齐墩果酸分离与纳米粒制备及对CCl 4 肝损伤小鼠防护作用
发布时间：2022-02-26 13:11
肝脏是机体参与解毒与代谢的重要器官,具有排毒、新陈代谢、蛋白质的分泌与类维生素A的储存等重要的生理功能。急性肝损伤是由活性氧（ROS）的产生与代谢不平衡诱发氧化应激、细胞氧化还原状态紊乱从而引起的毒性作用。口服递送系统可提高疏水性物质的生物利用度,制备缓释剂保护包封药物免受p H环境、酶降解和药物外排泵的影响以及靶向释放药物。为了减少氧化应激诱导的化学性肝损伤等生理异常的发展,探索传统天然产物的新型纳米颗粒作为抗氧化剂来保护肝脏免尤为重要。本文从传统中药材川木瓜中分离纯化保肝活性物质齐墩果酸（Oleanolic acid,OA）,制备口服齐墩果酸纳米颗粒（DCA NPs）,研究其在小鼠CCl4急性肝损伤中的防护作用并揭示其潜在机制,为川木瓜在生物医学领域的应用提供新策略。川木瓜齐墩果酸提取分离方法及工艺参数优化。采用川木瓜作为原料,通过单因素试验、Plackett-Burman试验与响应面正交试验对川木瓜中齐墩果酸的提取进行优化,齐墩果酸最佳得率为4.16%;通过考察固定相介质与流动相的吸附层析优化齐墩果酸分离纯化工艺参数,经硅胶二次纯化后齐墩果酸纯度达到54.6...
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省211工程院校985工程院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 课题来源及研究的目的和意义
1.1.1 课题来源
1.1.2 研究背景和意义
1.2 川木瓜研究进展
1.2.1 川木瓜活性成分及生理功能
1.2.2 齐墩果酸提取纯化方法研究现状
1.3 齐墩果酸保肝作用研究现状
1.3.1 抗化学性急性肝损伤
1.3.2 抗缺血再灌注性肝损伤
1.3.3 抗肝纤维化
1.4 纳米粒口服递送系统研究进展
1.4.1 口服递送系统屏障
1.4.2 纳米粒制备方法研究现状
1.5 目前存在问题与展望
1.6 主要研究内容及研究方案
1.6.1 研究内容
1.6.2 研究路线
第2章 实验材料与实验方法
2.1 实验材料与仪器设备
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验动物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器与设备
2.2 川木瓜齐墩果酸提取分离方法及工艺参数优化
2.2.1 原料预处理
2.2.2 齐墩果酸标准曲线绘制
2.2.3 川木瓜齐墩果酸含量测定
2.2.4 单因素试验
2.2.5 Plackett-Burman试验
2.2.6 Box-Behnken试验
2.2.7 齐墩果酸HPLC检测
2.2.8 固定相介质筛选
2.2.9 固定相介质对齐墩果酸的动态吸附/解析工艺影响
2.2.10 硅胶层析二次纯化齐墩果酸
2.2.11 制备型高效液相色谱法分离齐墩果酸单体
2.3 齐墩果酸纳米粒制备及结构表征
2.3.1 齐墩果酸纳米粒制备
2.3.2 齐墩果酸纳米粒制备工艺优化
2.3.3 齐墩果酸纳米粒结构表征
2.4 DCA NPs对 CCl_4 诱导肝损伤的防护作用
2.4.1 DCA NPs体外毒性试验
2.4.2 DCA NPs释放行为试验
2.4.3 实验动物与分组
2.4.4 DCA NPs对脏器损伤的保护作用
2.4.5 肝组织相关指标检测
2.4.6 DCA NPs肝损伤防护作用机制的研究
2.5 数据处理
第3章 川木瓜齐墩果酸提取分离方法及工艺参数优化
3.1 引言
3.2 单因素试验结果分析
3.2.1 乙醇浓度对川木瓜中齐墩果酸得率的影响
3.2.2 料液比对川木瓜齐墩果酸得率的影响
3.2.3 超声时间度对川木瓜齐墩果酸得率的影响
3.2.4 超声温度对川木瓜齐墩果酸得率的影响
3.2.5 超声功率对川木瓜中齐墩果酸提取的影响
3.3 Plackett- Burman试验结果分析
3.4 Box-Behnken试验结果分析
3.5 基于吸附层析的固定相介质筛选
