南极磷虾中含氟多肽的分离纯化及其结构研究
发布时间：2021-07-20 08:05
南极磷虾（Euphausia superba）作为21世纪新兴产业发展的载体,肌肉中高氟异常是限制其食用开发利用的关键。由于生物体对氟的吸收和生物利用度存在差异,而现有的研究主要集中在对氟的总量分析上,对氟的形态分析方面,还处于初步探索阶段,对南极磷虾肌肉与氟的结合状态也处于假设推断阶段,人们对南极磷虾肌肉中氟形成机制尚不清楚。本研究基于南极磷虾肌肉中氟存在多种形态的结合,以南极磷虾肌肉为实验原材料,采用响应面法优化胰蛋白酶酶解工艺,从肌肉中分离提取多肽,然后采用SDS-PAGE凝胶电泳、超滤、Sephadex G-25葡聚糖凝胶层析、高效液相色谱等一系列技术对多肽进行分离纯化,并将纯化出来的多肽进行氟含量的分析以及分子量的测定,并采用LC-MS/MS将纯化出来的含氟多肽进行氨基酸分析以及蛋白鉴定,建立了一种分离南极磷虾含氟多肽的新方法,并通过蛋白鉴定结合理化性质分析对其结合形式、结构进行初探,旨在为今后南极磷虾资源开发利用提供理论基础,具体研究内容:1.南极磷虾蛋白的酶解工艺研究以氨基氮含量为指标,采用甲醛电位滴定法测定胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、风味...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本课题技术路线图
图 2-1 不同生物酶对南极磷虾蛋白的酶解效果Fig.2-1 Enzymatic hydrolysis effect of different biological enzymes on Antarctic krill protein以酶解液中氨基氮含量为指标，6 种生物酶的酶解效果如图 2-1 所示，胰蛋白酶水解得到的酶解液中氨基氮含量最高，可达到 49.36 ±1.11 mg/g，碱性蛋白酶酶解效果次之，胃蛋白酶酶解液氨基氮含量最低，仅有 20.42 ±0.50 mg/g，实验结果与倪玲等[60]结果一致，因此本实验选取胰蛋白酶为酶解南极磷虾蛋白的理想生物酶。2.4.3 单因素实验对酶解效果的影响2.4.3.1 酶解温度对酶解效果的影响如图 2-2 所示，在 35.0℃~45.0℃范围内，氨基氮含量从 46.61 ±0.73 mg/g 逐渐升高到最高值 49.91 ±0.26 mg/g，当温度超过 45.0℃时，随着温度的升高，氨基氮含量持续下降，当到达 55.0℃时，氨基氮含量下降到 42.93 ±0.05 mg/g。这
图 2-2 酶解温度对南极磷虾蛋白酶解效果的影响ig.2-2 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on proteolytic effect of Antarctic kr.2 pH 对酶解效果的影响如图2-3所示，在pH7.0~8.0范围内，酶解液中氨基氮含量从45.41 ±0.32升高到 49.40 ±0.82 mg/g，水解度达到最大值，之后继续增大至 pH 为液中氨基氮含量迅速下降至 42.76 ±0.07 mg/g。这是因为酶作为一种特，其酶促反应速率与 pH 有密切关系，当 pH 达到某一值时，酶的活性最反应速率最大，当 pH 高于或低于这一值时，酶的天然构象和酶与底物态就会受到影响，进而影响酶的稳定性、抑制酶的活性甚至失活[70]，最佳 pH 为 8.0。
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊乳清蛋白ACE及DPP-Ⅳ抑制肽的分离纯化与鉴定[J]. 张宇琪,高嵩,李倩,张岩春,戴智勇,罗永康. 中国农业大学学报. 2018(12)
[2]生物活性肽功能及制备技术研究进展[J]. 余楠楠,陈琛. 中国酿造. 2018(09)
[3]牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究[J]. 杜昕,李诚,肖岚,刘爱平,冯朝辉,刘韫滔,杨勇,范尹译. 食品与生物技术学报. 2018(08)
[4]酶法水解牦牛血制备蛋白多肽粉的技术研究[J]. 韩学燕,李宗文,杨生忠,谈有金,陈虎,曹效海. 中国农学通报. 2018(17)
[5]pH对毛细管电泳分离多肽的影响[J]. 徐益升,凌昊,杨金凤,于锋. 化学教育(中英文). 2018(10)
[6]虾头、虾壳抗氧化肽的分离纯化及其对秀丽隐杆线虫的抗氧化作用[J]. 王晋,张风,周爱梅,黄炜超,王淑惠,罗旭洸. 食品科学. 2019(03)
