麸皮中烷基间苯二酚对HepG2细胞抗肿瘤机理研究

发布时间：2020-07-12 09:36

【摘要】：麦麸是小麦加工过程中的副产物,其口感粗糙,难以消化,常常被用作动物饲料或工业造纸、酿造原料,其综合价值没有得到充分利用。近年来,越来越多的研究表明,麸皮中的多种天然产物具有抗肿瘤活性。麦麸中的脂溶性化合物烷基间苯二酚(Alkylresorcinols),对多种细胞增殖具有抑制效用,但其具体的作用机理还不明确。本研究主要从麦麸中提取分离出烷基间苯二酚,并研究烷基间苯二酚对HepG2细胞生长运动能力的调节,以及从细胞分子水平来研究其抗肿瘤机理。主要研究结果如下:(1)烷基间苯二酚的提取分离及鉴定采用乙酸乙酯提取,结合薄层分离、柱层析、制备高效液相纯化,从小麦麸皮中分离出目标化合物;以Fast Blue RR?ZnCl_2重氮盐显色反应及烷基间苯二酚紫外特征吸收峰作为分离过程的指导;经LC-MS鉴定最终分离物为烷基间苯二酚C_(19:0)和C_(21:0)同系物(定义为ARs)。(2)ARs对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的影响MTT法检测ARs对HepG2细胞增殖抑制;Transwell实验评价ARs对HepG2细胞运动能力的影响;Western blotting法检测ARs对HepG2细胞迁移、侵袭相关蛋白MMP-7、RhoA表达水平的影响。结果表明:ARs对HepG2细胞呈现出剂量和时间依赖性的生长抑制作用。与对照组相比,40、80、160μg/mL不同浓度的ARs对HepG2细胞的迁移抑制率分别为16.73%、43.43%(P0.01)、59.56%(P0.01),对HepG2细胞的侵袭抑制率分别为6.32%、37.09%(P0.01)、68.68%(P0.001)。ARs能够明显降低HepG2细胞的迁移、侵袭能力,且细胞运动能力与ARs浓度负相关。在ARs作用下,MMP-7和RhoA表达水平明显下降(P0.01)。ARs可能通过抑制MMP-7、RhoA表达,来影响HepG2细胞迁移和侵袭能力。(3)ARs诱导的HepG2细胞自噬自噬双标腺病毒感染细胞,检测荧光标记的自噬体含量变化;Western blotting法检测Beclin-1、LC3-II、p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR自噬相关蛋白表达水平的变化。结果表明:ARs可以促进HepG2细胞中自噬体的生成。自噬抑制剂预处理的细胞在ARs的作用下,自噬体数量显著增加(P0.05),且p62表达降低(P0.05),细胞自噬水平上调。在ARs作用的HepG2细胞内,蛋白Beclin-1(P0.01),LC3-II(P0.01)表达量增高,蛋白p62(P0.05)表达降低。蛋白p-PI3K(P0.01)、p-Akt(P0.01)、p-mTOR(P0.01)表达量降低且具有剂量依赖性,表明ARs诱导HepG2细胞自噬,可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制有关。(4)ARs诱导的HepG2细胞凋亡Hoechst 33342染色检测细胞核形态;Annexin V-FITC/PI试剂盒染色,流式细胞仪检测ARs对凋亡率影响;JC-1染色检测线粒体膜电位变化;Western blotting法检测Bax/Bcl-2和cleaved caspase3蛋白表达变化。ARs处理组细胞核变形率升高(P0.05),细胞核皱缩,染色质断裂凝集,形成凋亡小体。ARs引起HepG2细胞凋亡率上升(P0.01)。ARs组HepG2细胞的线粒体膜电位的下降(P0.001),细胞进入早期凋亡状态。ARs可引起Bax/Bcl-2(P0.001)和cleaved caspase3(P0.001)表达量的增加。以上结果表明ARs可能通过调节Bax/Bcl-2蛋白的表达来影响线粒体途径,进而激活caspase通路发生酶促反应,引发细胞凋亡。抑制自噬后,线粒体膜电位上升(P0.05),凋亡蛋白表达上升,但cleaved caspase3于对照组相比无显著性差异,加入ARs解除自噬抑制后,线粒体膜电位下降(P0.05),cleaved caspase3表达量显著增加(P0.05)。表明ARs可能通过上调自噬促进细胞凋亡。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS210.9
【图文】：

图 1.1 烷基间苯二酚结构式图Fig 1.1 Structure diagram of Alkylresorcino在自然界中的分布存在于高等植物中，藻类(algae)、也发现有少量存在[5]。烷基间苯二[6]。在银杏(Ginkgo biloba L.)的外物质重量)，其中 R 基团为 C15:1、间苯二酚含量的 90%，且不饱和键nacardiaceae)植物中含有烷基间苯漆树科植物腰果(Anacardium occid二酚，其含量约占总腰果壳液的

麸皮中烷基间苯二酚对 HepG2 细胞抗肿瘤机理研究黑麦(Secale cereale L.)中含有一系列 C15至 C25奇数同系物。烷基间苯二酚在越来越多的植物源中得到发现烷基间苯二酚类脂质存在。二酚在谷物中的分布及组成二酚主要存在于谷物(小麦或黑麦)的皮层部分，在谷层被碾去，故精制小麦面粉中几乎不含有烷基间苯erg 等用光学显微镜观察 Fast Blue B 重氮盐染色后的证实了烷基间苯二酚主要分布在黑麦籽粒皮层部位的谷物皮层是全谷类的重要成分，因此烷基间苯二酚别是小麦和黑麦)食品摄入量的潜在标志物[14]。

A.TLC分析板分离图，B.TLC制备板分离图

【参考文献】

相关期刊论文 前9条

1 丁亦含;李玉峰;;mTOR信号通路与自噬、凋亡之间的相互关系[J];现代医学;2015年06期

2 杜振亚;陈复生;布冠好;;小麦麸皮及其保健功能研究进展[J];食品与机械;2015年01期

3 张翼;李毓;王建;杨雅莉;袁吕江;;小麦麸皮中有效成分及药理活性研究进展[J];中国中药杂志;2014年02期

4 史建芳;胡明丽;;小麦麸皮营养组分及利用现状[J];现代面粉工业;2012年02期

5 安艳霞;李水莲;王亚平;;小麦麸皮的功能成分及加工利用现状[J];粮食流通技术;2011年02期

6 周厚德;刘玉环;李瑞贞;韩东平;钱菲;焦帅;阮榕生;;全麦中烷基间苯二酚的研究概述[J];食品科学;2008年08期

7 周光龙;漆酚类化合物及其应用展望[J];中国生漆;2004年02期

8 吴冰,徐贵发,任翔,赵秀兰,于红霞;麦胚黄酮类提取物对DM BA诱导的大鼠乳腺肿瘤的抑制作用[J];现代预防医学;2002年01期

9 胡应模;郭明高;;腰果壳液的组成、化学性质及其应用[J];中国生漆;1990年01期

本文编号：2751763