金刚烷胺与藻类质量安全相关性研究

发布时间：2020-05-07 20:24

【摘要】：金刚烷胺作为一种主要用于流感病毒防治的人用抗病毒药物,近年来虽被明令禁止,但仍被非法用于畜禽养殖,并随着养殖废水排放进入海洋,污染海洋环境,并在藻类等海洋生物体内的积累,影响藻类质量安全。当前金刚烷胺的检测方法研究多是针对动物源性食品和饲料中药物残留量的检测,关于海水中金刚烷胺的检测技术及其在海洋环境和藻类中的分布及影响国内外都鲜有报道,因此建立海水中痕量金刚烷胺的检测方法,考察其在藻类中的分布与消除规律,对保障藻类的质量安全十分重要。本论文即在上述背景下,在建立的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)的基础上,对烟台长岛海域的海带中金刚烷胺进行连续检测,分析不同生长阶段的海带和海水中金刚烷胺的含量的相关性,并对其食品质量安全影响进行评价;同时分析在不同的加工方式下,海带中金刚烷胺的消减规律及在菊花江蓠体内的富集和消除规律,以期为金刚烷胺对藻类产生的危害程度和作用机制提供基础性资料。具体研究结果如下:(一)海水及藻类产品中金刚烷胺检测方法的建立。通过优化前处理条件、液相色谱及质谱条件,建立了海水及藻类中金刚烷胺测定的HPLC-MS/MS法并对此方法进行验证。结果表明:(1)藻类样品采用1%乙酸乙腈在20℃下超声提取20 min,提取一次时回收率可达117.75%(内标法定量),采用分散固相萃取(QuEChERs)法进行富集净化,净化填料的最优组合为500 mg PSA、500 mg C18和10 g无水硫酸钠,回收率可达106.02%。;海水中加入10 mL 0.20 mol/L盐酸后,用MCX固相萃取柱进行提取、富集和净化,回收率可达59.76%。(2)对色谱流动相进行优化,发现使用乙腈和0.1%甲酸水作为流动相时,金刚烷胺峰形较好且响应值较高,并可与杂质可以实现较好的分离,提高检测灵敏度,减少基质影响。通过保留时间与离子丰度比定性。(3)藻类中金刚烷胺检出限为1.00μg/kg,定量限为2.00μg/kg;海水中金刚烷胺的检出限为5.00 ng/L,定量限为10.00 ng/L。同时考察了该方法的准确性和精密度。结果表明:此方法准确度高,精密度好,可满足海带及海水中金刚烷胺残留的高效分离及准确定性、定量分析。(二)不同海带样品中金刚烷胺浓度变化以烟台长岛海域筏式养殖海带为研究对象,通过分析不同品种、同一品种不同生长阶段及不同部位中金刚烷胺的含量,考察金刚烷胺在海带中的累积与消除规律,并采用食品安全状态指数和危害残留物的风险系数评价其潜在风险。结果表明:(1)长岛海域海水中金刚烷胺稳定在1.72 ng/L~2.15 ng/L,且不同取样点的海水中的浓度存在显著性差异(P0.05),不同月份无显著性差异(P0.05)。(2)不同品种的海带对金刚烷胺的富集速率存在差异,不同海带同一部位的富集速率随其生长均呈现(3)号海带(1)号海带(2)号海带的变化趋势。(3)海带不同部位的富集量随其生长不断增多,存在极显著性差异(P0.001),收获期时,假根和柄、叶体平直部和叶体凹凸部金刚烷胺的含量分别为48.72μg/kg、64.92μg/kg和54.14μg/kg。(4)对同一品种海带,不同部位的富集量在生长初期无明显差异,随其生长,富集量呈现出叶体凹凸部叶体平直部结根和柄的趋势。(5)从安全指数和风险系数评估结果来看,实验所监测月份的海带是安全,低风险的,可以放心食用或加工。(三)不同加工方式对海带中金刚烷胺含量的影响。分别考察了浸泡、漂烫、水煮、盐渍及烘烤5种常用加工方式对海带中金刚烷胺的残留量变化的影响,结果表明:上述5种加工方式均可不同程度地降低海带中金刚烷胺的残留量,盐渍3 h可完全除去海带中的金刚烷胺;水煮15 min可消除海带中57.6%的金刚烷胺;相比浸泡2 h减少65.07%和漂烫1 min减少33.90%的金刚烷胺相比,水煮工艺可在短时间内消除较多的金刚烷胺;150℃烘烤7 min时,可将海带中的金刚烷胺降低76.05%,但随着烘烤时间和温度升高,其含量又增多。(四)金刚烷胺在菊花江蓠中的富集和消除规律研究采用半静态水质接触染毒法考察金刚烷胺在菊花江蓠中的富集和消除规律,并对其药代动力学特性进行研究。结果显示:(1)金刚烷胺在菊花江蓠中的富集量与曝污浓度呈正相关关系;且其富集量均随曝污时间的延长逐渐增大(2)曝污浓度低时,金刚烷胺的富集系数较大;金刚烷胺在菊花江蓠中的富集系数与曝污浓度和时间均存在显著性差异(P0.05);前期富集速率明显快于后期,随着时间的延长逐渐减小,而后趋于稳定。相较于持久性有机污染物,菊花江蓠对金刚烷胺的富集能力较弱。即使在低浓度下,藻类中的金刚烷胺残留仍可能通过食物链的传递作用被人体吸收,进而产生毒性作用。(3)消除实验前期,金刚烷胺消除速率相对较快,到达一定程度后缓慢降低,并在低浓度水平维持较长时间。到消除实验结束时,5.00μg/L、25.00μg/L和100.00μg/L曝污组,金刚烷胺分别减少了89.33%、92.38%和97.60%,表明消除速率较快,脱离暴露环境时,菊花江蓠体内金刚烷胺的含量迅速降低。(4)对菊花江蓠中的金刚烷胺进行动力学参数推导,菊花江蓠中金刚烷胺的富集量与曝污浓度呈正相关关系;消除阶段,金刚烷胺含量越高,消除速率越快。
【图文】：

金刚烷胺,结构式

图 1.1 金刚烷胺结构式ig.1.1 Structure of amantad于 1960 年首次合成[2]，，，也是美国 FDA 首个金刚烷胺改善了帕金潜在益处。美国神经学旋多巴诱发的运动障碍胺治疗和预防 A 型流感可以抑制丙型肝炎病CSFV）也可以被金刚禽养殖业逐渐规模化识的养殖商户愚昧无知

金刚烷胺,总离子流,流动相,标准品

图 2-4 金刚烷胺标准品（1.0 μg/L）总离子流图（流动相为纯水）Fig.2-4 Chromatograms of amantadine at a concentration of 1.0 μg/mL（ultrapure water）图 2-5 金刚烷胺标准品（1.0 μg/L）总离子流图（流动相为 0.1%甲酸水溶液）Fig.2-5 Chromatograms of amantadine at a concentration of 1.0 μg/mL（0.1% aqueous formic acid）2.3.3.2 质谱条件的优化1000.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00%-010020190325-01 3: MRM of 3 Channels ES+TIC (AMD-IS)1.98e63.2720190325-01 2: MRM of 1 Channel ES+TIC (AMD-IS)1.25e45.575.194.79
【学位授予单位】：烟台大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.63;TS254.7

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