3.5.1 固定相介质静态吸附率及解吸率测定
3.5.2 固定相介质静态吸附曲线
3.5.3 固定相介质静态解析曲线
3.6 固定相介质对齐墩果酸的动态吸附/解析工艺影响
3.6.1 固定相介质X-5树脂泄露曲线
3.6.2 流动相的动态洗脱曲线
3.6.3 流动相流速对齐墩果酸纯度的影响
3.6.4 流动相浓度对齐墩果酸纯度的影响
3.6.5 径长比对齐墩果酸纯度的影响
3.6.6 上样液浓度对齐墩果酸纯度影响
3.7 硅胶层析二次纯化齐墩果酸
3.8 制备型高效液相色谱法分离纯化齐墩果酸
3.9 本章小结
第4章 齐墩果酸纳米粒制备及结构表征
4.1 引言
4.2 齐墩果酸纳米粒制备
4.2.1 两亲性纳米载体DCS制备
4.2.2 齐墩果酸纳米粒制备
4.3 齐墩果酸纳米粒制备工艺优化
4.3.1 制备方法对DCA NPs包封率和载药量的影响
4.3.2 壁材对DCA NPs包封率和载药量的影响
4.3.3 DCS浓度对DCA NPs包封率和载药量的影响
4.4 DCS载体结构表征
4.4.1 FT-IR表征分析
4.4.2 ~1HNMR分析
4.5 DCA NPs结构表征
4.5.1 粒径、PDI和 Zeta电位
4.5.2 透射电镜(TEM)分析
4.6 本章小结
第5章 DCA NPs对 CCl_4 诱导肝损伤的防护作用
5.1 引言
5.2 DCA NPs细胞毒理学分析
5.3 DCA NPs在模拟胃肠环境中释放行为分析
5.4 DCA NPs对脏器损伤的保护作用
5.4.1 DCA NPs对小鼠体重及脏器指数的影响
5.4.2 DCA NPs对肝脏组织病理学的影响
5.4.3 DCA NPs对肝损伤标志物的影响
5.5 DCA NPs对氧化应激调节作用
5.5.1 DCA NPs对抗氧化酶活性的影响
5.5.2 DCA NPs对肝脏炎性因子的影响
5.6 DCA NPs对肝损伤相关基因的表达及防护作用
5.6.1 DCA NPs对NrF2、HO-1、Keap1、NQO1、TNF-α与NF-κB mRNA表达的影响
5.6.2 DCA NPs对NrF2、HO-1、NQO1与GCLC蛋白表达的影响
5.7 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面法优化超声波辅助提取侧柏叶总黄酮工艺[J]. 王树宁,宋照军,黄滢洁,赵功玲,梁新红,刘本国. 食品研究与开发. 2020(09)
[2]黏液穿透纳米递送系统克服口服吸收黏液屏障的研究进展[J]. 彭涛兴,彭辉,许应超,张凡,梁德胜,郭锋,钟海军. 中国新药杂志. 2020(04)
[3]齐墩果酸和熊果酸提取、分离与测定方法研究进展[J]. 付亚玲,高琳,张东旭,张敏,郑振佳,张仁堂. 食品研究与开发. 2020(02)
[4]齐墩果酸调节HMGB1/TLR4/NF-κB介导的炎症通路减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤[J]. 韩雨薇,王晨辰,李晓明. 实用药物与临床. 2020(01)
[5]聚合物纳米载体介导化疗药物口服递送的研究进展[J]. 乐志成,刘志佳,陈永明. 高分子材料科学与工程. 2019(10)
[6]木瓜提取物预防非甾体抗炎药诱导的小鼠肠黏膜损伤[J]. 郭冲,黄可可,曾俊豪,康佳敏,邓昊,魏承亮,赵宗尧,刘朝奇. 现代食品科技. 2019(11)
[7]西藏皱皮木瓜中齐墩果酸、熊果酸提取工艺优化及不同干燥方式的含量分析[J]. 阚金涛,张清豫,袁雷,马长中,钟政昌. 高原农业. 2019(03)
[8]山楂原花青素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响[J]. 孙思明,徐宏伟,郭凯元,郭梦冉,崔胜男,崔同,檀建新. 食品科学. 2019(05)
[9]皱皮木瓜化学成分与药理作用研究进展[J]. 李云志,江洪波. 化工技术与开发. 2018(06)
[10]卵清蛋白纳米结构脂质载体的制备及理化性质的研究[J]. 喻姣,孙逊. 华西药学杂志. 2018(01)
硕士论文
