里氏木霉表达载体的构建及人源α-半乳糖苷酶的表达研究

发布时间：2021-11-25 06:53

　　人α-半乳糖苷酶（Humanα-Galactosidase A,α-Gal A）是由人X染色体上GALA基因编码的溶酶体糖蛋白水解酶,负责水解溶酶体里面的寡聚糖、糖脂、糖肽末端的α-半乳糖残基。α-Gal A缺乏导致神经酰胺三己糖苷（Ceramide trihexoside,GL3）在人体各组织中积累,最终诱发法布雷病。作为一种X染色体连锁遗传性溶酶体贮积病,法布雷病临床症状主要表现为青年脑卒中、左心室肥大等,严重威胁人类健康。目前,酶替代疗法（Enzyme replacement therapy,ERT）是治疗法布雷病最有效的方法,已批准上市的α-Gal A分别是由中国仓鼠卵巢细胞和人成纤维细胞表达的。然而,由于当前的α-Gal A表达体系表达量低、成本高,导致法布雷病患者的治疗费用高昂,无法满足法布雷患者的需求。因此,寻找安全可靠的表达体系以制备足够的α-Gal A用于法布雷病的治疗迫在眉睫。里氏木霉（Trichoderma reesei,T.reesei,RUT-C30）是无性型红褐肉座菌属嗜温丝状真菌,具有较好的蛋白合成和分泌能力,具有真核细胞的分泌机制,并且其N糖基化和高甘露... 

【文章来源】：广东工业大学广东省

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

UPR和ERAD相关基因的转录水平(x—±s,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001)

第三章人α-半乳糖苷酶在里氏木霉中的表达55图3-10UPR和ERAD相关基因的转录水平(x—±s,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001)Figure3-10UPRandERAD-relatedgenestranscript(x—±s,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001)图3-11所示为丝状真菌在表达蛋白时所涉及的分泌途径及其成分和改善蛋白表达的基因工程策略[16]。目的基因经过优化改造后转化到里氏木霉中，在核糖体上转录，当目的基因的信号肽mRNA合成并暴露在核糖体表面时，信号肽识别颗粒(Signalpeptiderecognitionparticle,SRP)与mRNA-核糖体-新生肽链结合，靶向内质网表面的SEC61蛋白受体后SRP解离，蛋白翻译继续进行[52]。当新生肽段进入内质网腔时，Hsp70家族的蛋白分子伴侣如免疫球蛋白结合蛋白Bip和二硫键异构酶Pdi在协助目的蛋白正确折叠、修饰并转运到高尔基体中进一步的修饰加工[53]，然后在各种囊泡融合或者质膜融合转录因子(sar1、ypt1、nsf1、snc1、ftt1/2等)[54]的转录调控下将目的蛋白运输分泌到胞外。但新生肽段也有发生错误折叠的情况，错误折叠的肽段在内质网中积累，诱导Hac1转录调控因子的表达[55]，从而会激发UPR


本文编号：3517626