阿霉素前药和siRNA的无载体材料复合纳米粒的设计及抗肿瘤免疫研究
发布时间：2023-04-08 05:13
阿霉素(DOX)能够通过诱导免疫原性细胞死亡(ICD)来激活抗肿瘤免疫,但也同时导致PD-L1、CD73等各种免疫抑制基因的表达上调,从而抵消ICD效应。为解决此冲突,我们开发了可酸活化的聚乙二醇(PEG)修饰的DOX前药,并使其和小干扰RNA(siRNA)组装形成无载体材料复合纳米粒(PEG@D:siRNA),通过协同诱导ICD和逆转免疫抑制,更高效地增强抗肿瘤免疫。其中,DOX前药与siRNA通过π-π堆积和静电相互作用组装,其组装效率分别为89%和100%,其组装的纳米粒中药物的含量显著提高(siRNA为4.13%,DOX为21.67%)。PEG构成球形纳米粒的外壳,从而稳定纳米粒。我们进一步发现,携带靶向PD-L1的siRNA的无载体材料复合纳米粒能够有效递送DOX和siRNA至肿瘤组织和肿瘤细胞,发挥各自功能,协同增强DOX的ICD效应及增加肿瘤浸润性T淋巴细胞的比例和干扰素-γ(IFN-γ)的分泌,最终显著增强抗肿瘤免疫反应和抑制肿瘤生长的能力。此外,无载体材料复合纳米粒PEG@D:siRNA也可以方便地扩展为将化学疗法和免疫疗法相结合的一般策略,从而为肿瘤的化学和免疫联合...
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 肿瘤的治疗
1.1.1 肿瘤的现状
1.1.2 肿瘤的治疗手段
1.2 肿瘤的免疫治疗
1.2.1 肿瘤的免疫抑制微环境使肿瘤产生免疫逃逸
1.2.1.1 肿瘤微环境中的免疫抑制
1.2.1.2 PD-L1/PD1在肿瘤中的作用
1.2.1.3 腺苷信号通路中CD73在肿瘤中的作用
1.2.2 肿瘤免疫治疗的现状
1.2.3 免疫原性细胞死亡的概述
1.2.4 化疗引起免疫原性细胞死亡的促免疫作用
1.2.5 化疗通过上调免疫抑制信号分子的表达引起免疫抑制
1.2.8 化疗联合免疫靶点治疗在肿瘤治疗中的应用
1.3 siRNA纳米载体递送
1.3.1 siRNA概述
1.3.2 目前主要siRNA载体介绍
1.3.3 siRNA在肿瘤治疗中的前景与挑战
1.4 化疗联合递送siRNA的纳米药物载体概述
1.5 本课题的选题目的及主要研究内容
第二章 阿霉素前药和SIRNA的无载体材料复合纳米粒的设计及抗肿瘤免疫研究
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 原料与试剂
2.2.2 PEG-hyd-DOX的合成与表征
2.2.3 PEG-hyd-DOX在酸条件下的稳定性
2.2.4 PEG@D:siRNA纳米颗粒的制备
2.2.5 PEG@D:siRNA纳米颗粒的DLS和冷冻透射电镜表征
2.2.6 PEG@D:siRNA的凝胶电泳实验
2.2.7 PEG@D:siRNA的组装效率与载药量检测
2.2.8 PEG@D:Cy5-siRNA的肝素钠置换实验
2.2.9 PEG@D:siRNA等温滴定实验
2.2.10 PEG@D:siRNA的 DOX荧光和紫外光谱扫描实验
2.2.11 细胞培养
2.2.12 实验动物及肿瘤模型
2.2.13 PEG@D:siRNA的细胞摄取与分布实验
2.2.14 PEG@D:siRNA的活体水平肿瘤组织富集实验
2.2.15 PEG@D:siRNA诱导免疫原性死亡的相关检测
2.2.16 DOX对肿瘤细胞表面PD-L1 表达水平影响检测
2.2.17 PEG@D:si PD-L1 在细胞水平的基因沉默效率实验
2.2.18 PEG@D:siRNA对肿瘤的治疗实验
2.2.19 PEG@D:siRNA治疗后肿瘤免疫微环境流式分析
2.2.20 肿瘤组织mRNA水平的检测实验
2.2.21 肿瘤组织IFN-γ水平的ELISA实验
2.2.22 肿瘤组织免疫组化检测
2.2.23 数据统计分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 PEG-hyd-DOX的合成与表征
2.3.2 PEG@D:siRNA纳米颗粒的制备与DLS表征
2.3.3 PEG@D:siRNA纳米颗粒的凝胶电泳
2.3.4 PEG@D:siRNA纳米颗粒的透射电镜观察
2.3.5 PEG@D:siRNA纳米颗粒的组装效率和载药量测定
2.3.6 探究PEG@D:siRNA纳米颗粒的自组装机理
2.3.7 揭示PEG@D:siRNA在细胞水平中摄取与分布情况
2.3.8 揭示PEG@D:siRNA在动物水平中肿瘤组织富集情况
2.3.9 验证PEG@D:siRNA可有效引起免疫原性死亡和进一步促进DC成熟
2.3.10 验证DOX诱导肿瘤细胞表面PD-L1 表达水平升高
