拟穴青蟹细丝蛋白C的分子克隆及抗原表位分析
发布时间：2021-06-14 11:54
蟹类水产品的消费量逐年递增,随之引发的过敏反应广受关注。细丝蛋白C（filamin C,FLN c）是拟穴青蟹（Scylla paramamosain）肌肉中的新型过敏原,有关该过敏原的基因序列、理化特性、抗原表位等尚不清楚。因此针对FLN c基因序列及抗原表位的研究有利于解决甲壳类动物FLN c交叉反应引起的过敏疾病诊断难题。本研究以拟穴青蟹FLN c为研究对象,利用巢式聚合酶链式反应及互补脱氧核糖核酸末端快速扩增技术获得FLN c的基因序列,该基因开放阅读框共2544个碱基,编码847个氨基酸残基,核苷酸序列登录号为MK747241.1,填补了甲壳类水产品FLN c基因序列的空白。生物信息学分析结果显示,FLN c含有9个结构域,其三级结构呈免疫球蛋白样折叠,具有典型的细丝蛋白家族特征;系统进化树分析结果表明,细丝蛋白家族在进化中呈现高度保守性。另外,基于三种生物信息学在线分析及软件预测得到FLN c的28个线性表位,并将本实验室前期经噬菌体淘选获得的模拟表位肽段与青蟹FLN c基因序列进行比对,共匹配得到22个表位肽段,比对分析最终明确了拟穴青蟹FLN c的11个线性表位。进一步...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 引言
1.1 食物过敏与食物过敏原
1.1.1 食物过敏现状
1.1.2 食物过敏反应机制
1.1.3 食物过敏原与组分诊断
1.2 水产食物过敏原
1.2.1 鱼类过敏原
1.2.2 软体贝类过敏原
1.2.3 甲壳类过敏原
1.2.4 水产食物过敏原的免疫交叉反应
1.3 水产食物过敏原抗原表位
1.3.1 抗原表位的分类与研究方法
1.3.2 水产食物过敏原的抗原表位
1.4 本研究的目的与意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 原材料
2.1.2 甲壳类过敏患者血清
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂
2.1.5 主要溶液配制
2.2 方法
2.2.1 拟穴青蟹FLN c的纯化及鉴定
2.2.2 拟穴青蟹FLN c的多克隆抗体制备
2.2.3 拟穴青蟹FLN c的分子克隆
2.2.4 拟穴青蟹FLN c的生物信息学分析
2.2.5 拟穴青蟹FLN c的重组表达
2.2.6 拟穴青蟹nFLN c与 rFLN c的性质比较
2.2.7 甲壳类及软体类FLN c的免疫交叉反应分析
2.2.8 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 拟穴青蟹FLN c的纯化鉴定及抗体制备
3.1.1 FLN c的纯化及质谱鉴定
3.1.2 FLN c的 Native-PAGE及双向电泳分析
3.1.3 FLN c的 PAS染色分析
3.1.4 FLN c多克隆抗体制备及效价分析
3.2 拟穴青蟹FLN c的分子克隆及生物信息学分析
3.2.1 FLN c的分子克隆
3.2.2 FLN c的氨基酸序列分析
3.2.3 FLN c的二级结构及结构域分析
3.2.4 FLN c的三级结构分析
3.2.5 细丝蛋白家族系统进化树分析
3.2.6 FLN c的抗原表位分析
3.3 拟穴青蟹FLN c的重组表达
3.3.1 载体构建及重组表达
3.3.2 重组蛋白的纯化及鉴定
3.4 拟穴青蟹n FLN c与 rFLN c的比较分析
3.4.1 理化特性的比较分析
3.4.2 二级结构及表面疏水性的比较分析
3.4.3 免疫结合活性的比较分析
3.5 拟穴青蟹FLN c的结构域重组蛋白表达及表位区域分析
3.5.1 FLN c不同结构域的载体构建及原核表达
3.5.2 FLN c不同结构域重组蛋白的纯化及鉴定
3.5.3 FLN c不同结构域重组蛋白的免疫结合活性分析
3.6 甲壳类及软体类FLN c的免疫交叉反应分析
3.6.1 甲壳类及软体类FLN c的 IgG结合活性分析
3.6.2 甲壳类及软体类FLN c的 IgE结合活性分析