[1]不同产地皱皮木瓜主要化学成分及生物活性的研究[D]. 郑璇.中国农业科学院 2019
[2]齐墩果酸微粒的制备工艺及对CCl4肝损伤的预防作用研究[D]. 吴晨悦.北京中医药大学 2017
[3]齐墩果酸抑制HMGB1-TLR4-中性粒细胞正反馈环减轻小鼠肝缺血再灌注损伤[D]. 陈夏虹.重庆医科大学 2016
[4]皱皮木瓜有机酸提取纯化工艺优化与色谱指纹图谱研究[D]. 李育钟.西南大学 2013
[5]齐墩果酸的结构修饰及活性研究[D]. 宋志成.大连理工大学 2011
本文编号：3644581
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省211工程院校985工程院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 课题来源及研究的目的和意义
1.1.1 课题来源
1.1.2 研究背景和意义
1.2 川木瓜研究进展
1.2.1 川木瓜活性成分及生理功能
1.2.2 齐墩果酸提取纯化方法研究现状
1.3 齐墩果酸保肝作用研究现状
1.3.1 抗化学性急性肝损伤
1.3.2 抗缺血再灌注性肝损伤
1.3.3 抗肝纤维化
1.4 纳米粒口服递送系统研究进展
1.4.1 口服递送系统屏障
1.4.2 纳米粒制备方法研究现状
1.5 目前存在问题与展望
1.6 主要研究内容及研究方案
1.6.1 研究内容
1.6.2 研究路线
第2章 实验材料与实验方法
2.1 实验材料与仪器设备
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验动物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器与设备
2.2 川木瓜齐墩果酸提取分离方法及工艺参数优化
2.2.1 原料预处理
2.2.2 齐墩果酸标准曲线绘制
2.2.3 川木瓜齐墩果酸含量测定
2.2.4 单因素试验
2.2.5 Plackett-Burman试验
2.2.6 Box-Behnken试验
2.2.7 齐墩果酸HPLC检测
2.2.8 固定相介质筛选
2.2.9 固定相介质对齐墩果酸的动态吸附/解析工艺影响
2.2.10 硅胶层析二次纯化齐墩果酸
2.2.11 制备型高效液相色谱法分离齐墩果酸单体
2.3 齐墩果酸纳米粒制备及结构表征
2.3.1 齐墩果酸纳米粒制备
2.3.2 齐墩果酸纳米粒制备工艺优化
2.3.3 齐墩果酸纳米粒结构表征
2.4 DCA NPs对 CCl_4 诱导肝损伤的防护作用
2.4.1 DCA NPs体外毒性试验
2.4.2 DCA NPs释放行为试验
2.4.3 实验动物与分组
2.4.4 DCA NPs对脏器损伤的保护作用
2.4.5 肝组织相关指标检测
2.4.6 DCA NPs肝损伤防护作用机制的研究
2.5 数据处理
第3章 川木瓜齐墩果酸提取分离方法及工艺参数优化
3.1 引言
3.2 单因素试验结果分析
3.2.1 乙醇浓度对川木瓜中齐墩果酸得率的影响
3.2.2 料液比对川木瓜齐墩果酸得率的影响
3.2.3 超声时间度对川木瓜齐墩果酸得率的影响
3.2.4 超声温度对川木瓜齐墩果酸得率的影响
3.2.5 超声功率对川木瓜中齐墩果酸提取的影响
3.3 Plackett- Burman试验结果分析
3.4 Box-Behnken试验结果分析
3.5 基于吸附层析的固定相介质筛选
3.5.1 固定相介质静态吸附率及解吸率测定
3.5.2 固定相介质静态吸附曲线
3.5.3 固定相介质静态解析曲线
3.6 固定相介质对齐墩果酸的动态吸附/解析工艺影响
3.6.1 固定相介质X-5树脂泄露曲线
3.6.2 流动相的动态洗脱曲线
3.6.3 流动相流速对齐墩果酸纯度的影响
3.6.4 流动相浓度对齐墩果酸纯度的影响
3.6.5 径长比对齐墩果酸纯度的影响
3.6.6 上样液浓度对齐墩果酸纯度影响
3.7 硅胶层析二次纯化齐墩果酸
3.8 制备型高效液相色谱法分离纯化齐墩果酸
3.9 本章小结
第4章 齐墩果酸纳米粒制备及结构表征
4.1 引言
4.2 齐墩果酸纳米粒制备
