改进型免疫侧向层析黄曲霉毒素B1检测方法研究
发布时间：2021-05-15 20:18
黄曲霉毒素B1是常出现在霉变的农产品中的一种由黄曲霉菌代谢产生的毒素,它毒性极强,是砒霜毒性的68倍。若食用超过一定剂量的黄曲霉毒素B1则会导致急性疾病,例如腹泻、肝脏受损等,严重情况下甚至会导致死亡。因此,一种新型农产品中黄曲霉毒素B1快速检测方法的建立对于保障世界食品卫生安全有着重大的意义。本论文围绕以下三个方面展开了讨论:（1）经典型免疫层析黄曲霉毒素B1检测技术建立基于抗原和抗体之间的特异性免疫识别是经典的免疫层析方法的基本原理,其主要试验方案也是根据这一实验原理制定的。首先利用胶体金作为可见光下标记物,用于显色,在胶体金表面通过静电吸附标记上黄曲霉毒素B1抗体,通过肉眼观察C/T线的显色情况来判断胶体金标记的抗体是否有和T线上的包被原或C线上羊抗鼠二抗结合,从而分析样品中黄曲霉毒素B1的含量,并进行定量分析。实验中具体优化了用于标记的胶体金中的重要参数,在得到的最佳实验条件下,可以实现5分钟内完成检测,且灵敏度达到0.5μg/L,在0.1～5μg/L范围内表现出良好线性（R2=0.9872）,本技术重复性强、稳定性高,且具有非常高的特异性,可以有效的检测...
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 引言
1.1 黄曲霉毒素 B1 产生及危害
1.2 黄曲霉毒素 B1 的经典仪器检测方法
1.2.1 高效液相色谱法检测黄曲霉毒素B1
1.2.2 薄层色谱法检测黄曲霉毒素B1
1.2.3 液质联用法检测黄曲霉毒素 B1
1.3 黄曲霉毒素B1的快速检测方法
1.3.1 近红外光谱法检测黄曲霉毒素B1
1.3.2 酶联免疫吸附法检测黄曲霉毒素B1
1.3.3 生物传感器检测黄曲霉毒素B1
1.4 胶体金免疫侧向层析技术
1.5 本文主要研究内容
第二章 黄曲霉毒素 B1 经典型免疫层析检测技术建立
2.1 经典型免疫层析检测方法的技术原理
2.2 主要材料与设备
2.2.1 主要实验材料
2.2.2 主要仪器设备
2.3 实验方法
2.3.1 标记材料胶体金的制备与保存
2.3.2 材料前处理以及溶液配置
2.3.3 黄曲霉毒素B1单克隆抗体与胶体金的偶联标记
2.3.4 层析膜的种类优化
2.3.5 黄曲霉毒素B1经典型免疫层析检测实验相关参数优化
2.3.6 标准样品的检测与标准曲线的建立
2.4 结果与讨论
2.4.1 胶体金的表征以及保存实验
2.4.2 层析膜选择结果
2.4.3 胶体金与抗体偶联性能验证
2.4.4 偶联pH值优化
2.4.5 抗体添加量优化
2.4.6 封闭剂选择以及封闭剂添加量的优化
2.4.7 重悬液选择优化
2.4.8 T线喷膜浓度优化
2.4.9 反应时间选择优化
2.4.10 特异性验证
2.4.11 标准样品的检测与标准曲线的建立
2.5 小结
第三章 改进型黄曲霉毒素B1免疫侧向层析检测技术建立
3.1 改进型黄曲霉毒素 B1 免疫层析检测方法的技术原理
3.2 主要材料与设备
3.2.1 主要实验材料
3.2.2 主要仪器设备
3.3 实验方法
3.3.1 金标抗体偶联物用量
3.3.2 上样量的优化
3.3.3 冷冻干燥工艺条件优化优化
3.3.4 改进型黄曲霉毒素B1检测方法性能测试及标准曲线建立
3.4 结果和讨论
3.4.1 金标抗体偶联物用量的优化
3.4.2 上样量的优化
3.4.3 冷冻干燥工艺条件优化
