?Scatterplot?of?A440?varies?with?substrate?concentration??

散点图,油酸,量变,散点图


第2〇页?华东理工大学硕士学位论文??0.7?-I???0.6?*?*??0.5?-??f?0.4?-??2??〇?0.3?-?#??豸?0.2?:??????0.1?-????0?*?l,?t?*??i?^??(??1?t??????0?0.2?0.4?0.6?0.8?1??PflOH?(U?mLJ)??图2.3?AA34D随油酸水合酶PflOH上载量变化散点图??Figure?2.3?Scatterplot?of?AA340?varies?with?PaOH?concentration.??2.4.2.3?NADH化学转化终点显色法??MADH催化10-羟基硬脂酸转化为10-羰基硬脂酸,NAD+被还原为NADH。在后??续化学耦联反应中,还原态的PES将从NADH中得到的电子提供给氧化态的MTT,同??时再生NADH,如此不断循环直至10-羟基硬脂酸耗尽,生成等摩尔量的还原态MTT,??后者呈蓝紫色,可通过肉眼大致分辨或使用分光光度法在580?nm处进行检测,以此间??接计算10-羟基硬脂酸的浓度。??显色反应在96孔酶标板中进行,每孔反应体系的总体积为200?pL,包括:60?(aL??磷酸钾缓冲液(100?mM,?pH?7.5)、20?pL油酸(2?mM)、20此不同浓度(1-16?mM)的10-羟??基硬脂酸、0.1%?〇/v)吐温-80。其中油酸和10-羟基硬脂酸预先与吐温-80混合,超声至??完全乳化为止。然后加入?100?吐的?NAD+(2mM)、MADHpOOU.mL-1)、PES(lmM)、??MTT(2mM)的混合液,将96孔酶标板放置于

趋势图,突变体,比活力,趋势图


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【参考文献】:
期刊论文
[1]天然胶乳中蛋白质和磷脂对橡胶分子结构的影响[J]. 吴龙梅,王勃翔,曲鹏,周荣杰,廖双泉.  高分子通报. 2015(06)
[2]油酸及其衍生物的应用[J]. 刘刚,努尔买买提·阿不都克里木,吾满江·艾力,刘远凤,陶敏芳.  新疆师范大学学报(自然科学版). 2004(01)

硕士论文
[1]油酸水合酶与脱氢酶级联催化制备10-羰基硬脂酸[D]. 吴艳霞.华东理工大学 2019



本文编号:3346490

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