羊骨胶原蛋白肽抗氧化活性及氨基酸组成分析

发布时间：2020-06-19 18:40

【摘要】：本实验以羊骨粉为原料,将原料进行预处理同时用酶法提取胶原蛋白,并对胶原蛋白进行结构鉴定。采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶对胶原蛋白酶解,离心获得胶原蛋白肽再经冷冻干燥制成胶原蛋白肽粉,测定其酶解后的水解度、肽得率、抗氧化活性和氨基酸序列。实验研究结果如下:1.采用SDS-PAGE凝胶电泳对羊骨胶原蛋白进行鉴定,所得胶原蛋白主要为I胶原蛋白,分子量在120KDa左右。2.以水解度、肽得率为指标,选用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶对羊骨胶原蛋白进行酶解,确定最佳工艺。在最佳工艺条件下,胰蛋白酶的水解度为13.27%,肽得率为、82.14%,其中1000 Da以下的小肽占96.4%;木瓜蛋白酶的水解度为12.15%,肽得率为85.73%,且肽段的分子量在1000 Da以下。3.通过不同酶酶解的胶原蛋白肽,以Vc为对照组对羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力和总还原能力进行了比较测定。测得结果如下:当肽液浓度达到1.5mg/mL时胰蛋白酶酶解的胶原蛋白肽液羟自由基清除能力显著高于对照组Vc的清除力但差异不显著(P0.05),其值分别为92.28%、86.39%。当肽液浓度为20μg/mL时超氧阴离子清除率最大,其值为59.53%、51.29%,胰蛋白酶、木瓜蛋白酶解所得肽液的超氧阴离子清除能力不及对照组均且差异显著(P0.05)。当肽液浓度为8mg/mL时,胰蛋白酶酶解的肽液还原能力显著大于木瓜蛋白酶酶解肽液的还原能力(P0.05)。4.采用液相色谱-质谱联用法,测得本实验所得肽段分子量都在1000 Da以下,肽段长度介于7～30个氨基酸之间,且含20个氨基酸以下占98%;酶切所得肽段中富含必需氨基酸,且疏水性氨基酸Leu、Tyr、Val、Ala、Ile、Phe和Trp较多。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS201.2;TS251.94
【图文】：

图１羟脯氨酸标准曲线逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ逡逑

羊骨I型胶原蛋白电泳图

【参考文献】

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本文编号：2721189