3.4.4 改进型黄曲霉毒素B1检测方法性能测试及标准曲线建立
3.5 小结
第四章 茶叶中黄曲霉毒素B1超灵敏免疫侧向层析技术建立
4.1 前言
4.2 主要材料与设备
4.2.1 主要实验材料
4.2.2 主要仪器设备
4.3 实验方法
4.3.1 基质效应影响分析
4.3.2 稀释倍数优化
4.3.3 四种茶样中超灵敏黄曲霉毒素检测方法及标准曲线建立
4.4 结果和讨论
4.4.1 基质效应影响确定
4.4.2 稀释倍数优化
4.4.3 四种茶样中超灵敏黄曲霉毒素 B1 检测方法及标准曲线建立
4.5 小结
第五章 结论与展望
参考文献
攻读学位期间的学术活动及成果清单
【参考文献】：
期刊论文
[1]近红外光谱分析技术及仪器发展概况[J]. 林房,吴丽华,刘曼曼,冷其影,巩子路,邢栋,吴宏萍. 酿酒. 2020(01)
[2]酶联免疫吸附法在食品微生物检测中的应用分析[J]. 王喜梅. 食品安全导刊. 2019(21)
[3]电化学生物传感器在黄曲霉毒素检测中的应用研究进展[J]. 惠媛媛,王毕妮,彭海霞. 食品工业科技. 2019(02)
[4]薄层色谱法检测玉米中黄曲霉毒素B1[J]. 冯莉. 现代畜牧科技. 2018(08)
[5]酶联免疫吸附法测定植物油中黄曲霉毒素B1[J]. 杨艳,吴鑫,朱应飞,翟平平,刘德,范宏伟. 食品安全质量检测学报. 2018(12)
[6]电化学生物传感器在黄曲霉毒素检测中的研究进展[J]. 马海华,张元,甄彤,孙楫舟,夏善红. 中国粮油学报. 2016(02)
[7]生物传感器法测定花生中黄曲霉毒素B1[J]. 杜祎,李敬龙,毕春元. 食品科技. 2015(08)
[8]近五年我国近红外光谱分析技术研究与应用进展[J]. 褚小立,陆婉珍. 光谱学与光谱分析. 2014(10)
[9]免疫磁珠富集结合酶联免疫吸附法检测酱油中黄曲霉毒素B1[J]. 谢芳,赖卫华,史爱武,邓省亮,熊勇华,余扬帆. 食品科学. 2013(18)
[10]ELISA和TLC检测饲料中AFB1含量的比较研究[J]. 马俊,邱富娜,刘金娥,巩丹,徐玲. 畜牧与饲料科学. 2013(02)
博士论文
[1]黄曲霉毒素的生物积累及其检测技术质量控制标准体系研究[D]. 鲍蕾.中国海洋大学 2009
本文编号：3188271
【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 引言
1.1 黄曲霉毒素 B1 产生及危害
1.2 黄曲霉毒素 B1 的经典仪器检测方法
1.2.1 高效液相色谱法检测黄曲霉毒素B1
1.2.2 薄层色谱法检测黄曲霉毒素B1
1.2.3 液质联用法检测黄曲霉毒素 B1
1.3 黄曲霉毒素B1的快速检测方法
1.3.1 近红外光谱法检测黄曲霉毒素B1
1.3.2 酶联免疫吸附法检测黄曲霉毒素B1
1.3.3 生物传感器检测黄曲霉毒素B1
1.4 胶体金免疫侧向层析技术
1.5 本文主要研究内容
第二章 黄曲霉毒素 B1 经典型免疫层析检测技术建立
2.1 经典型免疫层析检测方法的技术原理
2.2 主要材料与设备
2.2.1 主要实验材料
2.2.2 主要仪器设备
2.3 实验方法
2.3.1 标记材料胶体金的制备与保存
2.3.2 材料前处理以及溶液配置
2.3.3 黄曲霉毒素B1单克隆抗体与胶体金的偶联标记
2.3.4 层析膜的种类优化
2.3.5 黄曲霉毒素B1经典型免疫层析检测实验相关参数优化
2.3.6 标准样品的检测与标准曲线的建立
