生姜糖蛋白的糖链结构及糖基化位点的鉴定

发布时间：2021-04-29 05:24

　　糖蛋白是由寡糖链与蛋白质共价相连而成的分子,而糖链是糖蛋白的重要组成部分,对生命体起着重要的作用。本研究以生姜糖蛋白为研究对象,利用凝集素磁性微粒技术富集生姜糖蛋白,并在糖苷酶F和糖苷酶A酶解下释放糖链,结合生物质谱技术深入分析了生姜糖蛋白的糖链结构和糖基化位点,并结合KEGG通路分析生姜糖蛋白参与的生理活动,以期为生姜糖蛋白的生理功能的研究提供参考。所取得的主要研究结果如下:1.利用凝集素芯片技术和磁性微粒筛选并富集生姜糖蛋白。结果表明,Con A、LCA、LEL、VVA、STL可以与生姜糖蛋白特异性结合,推测生姜糖蛋白中含有Man,GlcNAc,Fuc以及末端葡萄糖结构。2.MALDI-TOF-MS分析生姜糖蛋白总糖链以及Con A、STL分别富集后的生姜糖链结构。结果表明,3种样品糖链结构中复杂型糖链结构居多,且3种样品中Man,N-GlcNAc,Fuc,Xyl是常见糖型,其中Fuc修饰糖链数量最多。3.LC-MS/MS分析生姜糖肽的糖基化位点,结合KEGG通路搜索糖肽中蛋白部分所参与的生理功能。结果表明,生姜糖蛋白具有10个N-糖基化位点,其中6个位点的肽段序列通过数据库搜索发... 

【文章来源】：渤海大学辽宁省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 文献综述
    1.1 生姜的研究概述
    1.2 糖蛋白的结构
        1.2.1 蛋白质的糖基化
        1.2.2 糖蛋白的结构
        1.2.3 糖链的结构
    1.3 糖蛋白的功能
        1.3.1 糖蛋白的生物学功能
        1.3.2 糖蛋白中糖链的功能
    1.4 糖蛋白的研究方法
        1.4.1 糖蛋白的分离纯化
        1.4.2 糖蛋白中糖链的研究方法
            1.4.2.1 化学法释放N-糖链
            1.4.2.2 酶法释放N-糖链
        1.4.3 糖链的结构分析方法
            1.4.3.1 基质辅助激光解析电离
            1.4.3.2 电喷雾电离
    1.5 糖蛋白的研究进展
    1.6 本课题研究目的及内容
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 主要研究内容
2 凝集素芯片富集生姜糖蛋白
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 仪器与设备
        2.2.3 实验方法
            2.2.3.1 溶液的配置
            2.2.3.2 生姜糖蛋白的提取
            2.2.3.3 凝集素芯片的制备
            2.2.3.4 凝集素微阵列技术检测生姜糖蛋白糖链类型
            2.2.3.5 生姜糖蛋白的富集
            2.2.3.6 SDS-PAGE鉴定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 凝集素微阵列检测生姜糖蛋白糖链构成
        2.3.2 磁性微粒富集生姜糖蛋白
    2.4 本章小结
3 生姜糖蛋白糖链的结构测定
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 仪器与设备
        3.2.3 实验方法
            3.2.3.1 生姜糖蛋白总N-糖链的释放
            3.2.3.2 纯化后糖蛋白的N-糖链释放
            3.2.3.3 MALDI-TOF-MS质谱分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 生姜总糖蛋白的N-糖链组成分析
        3.3.2 CON A富集生姜糖蛋白的N-糖链组成分析
        3.3.3 STL富集生姜糖蛋白的N-糖链组成分析
    3.4 本章小结
4 生姜糖蛋白的N-糖基化位点分析
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 仪器与设备
        4.2.3 实验方法
            4.2.3.1 主要试剂的配置
            4.2.3.2 生姜糖蛋白的提取
            4.2.3.3 制备糖蛋白溶液
            4.2.3.4 生姜糖蛋白的酶解
            4.2.3.5 释放N-糖链
            4.2.3.6 质谱分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 SDS-PAGE分析糖蛋白分子量
        4.3.2 生姜中N-糖基化位点的鉴定结果分析
        4.3.3 生姜糖蛋白的生物信息
    4.4 本章小结
5 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 创新点
    5.3 展望
参考文献
附录
硕士期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]生姜精油的提取及GC-MS分析[J]. 鹿浩志,刘敏轩,田亚亚,杨茜,王向红.  食品工业科技. 2019(14)
[2]生姜营养价值及药理作用研究进展[J]. 吴嘉斓,王笑园,王坤立,庞思成,何政宇,倪元颖.  食品工业. 2019(02)
[3]HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS法分析干姜中的姜辣素类化合物[J]. 梁娜,桑亚新,周妍,刘卫华,李田叶,王向红.  食品工业科技. 2018(09)
[4]蛋氨酸在动物体内代谢途径与周转机制[J]. 徐巧云,胡良宇,王梦芝.  动物营养学报. 2017(11)
[5]食源性糖蛋白富集及其应用的研究进展[J]. 于志鹏,郭辉,赵文竹,陈月皎,丁龙,刘静波,励建荣.  食品研究与开发. 2017(17)
[6]生姜多酚类物质的提取工艺研究[J]. 刘军伟,李啸晨,侯婴惠,王芸,唐晓珍.  中国调味品. 2017(05)
[7]电喷雾离子源（ESI）中带电液滴的形成与碎裂模拟[J]. 黄兆亮,高方园,王伯良,张维冰.  高等学校化学学报. 2016(04)
[8]糖蛋白结构鉴定研究现状[J]. 丁璇子,王岸娜,吴立根,杨永杰.  粮食与油脂. 2015(07)
[9]凝集素法与酰肼法富集糖肽的方法学比较[J]. 薛鹏,周岳,丁翔,王峻,谢振声,杨福全.  生物化学与生物物理进展. 2015(04)
[10]糖链结构解析技术研究进展[J]. 付琴琴,王岸娜,吴立根,刘佳.  粮食与油脂. 2013(12)

博士论文
[1]糖蛋白质组学新方法及其在IgA肾病中的应用研究[D]. 张勇.军事科学院 2018
[2]大豆糖蛋白N-糖基化分析及其致敏性研究[D]. 李玲梅.西北大学 2017
[3]基于质谱的糖蛋白质组学/糖组学的新技术与新方法研究[D]. 曹纬倩.复旦大学 2014

硕士论文
[1]糖肽结构解析与定量研究的组学技术发展与应用[D]. 于子翔.安徽医科大学 2017
[2]利用HPLC/ESI-MS建立糖蛋白中N-糖链的分析方法[D]. 徐长帅.延边大学 2016
[3]枸杞糖蛋白LbGp5-B的分离纯化及其N-糖链的结构解析[D]. 孙伟.西北大学 2015
[4]拟南芥COG复合体亚基COG8基因的功能分析[D]. 李颖欣.南京农业大学 2014
[5]覆盆子糖蛋白的分离纯化与生物活性研究[D]. 王芳.陕西师范大学 2009
[6]大豆糖蛋白的分离纯化、结构分析及免疫调节功能的研究[D]. 詹玲.华中农业大学 2006
[7]茶树叶糖蛋白的纯化研究[D]. 程玉祥.安徽农业大学 2002



本文编号：3166923