4.2.1 两亲性纳米载体DCS制备
4.2.2 齐墩果酸纳米粒制备
4.3 齐墩果酸纳米粒制备工艺优化
4.3.1 制备方法对DCA NPs包封率和载药量的影响
4.3.2 壁材对DCA NPs包封率和载药量的影响
4.3.3 DCS浓度对DCA NPs包封率和载药量的影响
4.4 DCS载体结构表征
4.4.1 FT-IR表征分析
4.4.2 ~1HNMR分析
4.5 DCA NPs结构表征
4.5.1 粒径、PDI和 Zeta电位
4.5.2 透射电镜(TEM)分析
4.6 本章小结
第5章 DCA NPs对 CCl_4 诱导肝损伤的防护作用
5.1 引言
5.2 DCA NPs细胞毒理学分析
5.3 DCA NPs在模拟胃肠环境中释放行为分析
5.4 DCA NPs对脏器损伤的保护作用
5.4.1 DCA NPs对小鼠体重及脏器指数的影响
5.4.2 DCA NPs对肝脏组织病理学的影响
5.4.3 DCA NPs对肝损伤标志物的影响
5.5 DCA NPs对氧化应激调节作用
5.5.1 DCA NPs对抗氧化酶活性的影响
5.5.2 DCA NPs对肝脏炎性因子的影响
5.6 DCA NPs对肝损伤相关基因的表达及防护作用
5.6.1 DCA NPs对NrF2、HO-1、Keap1、NQO1、TNF-α与NF-κB mRNA表达的影响
5.6.2 DCA NPs对NrF2、HO-1、NQO1与GCLC蛋白表达的影响
5.7 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面法优化超声波辅助提取侧柏叶总黄酮工艺[J]. 王树宁,宋照军,黄滢洁,赵功玲,梁新红,刘本国. 食品研究与开发. 2020(09)
[2]黏液穿透纳米递送系统克服口服吸收黏液屏障的研究进展[J]. 彭涛兴,彭辉,许应超,张凡,梁德胜,郭锋,钟海军. 中国新药杂志. 2020(04)
[3]齐墩果酸和熊果酸提取、分离与测定方法研究进展[J]. 付亚玲,高琳,张东旭,张敏,郑振佳,张仁堂. 食品研究与开发. 2020(02)
[4]齐墩果酸调节HMGB1/TLR4/NF-κB介导的炎症通路减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤[J]. 韩雨薇,王晨辰,李晓明. 实用药物与临床. 2020(01)
[5]聚合物纳米载体介导化疗药物口服递送的研究进展[J]. 乐志成,刘志佳,陈永明. 高分子材料科学与工程. 2019(10)
[6]木瓜提取物预防非甾体抗炎药诱导的小鼠肠黏膜损伤[J]. 郭冲,黄可可,曾俊豪,康佳敏,邓昊,魏承亮,赵宗尧,刘朝奇. 现代食品科技. 2019(11)
[7]西藏皱皮木瓜中齐墩果酸、熊果酸提取工艺优化及不同干燥方式的含量分析[J]. 阚金涛,张清豫,袁雷,马长中,钟政昌. 高原农业. 2019(03)
[8]山楂原花青素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响[J]. 孙思明,徐宏伟,郭凯元,郭梦冉,崔胜男,崔同,檀建新. 食品科学. 2019(05)
[9]皱皮木瓜化学成分与药理作用研究进展[J]. 李云志,江洪波. 化工技术与开发. 2018(06)
[10]卵清蛋白纳米结构脂质载体的制备及理化性质的研究[J]. 喻姣,孙逊. 华西药学杂志. 2018(01)
硕士论文
[1]不同产地皱皮木瓜主要化学成分及生物活性的研究[D]. 郑璇.中国农业科学院 2019
[2]齐墩果酸微粒的制备工艺及对CCl4肝损伤的预防作用研究[D]. 吴晨悦.北京中医药大学 2017
[3]齐墩果酸抑制HMGB1-TLR4-中性粒细胞正反馈环减轻小鼠肝缺血再灌注损伤[D]. 陈夏虹.重庆医科大学 2016
[4]皱皮木瓜有机酸提取纯化工艺优化与色谱指纹图谱研究[D]. 李育钟.西南大学 2013
[5]齐墩果酸的结构修饰及活性研究[D]. 宋志成.大连理工大学 2011
本文编号：3644581
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