适应性进化与培养条件的优化相结合提高安斯菌素的产量

发布时间：2021-08-28 05:03

　　安丝菌素是一类由珍贵束丝放线菌橙色亚种（Actinosynnema pretiosum ssp.auranticum ATCC31 565）产生的大环内酰胺类抗生素,具有很强的抗肿瘤活性,在所有安丝菌素衍生物中,安丝菌素P-3（AP-3）的活性最高。目前已上市的治疗HER-2阳性晚期转移性乳腺癌的Kadcyla（T-DM1）是由曲妥珠单抗和美登素衍生物DM1偶联而成的,而安丝菌素即是一类美登素。当前安丝菌素的产量较低,高纯度的安丝菌素极为昂贵,因此,提高AP-3产量已成为当务之急。本研究采用适应性进化和培养条件优化的方法初步探索了珍贵橙色束丝放线菌中促进安丝菌素生产的策略。首先,以珍贵橙色束丝放线菌为出发菌株进行适应性进化。采用适应性进化的策略提高AP-3产量需要合适的胁迫压力,本研究探索了四种不同的胁迫压力,即纯化的AP-3、利福平、链霉素和巴龙霉素,并最终筛选出两株进化高产菌株Str4和Par 1。这两株菌发酵7天AP-3产量分别提高33.4%和31.7%,得率分别提高52.2%和46.4%。其次,对高产进化菌株的相关基因进行转录水平分析。选取安丝菌素生物合成基因簇上的一些关键基因... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．５安丝菌素生物合成的ＰＫＳ途径［１５】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ＰＫＳ?ｐａｔｈｗａｙ［１５】??

?＾２?ｘＬ－／??图１．５安丝菌素生物合成的ＰＫＳ途径［１５】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ＰＫＳ?ｐａｔｈｗａｙ［１５】??（３）?ＰＫＳ后修饰过程??如图１．６所示，Ｓｐｉｔｅｌｌｅ等ｔ１６徕用相关基因的敲除方法探明了整个ＰＫＳ的后修饰过??程、相关基因的功能及其对应的产物。ＰＫＳ整个后修饰过程不是按顺序依次装配相应基??团，而是呈交叉网状结构，整个过程中涉及的基因及其功能也多种多样，如似??编码甲基转移酶，主要是分别负责１０和１１的甲基转移过程；编码环氧酶，主要??负责７的环氧化过程；编码卤化酶，主要负责９的氯代过程；编码酰基转??移酶，主要负责６的酰基转移过程；ｏｓｍ２／编码氨甲酰转移酶，主要负责４的氨甲酰转??移过程；而编码糖基转移酶，主要负责将１０转变成平行于ＡＰ－３的另一种产物安??丝菌素糖苷Ｐ－３?（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｏｓｉｄｅ?Ｐ－３），因此图１．６并未列出。其中ａｓｗ／９编码的３－氧??－酰基转移酶作用的底物比较广泛

图１．８适应性进化ｌ４９】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．８?Ａｄａｐｔｉｖｅ?ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ＾４９］??

【参考文献】：
期刊论文
[1]林可霉素发酵工艺优化降低B组分[J]. 李华,张立,王鑫,王建国,谢书琴.  山东化工. 2016(08)
[2]游动放线菌产雷帕霉素的发酵工艺改进[J]. 陈昌发,黄鹤,张长清,胡海峰.  中国医药工业杂志. 2014(10)
[3]微生物核糖体工程研究进展[J]. 谢庶洁,肖静,徐俊.  微生物学报. 2009(08)
[4]甜菜碱杀灭微生物效果及毒性的试验观察[J]. 邱立军,沈芄,沈宗林,李强,宁培勇.  中国消毒学杂志. 1999(04)
[5]甜菜碱（Betaine）的研究概况[J]. 江泽荣,包文芳,范知宇,高顺国.  沈阳药学院学报. 1989(02)



本文编号：3367850