2.4 结果与讨论
2.4.1 胶体金的表征以及保存实验
2.4.2 层析膜选择结果
2.4.3 胶体金与抗体偶联性能验证
2.4.4 偶联pH值优化
2.4.5 抗体添加量优化
2.4.6 封闭剂选择以及封闭剂添加量的优化
2.4.7 重悬液选择优化
2.4.8 T线喷膜浓度优化
2.4.9 反应时间选择优化
2.4.10 特异性验证
2.4.11 标准样品的检测与标准曲线的建立
2.5 小结
第三章 改进型黄曲霉毒素B1免疫侧向层析检测技术建立
3.1 改进型黄曲霉毒素 B1 免疫层析检测方法的技术原理
3.2 主要材料与设备
3.2.1 主要实验材料
3.2.2 主要仪器设备
3.3 实验方法
3.3.1 金标抗体偶联物用量
3.3.2 上样量的优化
3.3.3 冷冻干燥工艺条件优化优化
3.3.4 改进型黄曲霉毒素B1检测方法性能测试及标准曲线建立
3.4 结果和讨论
3.4.1 金标抗体偶联物用量的优化
3.4.2 上样量的优化
3.4.3 冷冻干燥工艺条件优化
3.4.4 改进型黄曲霉毒素B1检测方法性能测试及标准曲线建立
3.5 小结
第四章 茶叶中黄曲霉毒素B1超灵敏免疫侧向层析技术建立
4.1 前言
4.2 主要材料与设备
4.2.1 主要实验材料
4.2.2 主要仪器设备
4.3 实验方法
4.3.1 基质效应影响分析
4.3.2 稀释倍数优化
4.3.3 四种茶样中超灵敏黄曲霉毒素检测方法及标准曲线建立
4.4 结果和讨论
4.4.1 基质效应影响确定
4.4.2 稀释倍数优化
4.4.3 四种茶样中超灵敏黄曲霉毒素 B1 检测方法及标准曲线建立
4.5 小结
第五章 结论与展望
参考文献
攻读学位期间的学术活动及成果清单
【参考文献】：
期刊论文
[1]近红外光谱分析技术及仪器发展概况[J]. 林房,吴丽华,刘曼曼,冷其影,巩子路,邢栋,吴宏萍. 酿酒. 2020(01)
[2]酶联免疫吸附法在食品微生物检测中的应用分析[J]. 王喜梅. 食品安全导刊. 2019(21)
[3]电化学生物传感器在黄曲霉毒素检测中的应用研究进展[J]. 惠媛媛,王毕妮,彭海霞. 食品工业科技. 2019(02)
[4]薄层色谱法检测玉米中黄曲霉毒素B1[J]. 冯莉. 现代畜牧科技. 2018(08)
[5]酶联免疫吸附法测定植物油中黄曲霉毒素B1[J]. 杨艳,吴鑫,朱应飞,翟平平,刘德,范宏伟. 食品安全质量检测学报. 2018(12)
[6]电化学生物传感器在黄曲霉毒素检测中的研究进展[J]. 马海华,张元,甄彤,孙楫舟,夏善红. 中国粮油学报. 2016(02)
[7]生物传感器法测定花生中黄曲霉毒素B1[J]. 杜祎,李敬龙,毕春元. 食品科技. 2015(08)
[8]近五年我国近红外光谱分析技术研究与应用进展[J]. 褚小立,陆婉珍. 光谱学与光谱分析. 2014(10)
[9]免疫磁珠富集结合酶联免疫吸附法检测酱油中黄曲霉毒素B1[J]. 谢芳,赖卫华,史爱武,邓省亮,熊勇华,余扬帆. 食品科学. 2013(18)
[10]ELISA和TLC检测饲料中AFB1含量的比较研究[J]. 马俊,邱富娜,刘金娥,巩丹,徐玲. 畜牧与饲料科学. 2013(02)
博士论文
[1]黄曲霉毒素的生物积累及其检测技术质量控制标准体系研究[D]. 鲍蕾.中国海洋大学 2009
本文编号：3188271
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3188271.html
