长茎葡萄蕨藻多糖的结构解析及免疫刺激活性研究
发布时间：2021-05-07 10:35
本研究比较了不同产地C.lentillifera的营养成分;利用单因素和响应面实验优化了长茎葡萄蕨藻多糖（Caulerpa lentillifera polysaccharide,CLP）的提取工艺;分离纯化出具有免疫刺激活性的长茎葡萄蕨藻多糖P1（Caulerpa lentillifera polysaccharide-P1,CLP-P1）,采用甲基化、核磁共振（Nuclear magnetic resonance,NMR）等技术鉴定了其结构信息;采用ELISA、流式细胞仪、q RT-PCR、Western blot和转录组学等方法研究CLP-P1免疫刺激活性的分子机制,主要结果如下:1. C.lentillifera的营养成分分析本研究对海南省和山东省采集的C.lentillifera的营养成分进行了综合分析,并与先前报道不同产地的C.lentillifera和两种不同种类的海藻进行比较。发现海南省和山东省的C.lentillifera中的多糖含量高于E.cottonii和S.polycystum的含量。山东省的C.lentillifera必需氨基酸组成更符合FAO/WHO的理想模...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 巨噬细胞极化及信号通路
1.2 天然产物的免疫调节活性
1.2.1 免疫调节活性机制
1.2.2 免疫调节活性物质
1.3 海藻多糖的生物活性
1.3.1 海藻多糖的抗氧化活性
1.3.2 海藻多糖的抗肿瘤活性
1.3.3 海藻多糖的免疫调节活性
1.3.4 海藻多糖的抗凝血活性
1.4 C.lentillifera的研究进展
1.5 论文研究的背景及目的意义、内容和创新点
1.5.1 论文的背景及目的意义
1.5.2 论文研究的主要内容
1.5.3 论文的创新点
1.5.4 技术路线图
2 材料与方法
2.1 原材料与细胞
2.2 试验试剂
2.3 仪器与设备
2.4 C.lentillifera的营养成分分析
2.4.1 基本营养成分分析
2.4.2 氨基酸组成分析
2.4.3 脂肪酸组成分析
2.4.4 矿物质元素分析
2.5 CLP提取工艺优化
2.5.1 CLP的提取
2.5.2 单因素实验设计
2.5.3 响应面实验设计
2.6 CLP-P1分离纯化及结构解析
2.6.1 CLP-P1的分离纯化
2.6.2 CLP-P1的分子量
2.6.3 CLP-P1的单糖组成分析
2.6.4 CLP-P1的FTIR分析
2.6.5 CLP-P1的甲基化作用分析
2.6.6 CLP-P1 的核磁共振(NMR)分析
2.7 CLP-P1 对巨噬细胞RAW2647 的免疫刺激活性
2.7.1 巨噬细胞RAW264.7的培养
2.7.2 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 增殖的影响
2.7.3 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 吞噬作用的影响
2.7.4 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 分泌NO的影响
2.7.5 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 分泌ROS的影响
2.7.6 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌细胞因子的影响
2.7.7 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌的细胞因子基因水平上的影响
2.8 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7的TLR4 受体的影响
2.8.1 CLP-P1的胺化
2.8.2 FITC的共价耦合
2.8.3 不同浓度Try-CLP-P1-FITC与巨噬细胞RAW264.7 的作用
2.8.4 Try-CLP-P1-FITC和 Anti-TLR4 与巨噬细胞RAW264.7 的结合位点作用
2.8.5 Western blot测定CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7中TLR4 的影响
2.9 转录组学分析CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 免疫刺激活性的基因表达影响
2.10 数据处理
3 结果与分析
3.1 C.lentillifera营养成分分析
3.1.1 不同地区基本营养成分分析
3.1.2 氨基酸组成分析
3.1.3 脂肪酸组成分析
3.1.4 矿物质元素分析
3.2 CLP提取条件优化
3.2.1 单因素试验
3.2.2 响应面试验
3.3 CLP-P1分离纯化及结构解析
3.3.1 CLP-P1的分离纯化
3.3.2 CLP-P1的分子量
3.3.3 CLP-P1单糖组成分析
3.3.4 CLP-P1的傅立叶红外光谱分析
3.3.5 CLP-P1的甲基化作用分析
3.3.6 CLP-P1 的核磁共振(NMR)分析
3.4 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 的免疫刺激活性
3.4.1 CLP各组分对巨噬细胞RAW246.7 的细胞活性的影响
3.4.2 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 吞噬能力的影响
3.4.3 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌NO的影响
3.4.4 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌ROS的影响
3.4.5 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌细胞因子的影响
3.4.6 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 相关细胞因子基因水平上的影响
