新霉素高产菌株的选育及其发酵过程优化

发布时间：2021-08-27 00:48

　　新霉素是在弗氏链霉菌发酵过程中产生的一种广谱水溶性氨基糖苷类抗生素,对部分革兰氏菌的生长具有较好的抑制作用。其治疗范围狭窄,与其它氨基糖苷类抗生素药物一样具有潜在毒性,可能引起耳毒性和肾毒性。但硫酸新霉素（新霉素的硫酸盐）作为一种理想的干扰蛋白质合成的杀菌剂,在临床和兽医学中得到了广泛的应用。本研究首先基于多孔板发酵与酶标仪检测,建立及优化硫酸新霉素产生菌高通量选育模型,提高诱变后突变株的筛选效率;并经过6轮ARTP诱变结合链霉素抗性筛选,获得高产突变株Sf6-2;最后利用响应面法对发酵培养基进行优化,成功提高了高产菌株Sf6-2的发酵效价。主要研究内容和结果如下:（1）硫酸新霉素产生菌高通量选育模型的建立及优化。对影响酶标仪检测的主要影响因素1.0×10-4 mol/L曲利本蓝溶液的添加量（μL）进行优化,并建立相应的分光光度法;对适用高通量筛选模型的微孔板种类进行选择,并对其发酵条件进行正交优化。结果表明,硫酸新霉素在1.284～10.272 U/mL范围内,只有当曲利本蓝溶液的添加量为500 μL时,吸光度与样品浓度呈良好的线性关系,线性方程为:Y=0.0320X-0.0262（... 

【文章来源】：安徽工程大学安徽省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１新霉素Ｂ?（左）和Ｃ?（右）化学结构式??Ｆｉ．?１－１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｆｏｒｍｕｌａ?ｏｆ?Ｎｅｏｍｃｉｎ?Ｂ?ａｎｄ?Ｃ??

１．４新霉素的测定方法??１．４．１微生物法??新霉素的微生物测定方法主要是管碟法和比浊法。??管碟法［２５］：在试验过程中，微生物在琼脂培养基的表面上生长，微生物形??成的抑菌圈（即抗生素扩散区域）直径会与抗生素浓度成正比。尽管此方法常被??用于抗生素的效价测定之中，但是管碟法与比浊法相比也有缺点，如灵敏度小、??孵育时间长（约１８小时）以及由于扩散问题而造成的限制。??比浊法［２６］：在用此方法进行效价测定时，根据不同抗生素浓度的液体培养??基中微生物生长情况不同，会提供了一个可见的浊度，可在适当的条件下培养后??进行光度测量。相比于管碟法，用比浊法测定培养液中微生物的生长提供了更快??的速度（约６小时）并且没有扩散问题的限制。但是此方法微生物的选择、培养??基成分、接种比例、和新霉素浓度等都会影响微生物的生长，由于这些限制因素??

生高活性粒子直接作用于细胞中生物大分子，对ＤＮＡ造成损伤，从而性突变。》３〇６１？１＾？３１１等［４７］基于抗性平板与９６微孔板，建立高通量筛采用ＡＲＴＰ诱变工程菌－枯草芽孢杆菌以提高尿苷的产量，最终体Ｈ２６在摇瓶中发酵３０?ｈ，在补料分批发酵４８?ｈ后，分别积累５．７?ｇ／３０．３?ｇ／Ｌ尿苷，是出发菌株的４．４倍和８．７倍。??ＡＲＴＰ自２０１３年问世以来，己经在中国、新加坡、日本等国家得到了用。目前使用ＡＲＴＰ进行诱变育种己达一百多种微生物、动植物，都获的遗传优良性状。ＡＲＴＰ服务于８０余家国内外生物技术企业和科研院直接经济效益７４６７万元。使用本仪器的高校、研究院所和企业等单位，文学术论文５０４篇，申请专利５９项，应用ＡＲＴＰ产生的经济效益达６。由于此项技术在各领域中的成功应用以及社会上产生的良好经济效应，术已于２０１４？２０１７年相继获得中国专利奖金奖、第４５届日内瓦国际发金奖和泰国优秀发明奖。??＊＊＊＊＊?？■＊??


本文编号：3365304