粘虫三磷酸肌醇受体及质膜钙泵在雷公藤次碱杀虫作用中的功能研究
发布时间：2023-09-13 22:54
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是卫矛科雷公藤属木质藤本植物,具有资源丰富、杀虫活性高、广谱、对哺乳动物安全等优点。雷公藤次碱是其主要杀虫活性成分,具备开发为高效安全新型生物农药的潜力。然而,雷公藤次碱的杀虫分子靶标及作用机制至今尚不清楚。根据前期研究结果,推测雷公藤次碱作用于粘虫的肌肉系统,对钙离子通道及钙信号通路相关基因的表达有显著影响。基于以上,本研究以粘虫为研究对象,分别克隆了粘虫1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)和质膜钙泵(PMCA)基因,并分析了两种基因在粘虫中的时空表达,同时利用RNAi技术验证了两种钙通道蛋白在雷公藤次碱杀虫作用中的功能,为进一步阐明雷公藤次碱的杀虫作用机制奠定基础。主要研究结果如下:1、利用反转录多聚酶链式反应技术(RT-PCR)分别克隆了粘虫IP3R和PMCA基因序列,分别命名为Ms IP3R和Ms PMCA。Ms IP3R开放阅读框长8118 bp,编码2076个氨基酸,预测其蛋白分子量和等电点分别为304784.46和...
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 昆虫的肌肉系统及肌肉毒剂
1.1.1 昆虫肌肉系统组成及功能
1.1.2 昆虫肌肉的收缩机制
1.1.3 作用于昆虫肌肉的杀虫剂及其机理
1.2 细胞的钙离子调控
1.2.1 钙离子的功能
1.2.2 三磷酸肌醇受体结构及功能
1.2.3 质膜钙ATP酶结构及功能
1.3 雷公藤生物碱杀虫作用研究进展
1.3.1 雷公藤生物碱主要化学组分
1.3.2 雷公藤生物碱杀虫活性
1.3.3 雷公藤生物碱杀虫作用机理研究进展
1.4 RNA干扰技术及应用
1.4.1 RNA干扰的本质
1.4.2 RNAi应用及方法
1.5 选题目的及意义
第二章 粘虫两种目的基因克隆及序列分析
2.1 材料与方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 试验方法
2.1.4 数据统计与分析
2.2 结果与分析
2.2.1 粘虫IP3R基因克隆及序列分析
2.2.2 粘虫PMCA基因克隆及序列分析
2.3 讨论
2.3.1 IP3R在昆虫间具有高度同源性
2.3.2 PMCA在昆虫间具有高度同源性
2.4 小结
第三章 粘虫中两种基因mRNA的表达分析
3.1 材料与方法
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 试剂与仪器
3.1.3 试验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 粘虫不同发育阶段IP3R基因的表达分析
3.2.2 粘虫不同组织中IP3R基因的表达分析
3.2.3 粘虫不同发育阶段PMCA基因的表达分析
3.2.4 粘虫不同组织中PMCA基因的表达分析
3.3 讨论
3.3.1 IP3R在不同物种中表达分布的差异性与功能相关
3.3.2 PMCA在不同物种内时空表达的差异性与功能相关
3.4 小结
第四章 RNAi处理试虫对雷公藤次碱敏感性的变化
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 试剂与仪器
4.1.3 试验方法
4.1.4 数据统计与分析
4.2 结果与分析
4.2.1 粘虫IP3R基因在雷公藤次碱杀虫作用中的功能鉴定
4.2.2 粘虫PMCA基因在雷公藤次碱杀虫作用中的功能鉴定
4.3 讨论
4.3.1 雷公藤次碱对IP3R无明显影响
4.3.2 雷公藤次碱可作用于PMCA
4.4 小结
第五章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 IP3R不是雷公藤次碱的杀虫靶标
5.1.2 PMCA可能是雷公藤次碱的分子靶标
5.2 主要结论
5.3 本研究创新点
5.4 展望
参考文献
附录
附录A 粘虫IP3R基因开放阅读框序列
附录B 粘虫IP3R氨基酸序列
附录C 粘虫IP3R氨基酸多重序列比较
附录D 粘虫PMCA基因开放阅读框序列
附录E 粘虫PMCA氨基酸序列
附录F 粘虫PMCA氨基酸多重序列比较
致谢
个人简介
本文编号：3846070
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 昆虫的肌肉系统及肌肉毒剂
1.1.1 昆虫肌肉系统组成及功能
1.1.2 昆虫肌肉的收缩机制
1.1.3 作用于昆虫肌肉的杀虫剂及其机理
1.2 细胞的钙离子调控
1.2.1 钙离子的功能
1.2.2 三磷酸肌醇受体结构及功能
1.2.3 质膜钙ATP酶结构及功能
1.3 雷公藤生物碱杀虫作用研究进展
1.3.1 雷公藤生物碱主要化学组分
1.3.2 雷公藤生物碱杀虫活性
1.3.3 雷公藤生物碱杀虫作用机理研究进展
1.4 RNA干扰技术及应用
1.4.1 RNA干扰的本质
1.4.2 RNAi应用及方法
1.5 选题目的及意义
第二章 粘虫两种目的基因克隆及序列分析
2.1 材料与方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 试验方法
2.1.4 数据统计与分析
2.2 结果与分析
2.2.1 粘虫IP3R基因克隆及序列分析
2.2.2 粘虫PMCA基因克隆及序列分析
2.3 讨论
2.3.1 IP3R在昆虫间具有高度同源性
2.3.2 PMCA在昆虫间具有高度同源性
2.4 小结
第三章 粘虫中两种基因mRNA的表达分析
3.1 材料与方法
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 试剂与仪器
3.1.3 试验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 粘虫不同发育阶段IP3R基因的表达分析
3.2.2 粘虫不同组织中IP3R基因的表达分析
3.2.3 粘虫不同发育阶段PMCA基因的表达分析
3.2.4 粘虫不同组织中PMCA基因的表达分析
3.3 讨论
3.3.1 IP3R在不同物种中表达分布的差异性与功能相关
3.3.2 PMCA在不同物种内时空表达的差异性与功能相关
3.4 小结
第四章 RNAi处理试虫对雷公藤次碱敏感性的变化
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 试剂与仪器
4.1.3 试验方法
4.1.4 数据统计与分析
4.2 结果与分析
4.2.1 粘虫IP3R基因在雷公藤次碱杀虫作用中的功能鉴定
4.2.2 粘虫PMCA基因在雷公藤次碱杀虫作用中的功能鉴定
4.3 讨论
4.3.1 雷公藤次碱对IP3R无明显影响
4.3.2 雷公藤次碱可作用于PMCA
4.4 小结
第五章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 IP3R不是雷公藤次碱的杀虫靶标
5.1.2 PMCA可能是雷公藤次碱的分子靶标
5.2 主要结论
5.3 本研究创新点
5.4 展望
参考文献
附录
附录A 粘虫IP3R基因开放阅读框序列
附录B 粘虫IP3R氨基酸序列
附录C 粘虫IP3R氨基酸多重序列比较
附录D 粘虫PMCA基因开放阅读框序列
附录E 粘虫PMCA氨基酸序列
附录F 粘虫PMCA氨基酸多重序列比较
致谢
个人简介
本文编号：3846070
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