3.6.3 甲壳类及软体类FLN c的抑制性Western blot分析
第4章 讨论
4.1 拟穴青蟹FLN c的分子克隆及生物信息学分析
4.2 拟穴青蟹nFLN c与 rFLN c的性质比较
4.3 拟穴青蟹FLN c的抗原表位区域分析
4.4 甲壳类及软体类FLN c的免疫交叉反应分析
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
附录
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]人角质细胞生长因子2真核表达载体的构建及功能验证[J]. 刘娟,赵思源,徐小洁,杨超,张鲁囡,刘佳,孙万军. 生物技术通讯. 2019(01)
[2]河南华溪蟹生殖调控分子VASA的原核表达、抗体制备及免疫鉴定[J]. 杜晓琳,王兰,孙敏. 水产学报. 2018(08)
[3]人IgE重链恒定区2～4区蛋白的真核表达、纯化及其相互作用分子捕获[J]. 黄慧慧,王哲彦,杨正根,李珍,王萍,董文其. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(03)
[4]菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆[J]. 吕良涛,蔺海鑫,高卿,林洪,李振兴. 食品安全质量检测学报. 2015(11)
[5]水产食物过敏原及其抗原表位的研究进展[J]. 张永霞,杨阳,蔡秋凤,孙乐常,曹敏杰,刘光明. 中国渔业质量与标准. 2015(05)
[6]凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究[J]. 孙一帆,黄建芳,向军俭,王彩霞,陈成枫. 食品科学. 2015(01)
[7]融合标签在蛋白质可溶性表达中的应用进展[J]. 吴珊珊,朱芸,陈珊珊,何冰芳. 化工进展. 2014(04)
[8]生物信息学技术在食物过敏原表位预测中的应用[J]. 龙伟,李欣,高金燕,陈红兵. 食品科学. 2014(03)
[9]虾夷扇贝过敏原tropomyosin的克隆表达、纯化及免疫学鉴定[J]. 刘志刚,邬玉兰,吴淑勤,石存斌,夏皓玉,陈丽斐. 水生生物学报. 2010(05)
[10]方斑东风螺过敏原的分离、鉴定与纯化[J]. 吴序栎,张剑文,刘志刚. 免疫学杂志. 2009(02)
博士论文
[1]拟穴青蟹（Scylla paramamosain）肌浆蛋白过敏原的致敏性研究[D]. 杨阳.集美大学 2018
本文编号：3229776
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 引言
1.1 食物过敏与食物过敏原
1.1.1 食物过敏现状
1.1.2 食物过敏反应机制
1.1.3 食物过敏原与组分诊断
1.2 水产食物过敏原
1.2.1 鱼类过敏原
1.2.2 软体贝类过敏原
1.2.3 甲壳类过敏原
1.2.4 水产食物过敏原的免疫交叉反应
1.3 水产食物过敏原抗原表位
1.3.1 抗原表位的分类与研究方法
1.3.2 水产食物过敏原的抗原表位
1.4 本研究的目的与意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 原材料
2.1.2 甲壳类过敏患者血清
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂
2.1.5 主要溶液配制
2.2 方法
2.2.1 拟穴青蟹FLN c的纯化及鉴定
2.2.2 拟穴青蟹FLN c的多克隆抗体制备
2.2.3 拟穴青蟹FLN c的分子克隆
2.2.4 拟穴青蟹FLN c的生物信息学分析
2.2.5 拟穴青蟹FLN c的重组表达
2.2.6 拟穴青蟹nFLN c与 rFLN c的性质比较
2.2.7 甲壳类及软体类FLN c的免疫交叉反应分析
2.2.8 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 拟穴青蟹FLN c的纯化鉴定及抗体制备