2.3.11 检测PEG@D:siPD-L1 在细胞水平的沉默效果
2.3.12 验证PEG@D:siPD-L1 在动物水平中肿瘤疗效
2.3.13 测定PEG@D:siPD-L1 对肿瘤免疫微环境的调控
2.3.14 验证PEG@D:siCD73 在动物水平中肿瘤疗效
2.3.15 测定PEG@D:siCD73 对肿瘤免疫微环境的调控
2.4 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3786076
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 肿瘤的治疗
1.1.1 肿瘤的现状
1.1.2 肿瘤的治疗手段
1.2 肿瘤的免疫治疗
1.2.1 肿瘤的免疫抑制微环境使肿瘤产生免疫逃逸
1.2.1.1 肿瘤微环境中的免疫抑制
1.2.1.2 PD-L1/PD1在肿瘤中的作用
1.2.1.3 腺苷信号通路中CD73在肿瘤中的作用
1.2.2 肿瘤免疫治疗的现状
1.2.3 免疫原性细胞死亡的概述
1.2.4 化疗引起免疫原性细胞死亡的促免疫作用
1.2.5 化疗通过上调免疫抑制信号分子的表达引起免疫抑制
1.2.8 化疗联合免疫靶点治疗在肿瘤治疗中的应用
1.3 siRNA纳米载体递送
1.3.1 siRNA概述
1.3.2 目前主要siRNA载体介绍
1.3.3 siRNA在肿瘤治疗中的前景与挑战
1.4 化疗联合递送siRNA的纳米药物载体概述
1.5 本课题的选题目的及主要研究内容
第二章 阿霉素前药和SIRNA的无载体材料复合纳米粒的设计及抗肿瘤免疫研究
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 原料与试剂
2.2.2 PEG-hyd-DOX的合成与表征
2.2.3 PEG-hyd-DOX在酸条件下的稳定性
2.2.4 PEG@D:siRNA纳米颗粒的制备
2.2.5 PEG@D:siRNA纳米颗粒的DLS和冷冻透射电镜表征
2.2.6 PEG@D:siRNA的凝胶电泳实验
2.2.7 PEG@D:siRNA的组装效率与载药量检测
2.2.8 PEG@D:Cy5-siRNA的肝素钠置换实验
2.2.9 PEG@D:siRNA等温滴定实验
2.2.10 PEG@D:siRNA的 DOX荧光和紫外光谱扫描实验
2.2.11 细胞培养
2.2.12 实验动物及肿瘤模型
2.2.13 PEG@D:siRNA的细胞摄取与分布实验
2.2.14 PEG@D:siRNA的活体水平肿瘤组织富集实验
2.2.15 PEG@D:siRNA诱导免疫原性死亡的相关检测
2.2.16 DOX对肿瘤细胞表面PD-L1 表达水平影响检测
2.2.17 PEG@D:si PD-L1 在细胞水平的基因沉默效率实验
2.2.18 PEG@D:siRNA对肿瘤的治疗实验
2.2.19 PEG@D:siRNA治疗后肿瘤免疫微环境流式分析
2.2.20 肿瘤组织mRNA水平的检测实验
2.2.21 肿瘤组织IFN-γ水平的ELISA实验
2.2.22 肿瘤组织免疫组化检测
2.2.23 数据统计分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 PEG-hyd-DOX的合成与表征
2.3.2 PEG@D:siRNA纳米颗粒的制备与DLS表征
2.3.3 PEG@D:siRNA纳米颗粒的凝胶电泳
2.3.4 PEG@D:siRNA纳米颗粒的透射电镜观察
2.3.5 PEG@D:siRNA纳米颗粒的组装效率和载药量测定
2.3.6 探究PEG@D:siRNA纳米颗粒的自组装机理
2.3.7 揭示PEG@D:siRNA在细胞水平中摄取与分布情况
2.3.8 揭示PEG@D:siRNA在动物水平中肿瘤组织富集情况
2.3.9 验证PEG@D:siRNA可有效引起免疫原性死亡和进一步促进DC成熟
2.3.10 验证DOX诱导肿瘤细胞表面PD-L1 表达水平升高
2.3.11 检测PEG@D:siPD-L1 在细胞水平的沉默效果
2.3.12 验证PEG@D:siPD-L1 在动物水平中肿瘤疗效
2.3.13 测定PEG@D:siPD-L1 对肿瘤免疫微环境的调控
2.3.14 验证PEG@D:siCD73 在动物水平中肿瘤疗效
2.3.15 测定PEG@D:siCD73 对肿瘤免疫微环境的调控
2.4 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3786076
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3786076.html
最近更新
教材专著
