乳及其制品中抗菌类兽药多残留检测技术研究与应用

发布时间：2020-03-31 08:00

【摘要】：近年来,抗菌类兽药在畜牧业中的广泛使用导致乳中兽药残留成为影响乳及乳制品质量安全的重要问题,β-内酰胺抗生素及抑制剂等兽药残留同步检测及快速筛查是控制乳及乳制品安全质量的重要一环。飞行时间质谱是高分辨质谱,可方便快速地完成目标化合物和未知化合物的快速筛查与鉴定,降低“假阳性”出现的概率,并且能在一次检测过程中分析数百种化合物,可实现乳中兽药的准确定量与筛查。本研究以生乳、UHT乳为研究对象,采用超高效液相色谱-串联质谱法和飞行时间质谱法,研究了乳中β-内酰胺类抗生素及抑制剂等8种目标物的同步检测技术条件及其稳定性,并对200个生乳中的27种兽药进行快速筛查。主要研究内容和结果如下:1.超高效液相色谱-串联质谱法测定乳中β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂的残留。以乳为研究对象,以β-内酰胺类抗生素(青霉素V、青霉素G、苯唑西林、邻氯青霉素、氨苄西林)及抑制剂(克拉维酸钾、他唑巴坦、舒巴坦)为目标物,研究优化了前处理条件、色谱条件、质谱条件,进行了方法学验证。结果表明,试样采用乙腈提取,正己烷除脂,以0.1%甲酸水-乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)多反应监测(MRM)扫描,基质校准外标法定量。在0.1~200μg/L范围内,相关系数r≥0.997;生乳、UHT乳方法检出限(S/N=3)均为:0.1~5.0μg/kg,定量限(S/N=10)均为:0.5~10.0μg/kg。在低、中、高3个添加水平下,生乳中8种药物目标化合物的回收率为75.2%~109.5%,RSD为0.20%~4.5%;UHT乳中8种药物目标化合物的回收率为75.7%~108.1%,RSD为0.2%~1.9%。现有方法不能实现抗生素及其抑制剂的同时检测,该方法准确、快速、简便、实用可行,适用于乳中的β-内酰胺抗生素及其抑制剂的测定。2.β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂的稳定性。比较了20℃时不同时间(0 h、2 h、6 h、10 h、24 h)β-内酰胺类抗生素及抑制剂的消解情况。以UHT乳为研究对象,添加标准品100μL 10 ng/mL标准溶液用乳定容至20 mL。取出2 mL放入离心管中,乙腈沉淀蛋白、氮吹、复溶,上机浓度为50 ng/mL。连续测样,结果表明0~10 h内各种药物基本稳定,除了克拉维酸会有4%~6%分解。当在室温20℃放置至24 h时,克拉维酸约10%分解,另外青霉素G、青霉素V、苯唑西林对比1 h的峰面积也出现不同程度10~20%的损失。建议10 h内完成样品测定分析,10 h后,药物代谢损失为10%~20%。3.飞行时间质谱法测定生乳中27种兽药残留。以生乳中磺胺类、β-内酰胺类抗生素等为目标物,研究优化了前处理条件、净化柱的选择、色谱条件、质谱条件。结果表明,试样用80%乙腈水提取,经Prime HLB小柱净化、氮吹、覆溶。流动相:正离子模式下A为0.1%的甲酸,B为乙腈,梯度洗脱,样品采集MS~E模式。通过对MS、MS/MS数据的采集,建立Q-TOF的兽药数据库。可用于疑似兽药化合物的初筛,全扫描碎片离子用于化合物的最终确证。筛查参数优化,所有化合物的质量偏差均低于10ppm,可进行批量生乳样品筛查。
【图文】：

甲酸,乙腈,色谱峰形,定容

山东农业大学硕士专业学位论文HSS T3 柱对极性较大的小分子化合物有更好保留的特性，见图 5-b。因此，流动相 pH对化合物的质谱响应和分离度均具有较大影响，本试验所用的流动相为乙腈-0.1%甲酸水。张秀尧的研究结果也表明青霉素药物以及 β-内酰胺酶抑制剂药物化学结构式中含有羧基，在甲醇体系中，易生成青霉噻唑酸甲酯（张秀尧等，2014）。

甲酸,流动相体系,水体系,弱碱性

HSS T3 柱对极性较大的小分子化合物有更好保留的特性，见图 5-b。因此，流动相 pH对化合物的质谱响应和分离度均具有较大影响，本试验所用的流动相为乙腈-0.1%甲酸水。张秀尧的研究结果也表明青霉素药物以及 β-内酰胺酶抑制剂药物化学结构式中含有羧基，在甲醇体系中，易生成青霉噻唑酸甲酯（张秀尧等，2014）。图 4 不同的定容液对色谱峰形的影响 a 乙腈-0.1%甲酸水，，b乙腈-0.1%甲酸水（80+20）Fig. 4 Effect of different volume liquid ratio on peak shape of chromatography a. 10+90，b. 80+20
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS252.7

【参考文献】