牡丹类2S白蛋白的分离纯化、鉴定及性质研究

发布时间：2021-09-19 02:33

　　2S白蛋白（2S albumin）是一种广泛分布于植物种子中的低分子量储藏蛋白。该蛋白含有8个保守半胱氨酸残基,根据自身特性可形成两个分子间二硫键和两个分子内二硫键,使所属蛋白质具有稳定和紧密的结构,而且该蛋白具有较好的热稳定性。该蛋白家族成员具有多种功能,包括抗菌、抗癌、蛋白酶抑制剂和植物防御功能等。牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）是我国特有的一种极具观赏价值和药用价值的芍药属灌木,具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗凝血、降血糖等功效。牡丹籽粕作为牡丹籽榨油后的副产物,含有丰富的功能性物质,其中蛋白质是主要的功能成分之一,含量约30%左右。对牡丹籽粕功能蛋白的研究,不仅能丰富牡丹籽蛋白的基础研究,而且有助于提高籽粕的附加值,延长牡丹籽的产业链。本文以牡丹籽粕为原料,从牡丹籽粕水溶性蛋白（PSMP）中分离纯化出一种牡丹类2S白蛋白（Ps-2S-Alb）,利用质谱和从头测序技术进行鉴定,利用生物信息学手段对其结构进行了分析,同时研究了其抗氧化活性。具体内容如下:1. 牡丹籽粕水溶性蛋白提取工艺研究。以脱脂牡丹籽粕粉为原料,采用水提法提取PSMP。分别研究了提取液浓度、... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

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测定蛋白含量标准曲线图

第三章结果与讨论23第三章结果与讨论3.1牡丹籽粕水溶性蛋白的提取牡丹籽粕中含有20-30%的粗蛋白，是优质的植物蛋白质来源。从牡丹籽粕中提取蛋白质，不仅可以解决植物蛋白资源短缺的问题，同时还可以实现牡丹籽粕的综合利用，提高牡丹经济价值。采用稀盐和缓冲系统的水溶液是提取蛋白质最常用的方法，该方法具有对蛋白质稳定性好、溶解度大、可保存被蛋白质生物活性等优点。影响蛋白质提取率的因素主要有：温度、盐浓度、料液比、匀浆时间等。本文主要考察提取液浓度、料液比和匀浆时间对蛋白提取率的影响，通过优化条件来提高蛋白质的提取率。3.1.1单因素试验(1)料液比对蛋白提取率的影响。结果见图3-1，料液比在1:16~1:4范围内，PSMP的提取率随料液比的增大呈现先增大后减小的趋势，当料液比达到1:8时，提取率最大为40.53%。随着料液比继续增大，蛋白提取率呈现下降的趋势，该现象是由于在低料液比时，牡丹籽粕粉粘稠，无法与水充分混合，分子运动和扩散能力较差，溶解能力较低，牡丹籽粕中的蛋白质较难分离出来。因此最终确定提取PSMP最佳料液比为1:8。图3-1料液比对PSMP提取率的影响Fig.3-1Effectofsolid-to-liquidratioonextractionrateofPSMP(2)匀浆时间对蛋白提取率的影响。如图3-2所示，在匀浆时间为60~180s内，PSMP的提取率先增大后减校在匀浆时间为120s时，PSMP提取率达到最大为51.28%。当

西北大学硕士学位论文24继续增加匀浆时间时，PSMP提取率会逐渐降低，这可能是由于匀浆时间太长，匀浆机刀片发热而导致部分蛋白质变性聚沉，而造成蛋白提取率降低。故确定120s为最佳匀浆时间。图3-2匀浆时间对PSMP提取率的影响Fig.3-2EffectofextractiontimeontheextractionrateofPSMP(3)提取液浓度对蛋白提取率的影响。在其他因素相同的条件下，考察不同提取液PBS浓度对PSMP提取率的影响。结果如图3-3所示，在PBS浓度为0.01~0.05mol/L范围内，PSMP提取率先增大后减校当PBS浓度为0.015mol/L时，PSMP提取率最大为41.04%。当PBS浓度继续增大时，蛋白质提取率呈负相关。这可能是由于在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐，会增加蛋白质分子表面的电荷，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大，因此PSMP在低浓度PBS中溶解度较高，故最佳提取液PBS浓度选择0.015mol/L。图3-3提取液浓度对PSMP提取率的影响Fig.3-3EffectofextractconcentrationontheextractionrateofPSMP


本文编号：3400832