海栖热袍菌两种嗜热酶基因工程菌发酵条件优化

发布时间：2021-12-19 18:20

　　随着生物技术的不断发展,越来越多的科研工作者致力于开发及利用极端微生物资源,许多极端环境中的微生物及其产生的酶,在工业生产上具有重大的应用价值和研究意义。海栖热袍菌（Thermotoga maritima）属于极端嗜热微生物,来源于深海火山,因其生长环境十分特殊,所以很难直接用于工业化大规模发酵培养。目前的主流方法是:利用基因工程手段克隆嗜热酶基因并转入合适的表达系统中使其高效表达,获得工业上所需的嗜热酶。本课题实验对象为从海栖热袍菌中提取出的内切-β-1,4-葡聚糖酶（TM1525）和阿拉伯内切-β-1,4-半乳聚糖酶（TM1201）。研究两种蛋白酶的高效表达条件、检测两种酶的酶活性质以及利用正交实验法和响应面法对两种酶的发酵条件进行优化。本文主要研究的内容及结果如下:1、分别利用本实验室构建的两种酶重组表达质粒转化大肠杆菌Ecoli.BL21,获得两种工程菌,命名为TM1525工程菌和TM1201工程菌。2、利用IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳分析、Western blot等方法分析表达情况,并优化了工程菌表达条件。3、利用生物信息学软件分析两种酶的理化性质,采用Ni-NTA... 

【文章来源】：东华大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

纤维素的分子结构

活= (E(OD)×1000000)/(0.777×10×10)收值;系数;L 邻硝基酚的吸收值;min)(g)纯化与酶活性质分析表达情况凝胶电泳检测诱导前后的菌液制样并采用 12%的 SDS-PA

图 3-2 TM1525 蛋白免疫印迹检测M：marker 1:诱导后样品道1与Marker对比可知,在32kDa处有显著清成功表达。菌的诱导条件优化形式分析种环境中的 TM1525 工程菌,取各自破碎后上 检测表达形式。结果如下图 3-3 与 3-4 所示

【参考文献】：
期刊论文
[1]极端嗜热微生物及其高温适应机制的研究进展[J]. 曾静,郭建军,邱小忠,王贤卓,袁林.  生物技术通报. 2015(09)
[2]嗜冷酶的特性及其在食品工业上的应用[J]. 王继莲,魏云林,李明源.  食品工业科技. 2014(09)
[3]响应面法优化芽孢杆菌25-2产纤维素酶发酵条件[J]. 胡丽娟,薛高尚,卢向阳,田云.  酿酒科技. 2012(04)
[4]极端环境下的微生物[J]. 金黎明.  生物学教学. 2010(04)
[5]植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因研究进展[J]. 柴国华,付先虎,白泽涛,黄军艳,刘胜毅.  中国农业科技导报. 2009(05)
[6]β-半乳糖苷酶研究进展[J]. 张莉,李庆章,田雷.  东北农业大学学报. 2009(07)
[7]耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究[J]. 龚月生,刘锦妮,王晶,杨明明,袁新宇.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(10)
[8]纤维素酶的研究进展与发展趋势[J]. 顾方媛,陈朝银,石家骥,钱世钧.  微生物学杂志. 2008(01)
[9]纤维素化学研究进展[J]. 叶代勇,黄洪,傅和青,陈焕钦.  化工学报. 2006(08)
[10]嗜热菌XZ2K2葡聚糖蔗糖酶基因的克隆与表达[J]. 苏龙,韦宇拓,黄日波.  化学与生物工程. 2006(07)

硕士论文
[1]海栖热袍菌中嗜热酶基因的克隆及发酵条件优化[D]. 梅旭旭.东华大学 2017
[2]海栖热袍菌葡聚糖内切酶的克隆表达及酶学活性研究[D]. 左万兵.江苏大学 2016



本文编号：3544843