假单胞菌噬菌体的筛选及在冷却羊肉中的应用

发布时间：2021-04-30 02:12

　　近年来,我国羊肉产业发展迅猛,但是冷却羊肉产品在运输和贮藏过程中极易腐败变质,造成了非常大的经济损失。假单胞菌（Pseudomonas）是冷却羊肉有氧冷藏条件下的优势腐败菌,噬菌体作为一种绿色、安全、有效的抑菌制剂,可以抑制假单胞菌的生长繁殖,有效延缓冷却羊肉的腐败。本试验通过研究假单胞菌噬菌体的生物学特性、基因组学及在冷却羊肉中的初步应用,为噬菌体在食品领域的研究及应用奠定基础。研究结果如下:采用平板涂布法从冷却羊肉中分离筛选假单胞菌,通过菌落形态观察、生理生化试验以及16S r DNA序列测定,共鉴定出24株假单胞菌。以24株假单胞菌分离株和实验室保藏的两株铜绿假单胞菌标准株PAO1和PAK为宿主菌,利用点滴法和双层平板法,分离噬菌体,共获得6株（PSY-1、PSJ-1、vB PS-1、vB PS-2、vB PS-3、vB PS-4）假单胞菌噬菌体。选取裂解能力最强,裂解谱最宽的2株噬菌体进行生物学特性研究。透射电镜观察显示,噬菌体SPY-1属有尾噬菌体目肌尾噬菌体科,噬菌体SPJ-1属有尾噬菌体目长尾噬菌体科。噬菌体PSY-1和PSJ-1的最佳感染复数分别是0.01和0.1,噬菌... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 冷却羊肉中常见的假单胞菌及控制方法
        1.1.1 冷却羊肉发展现状
        1.1.2 冷却羊肉中常见的假单胞菌
        1.1.3 冷却羊肉中假单胞菌的控制方法
    1.2 噬菌体
        1.2.1 噬菌体简介
        1.2.2 噬菌体控制食源性病原菌的优势
        1.2.3 噬菌体在控制食源性病原菌方面的研究应用
    1.3 研究的目的和意义
    1.4 研究采用的技术路线
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 冷却羊肉样品及噬菌体样品
        2.1.2 培养基与缓冲液
        2.1.3 主要试剂及来源
        2.1.4 仪器与设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 冷却羊肉中假单胞菌的分离纯化及培养
        2.2.2 分离株的生理生化试验
        2.2.3 菌株16S rDNA扩增及序列测定
        2.2.4 噬菌体的分离与纯化
        2.2.5 噬菌体的增殖
        2.2.6 噬菌体的宿主谱的测定
        2.2.7 噬菌体的电镜观察
        2.2.8 噬菌体最佳感染复数
        2.2.9 噬菌体的一步生长曲线
        2.2.10 温度对噬菌体的影响
        2.2.11 pH对噬菌体的影响
        2.2.12 噬菌体全基因组分析及基因组酶切位点分析
        2.2.13 噬菌体PSJ-1在冷却羊肉中的应用
        2.2.14 数据分析及处理
3 结果与分析
    3.1 冷却羊肉中假单胞菌的分离纯化及鉴定
        3.1.1 疑似假单胞菌菌株的分离纯化
        3.1.2 分离株的生理生化试验
        3.1.3 菌株的16S rDNA序列同源性分析
    3.2 噬菌体的分离纯化
    3.3 噬菌体宿主谱的测定
    3.4 噬菌体的生物学特性
        3.4.1 噬菌体的电镜观察
        3.4.2 噬菌体最佳感染复数
        3.4.3 噬菌体的一步生长曲线
        3.4.4 温度对噬菌体的影响
        3.4.5 pH对噬菌体的影响
    3.5 噬菌体的全基因组分析
        3.5.1 噬菌体PSY-1DNA样品检测
        3.5.2 噬菌体酶切位点分析
        3.5.3 噬菌体PSY-1基因组预测及其功能注释
        3.5.4 噬菌体基因组安全性评估
        3.5.5 噬菌体PSY-1与同属噬菌体的进化关系分析
    3.6 噬菌体在冷却羊肉中的应用
        3.6.1 噬菌体PSJ-1在冷却羊肉中的防腐应用
        3.6.2 冷却羊肉感官变化结果
4 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3168635