3.1.1 FLN c的纯化及质谱鉴定
3.1.2 FLN c的 Native-PAGE及双向电泳分析
3.1.3 FLN c的 PAS染色分析
3.1.4 FLN c多克隆抗体制备及效价分析
3.2 拟穴青蟹FLN c的分子克隆及生物信息学分析
3.2.1 FLN c的分子克隆
3.2.2 FLN c的氨基酸序列分析
3.2.3 FLN c的二级结构及结构域分析
3.2.4 FLN c的三级结构分析
3.2.5 细丝蛋白家族系统进化树分析
3.2.6 FLN c的抗原表位分析
3.3 拟穴青蟹FLN c的重组表达
3.3.1 载体构建及重组表达
3.3.2 重组蛋白的纯化及鉴定
3.4 拟穴青蟹n FLN c与 rFLN c的比较分析
3.4.1 理化特性的比较分析
3.4.2 二级结构及表面疏水性的比较分析
3.4.3 免疫结合活性的比较分析
3.5 拟穴青蟹FLN c的结构域重组蛋白表达及表位区域分析
3.5.1 FLN c不同结构域的载体构建及原核表达
3.5.2 FLN c不同结构域重组蛋白的纯化及鉴定
3.5.3 FLN c不同结构域重组蛋白的免疫结合活性分析
3.6 甲壳类及软体类FLN c的免疫交叉反应分析
3.6.1 甲壳类及软体类FLN c的 IgG结合活性分析
3.6.2 甲壳类及软体类FLN c的 IgE结合活性分析
3.6.3 甲壳类及软体类FLN c的抑制性Western blot分析
第4章 讨论
4.1 拟穴青蟹FLN c的分子克隆及生物信息学分析
4.2 拟穴青蟹nFLN c与 rFLN c的性质比较
4.3 拟穴青蟹FLN c的抗原表位区域分析
4.4 甲壳类及软体类FLN c的免疫交叉反应分析
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
附录
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]人角质细胞生长因子2真核表达载体的构建及功能验证[J]. 刘娟,赵思源,徐小洁,杨超,张鲁囡,刘佳,孙万军. 生物技术通讯. 2019(01)
[2]河南华溪蟹生殖调控分子VASA的原核表达、抗体制备及免疫鉴定[J]. 杜晓琳,王兰,孙敏. 水产学报. 2018(08)
[3]人IgE重链恒定区2～4区蛋白的真核表达、纯化及其相互作用分子捕获[J]. 黄慧慧,王哲彦,杨正根,李珍,王萍,董文其. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(03)
[4]菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆[J]. 吕良涛,蔺海鑫,高卿,林洪,李振兴. 食品安全质量检测学报. 2015(11)
[5]水产食物过敏原及其抗原表位的研究进展[J]. 张永霞,杨阳,蔡秋凤,孙乐常,曹敏杰,刘光明. 中国渔业质量与标准. 2015(05)
[6]凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究[J]. 孙一帆,黄建芳,向军俭,王彩霞,陈成枫. 食品科学. 2015(01)
[7]融合标签在蛋白质可溶性表达中的应用进展[J]. 吴珊珊,朱芸,陈珊珊,何冰芳. 化工进展. 2014(04)
[8]生物信息学技术在食物过敏原表位预测中的应用[J]. 龙伟,李欣,高金燕,陈红兵. 食品科学. 2014(03)
[9]虾夷扇贝过敏原tropomyosin的克隆表达、纯化及免疫学鉴定[J]. 刘志刚,邬玉兰,吴淑勤,石存斌,夏皓玉,陈丽斐. 水生生物学报. 2010(05)
[10]方斑东风螺过敏原的分离、鉴定与纯化[J]. 吴序栎,张剑文,刘志刚. 免疫学杂志. 2009(02)
博士论文
[1]拟穴青蟹（Scylla paramamosain）肌浆蛋白过敏原的致敏性研究[D]. 杨阳.集美大学 2018
本文编号：3229776
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