3.5 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7的TLR4 受体的影响
3.5.1 Try-CLP-P1与FITC结合分析
3.5.2 不同浓度Try-CLP-P1-FITC与 RAW264.7 的结合情况
3.5.3 Try-CLP-P1-FITC和 Anti-TLR4 与巨噬细胞RAW264.7 的结合位点作用
3.5.4 CLP-P1 诱导RAW264.7 细胞的TLR4 信号通路激活
3.6 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 的免疫刺激活性机制的探讨
3.6.1 CLP-P1 诱导巨噬细胞RAW264.7 的差异表达基因分析
3.6.2 CLP-P1 诱导巨噬细胞RAW264.7 的差异基因GO富集分析
3.6.3 CLP-P1 诱导巨噬细胞RAW264.7 的差异基因KEGG富集分析
4 讨论
5 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
缩略语表
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Comparative Analysis of Nutrient Composition of Caulerpa lentillifera from Different Regions[J]. ZHANG Meijian,MA Yurong,CHE Xinyi,HUANG Zumei,CHEN Peng,XIA Guanghua,ZHAO Meihui. Journal of Ocean University of China. 2020(02)
[2]鸿雁雁血多肽的制备及免疫调节作用的初步研究[J]. 王铮,赵宇,高晓晨,孙尧,崔本海,高冷. 食品工业科技. 2020(13)
[3]黄酒多肽的多级分离纯化及其对小鼠巨噬细胞免疫调节的影响[J]. 冯瑞雪,史瑛,姬中伟,钱肖华,徐岳正,毛健,许正宏. 食品工业科技. 2020(13)
[4]长裙竹荪多肽抗氧化及免疫调节作用[J]. 熊川,黄文丽,张利,黎青,李健伟,周贤丹,王玥,朱宇. 食品工业科技. 2019(24)
[5]肝细胞生长因子活化JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞M1型向M2型极化[J]. 顾奕玥,胡泽平,王云飞,周青,汪渊. 安徽医科大学学报. 2019(05)
[6]中性粒细胞产生活性氧在肿瘤发生发展中作用的研究进展[J]. 于涛,范婉,梁飞新. 医学研究生学报. 2019(02)
[7]植物多糖免疫调节机制研究进展[J]. 李容,陈华国,周欣. 天然产物研究与开发. 2018(11)
[8]多肽类药物对肿瘤免疫调节的影响及其机制研究进展[J]. 杜双双,赵红平,阎昭. 天津医科大学学报. 2018(04)
[9]活性氧与肿瘤的研究进展[J]. 郭文静,牛小娟,罗晓红,宋鹏. 西北国防医学杂志. 2018(04)
[10]巨噬细胞极化[J]. 吴秀华,郑文洁. 中华临床免疫和变态反应杂志. 2017(02)
博士论文
[1]叉枝松藻抗凝血多糖及其寡糖的制备和结构研究[D]. 李娜.中国海洋大学 2015
硕士论文
[1]蚕丝蛋白肽免疫调节及与化疗的联合作用[D]. 杜双双.天津医科大学 2018
[2]维生素E对云纹石斑鱼幼鱼生长、免疫及抗胁迫能力的影响[D]. 张艳亮.上海海洋大学 2015
[3]海葡萄（Caulerpa lentillifera）切断组织再生培养及发育条件研究[D]. 郭辉.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2014
[4]核磁共振在多糖结构解析中的应用[D]. 王林强.华东师范大学 2013
本文编号：3173245
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 巨噬细胞极化及信号通路
1.2 天然产物的免疫调节活性
1.2.1 免疫调节活性机制
1.2.2 免疫调节活性物质
1.3 海藻多糖的生物活性
1.3.1 海藻多糖的抗氧化活性
1.3.2 海藻多糖的抗肿瘤活性
1.3.3 海藻多糖的免疫调节活性
1.3.4 海藻多糖的抗凝血活性
1.4 C.lentillifera的研究进展
1.5 论文研究的背景及目的意义、内容和创新点
1.5.1 论文的背景及目的意义
1.5.2 论文研究的主要内容
1.5.3 论文的创新点
1.5.4 技术路线图
2 材料与方法
2.1 原材料与细胞
2.2 试验试剂
2.3 仪器与设备
2.4 C.lentillifera的营养成分分析
2.4.1 基本营养成分分析
2.4.2 氨基酸组成分析
2.4.3 脂肪酸组成分析
2.4.4 矿物质元素分析
2.5 CLP提取工艺优化
2.5.1 CLP的提取
2.5.2 单因素实验设计
2.5.3 响应面实验设计
2.6 CLP-P1分离纯化及结构解析
2.6.1 CLP-P1的分离纯化
2.6.2 CLP-P1的分子量
2.6.3 CLP-P1的单糖组成分析
2.6.4 CLP-P1的FTIR分析
2.6.5 CLP-P1的甲基化作用分析
2.6.6 CLP-P1 的核磁共振(NMR)分析
2.7 CLP-P1 对巨噬细胞RAW2647 的免疫刺激活性
2.7.1 巨噬细胞RAW264.7的培养
2.7.2 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 增殖的影响
2.7.3 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 吞噬作用的影响
2.7.4 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 分泌NO的影响
2.7.5 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 分泌ROS的影响
2.7.6 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌细胞因子的影响
2.7.7 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌的细胞因子基因水平上的影响
2.8 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7的TLR4 受体的影响
2.8.1 CLP-P1的胺化
2.8.2 FITC的共价耦合
2.8.3 不同浓度Try-CLP-P1-FITC与巨噬细胞RAW264.7 的作用
2.8.4 Try-CLP-P1-FITC和 Anti-TLR4 与巨噬细胞RAW264.7 的结合位点作用
2.8.5 Western blot测定CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7中TLR4 的影响
2.9 转录组学分析CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 免疫刺激活性的基因表达影响
2.10 数据处理
3 结果与分析
3.1 C.lentillifera营养成分分析
3.1.1 不同地区基本营养成分分析
3.1.2 氨基酸组成分析
3.1.3 脂肪酸组成分析
3.1.4 矿物质元素分析
3.2 CLP提取条件优化
3.2.1 单因素试验
3.2.2 响应面试验
3.3 CLP-P1分离纯化及结构解析
3.3.1 CLP-P1的分离纯化
3.3.2 CLP-P1的分子量
3.3.3 CLP-P1单糖组成分析
3.3.4 CLP-P1的傅立叶红外光谱分析
3.3.5 CLP-P1的甲基化作用分析
3.3.6 CLP-P1 的核磁共振(NMR)分析
3.4 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 的免疫刺激活性
3.4.1 CLP各组分对巨噬细胞RAW246.7 的细胞活性的影响
3.4.2 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 吞噬能力的影响
3.4.3 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌NO的影响
3.4.4 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌ROS的影响
3.4.5 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 分泌细胞因子的影响
3.4.6 CLP-P1 对巨噬细胞RAW246.7 相关细胞因子基因水平上的影响
3.5 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7的TLR4 受体的影响
3.5.1 Try-CLP-P1与FITC结合分析
3.5.2 不同浓度Try-CLP-P1-FITC与 RAW264.7 的结合情况
3.5.3 Try-CLP-P1-FITC和 Anti-TLR4 与巨噬细胞RAW264.7 的结合位点作用
3.5.4 CLP-P1 诱导RAW264.7 细胞的TLR4 信号通路激活
3.6 CLP-P1 对巨噬细胞RAW264.7 的免疫刺激活性机制的探讨
3.6.1 CLP-P1 诱导巨噬细胞RAW264.7 的差异表达基因分析
3.6.2 CLP-P1 诱导巨噬细胞RAW264.7 的差异基因GO富集分析
3.6.3 CLP-P1 诱导巨噬细胞RAW264.7 的差异基因KEGG富集分析
4 讨论
5 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
缩略语表
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Comparative Analysis of Nutrient Composition of Caulerpa lentillifera from Different Regions[J]. ZHANG Meijian,MA Yurong,CHE Xinyi,HUANG Zumei,CHEN Peng,XIA Guanghua,ZHAO Meihui. Journal of Ocean University of China. 2020(02)
[2]鸿雁雁血多肽的制备及免疫调节作用的初步研究[J]. 王铮,赵宇,高晓晨,孙尧,崔本海,高冷. 食品工业科技. 2020(13)
[3]黄酒多肽的多级分离纯化及其对小鼠巨噬细胞免疫调节的影响[J]. 冯瑞雪,史瑛,姬中伟,钱肖华,徐岳正,毛健,许正宏. 食品工业科技. 2020(13)
[4]长裙竹荪多肽抗氧化及免疫调节作用[J]. 熊川,黄文丽,张利,黎青,李健伟,周贤丹,王玥,朱宇. 食品工业科技. 2019(24)
[5]肝细胞生长因子活化JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞M1型向M2型极化[J]. 顾奕玥,胡泽平,王云飞,周青,汪渊. 安徽医科大学学报. 2019(05)
[6]中性粒细胞产生活性氧在肿瘤发生发展中作用的研究进展[J]. 于涛,范婉,梁飞新. 医学研究生学报. 2019(02)
[7]植物多糖免疫调节机制研究进展[J]. 李容,陈华国,周欣. 天然产物研究与开发. 2018(11)
[8]多肽类药物对肿瘤免疫调节的影响及其机制研究进展[J]. 杜双双,赵红平,阎昭. 天津医科大学学报. 2018(04)
[9]活性氧与肿瘤的研究进展[J]. 郭文静,牛小娟,罗晓红,宋鹏. 西北国防医学杂志. 2018(04)
[10]巨噬细胞极化[J]. 吴秀华,郑文洁. 中华临床免疫和变态反应杂志. 2017(02)
博士论文
[1]叉枝松藻抗凝血多糖及其寡糖的制备和结构研究[D]. 李娜.中国海洋大学 2015
硕士论文
[1]蚕丝蛋白肽免疫调节及与化疗的联合作用[D]. 杜双双.天津医科大学 2018
[2]维生素E对云纹石斑鱼幼鱼生长、免疫及抗胁迫能力的影响[D]. 张艳亮.上海海洋大学 2015
[3]海葡萄（Caulerpa lentillifera）切断组织再生培养及发育条件研究[D]. 郭辉.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2014
[4]核磁共振在多糖结构解析中的应用[D]. 王林强.华东师范大学 2013
本文编号：3173245
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