[7]茅苍术叶片蛋白提取方法的比较[J]. 张文明,巢建国,谷巍,陆奇杰,侯皓然. 江苏农业科学. 2018(08)
[8]南极磷虾壳聚糖的提取及止血研究[J]. 刘缘,潘浩波,赵晓丽. 集成技术. 2018(01)
[9]南极磷虾酶解液脱氟工艺研究[J]. 黄俊伟,崔春,郑雪君,陈智光. 中国调味品. 2018(01)
[10]超滤法从马铃薯淀粉加工分离汁水中回收蛋白质的研究[J]. 顾文芬,曾凡逵,程锦春. 现代食品科技. 2018(03)
硕士论文
[1]南极磷虾酶解工艺优化及风味成分分析[D]. 崔亚菲.山东农业大学 2018
[2]南极磷虾中氟在贮藏过程中的迁移、转化规律及其生物学毒性评价[D]. 曹明秀.上海海洋大学 2016
[3]南极磷虾蛋白提取技术研究[D]. 廖鄂.中国海洋大学 2014
[4]南极磷虾蛋白加工利用的初步研究[D]. 任艳.中国海洋大学 2009
本文编号：3292455
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本课题技术路线图
图 2-1 不同生物酶对南极磷虾蛋白的酶解效果Fig.2-1 Enzymatic hydrolysis effect of different biological enzymes on Antarctic krill protein以酶解液中氨基氮含量为指标，6 种生物酶的酶解效果如图 2-1 所示，胰蛋白酶水解得到的酶解液中氨基氮含量最高，可达到 49.36 ±1.11 mg/g，碱性蛋白酶酶解效果次之，胃蛋白酶酶解液氨基氮含量最低，仅有 20.42 ±0.50 mg/g，实验结果与倪玲等[60]结果一致，因此本实验选取胰蛋白酶为酶解南极磷虾蛋白的理想生物酶。2.4.3 单因素实验对酶解效果的影响2.4.3.1 酶解温度对酶解效果的影响如图 2-2 所示，在 35.0℃~45.0℃范围内，氨基氮含量从 46.61 ±0.73 mg/g 逐渐升高到最高值 49.91 ±0.26 mg/g，当温度超过 45.0℃时，随着温度的升高，氨基氮含量持续下降，当到达 55.0℃时，氨基氮含量下降到 42.93 ±0.05 mg/g。这
图 2-2 酶解温度对南极磷虾蛋白酶解效果的影响ig.2-2 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on proteolytic effect of Antarctic kr.2 pH 对酶解效果的影响如图2-3所示，在pH7.0~8.0范围内，酶解液中氨基氮含量从45.41 ±0.32升高到 49.40 ±0.82 mg/g，水解度达到最大值，之后继续增大至 pH 为液中氨基氮含量迅速下降至 42.76 ±0.07 mg/g。这是因为酶作为一种特，其酶促反应速率与 pH 有密切关系，当 pH 达到某一值时，酶的活性最反应速率最大，当 pH 高于或低于这一值时，酶的天然构象和酶与底物态就会受到影响，进而影响酶的稳定性、抑制酶的活性甚至失活[70]，最佳 pH 为 8.0。
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊乳清蛋白ACE及DPP-Ⅳ抑制肽的分离纯化与鉴定[J]. 张宇琪,高嵩,李倩,张岩春,戴智勇,罗永康. 中国农业大学学报. 2018(12)
[2]生物活性肽功能及制备技术研究进展[J]. 余楠楠,陈琛. 中国酿造. 2018(09)
[3]牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究[J]. 杜昕,李诚,肖岚,刘爱平,冯朝辉,刘韫滔,杨勇,范尹译. 食品与生物技术学报. 2018(08)
[4]酶法水解牦牛血制备蛋白多肽粉的技术研究[J]. 韩学燕,李宗文,杨生忠,谈有金,陈虎,曹效海. 中国农学通报. 2018(17)
[5]pH对毛细管电泳分离多肽的影响[J]. 徐益升,凌昊,杨金凤,于锋. 化学教育(中英文). 2018(10)
[6]虾头、虾壳抗氧化肽的分离纯化及其对秀丽隐杆线虫的抗氧化作用[J]. 王晋,张风,周爱梅,黄炜超,王淑惠,罗旭洸. 食品科学. 2019(03)
[7]茅苍术叶片蛋白提取方法的比较[J]. 张文明,巢建国,谷巍,陆奇杰,侯皓然. 江苏农业科学. 2018(08)
[8]南极磷虾壳聚糖的提取及止血研究[J]. 刘缘,潘浩波,赵晓丽. 集成技术. 2018(01)
[9]南极磷虾酶解液脱氟工艺研究[J]. 黄俊伟,崔春,郑雪君,陈智光. 中国调味品. 2018(01)
[10]超滤法从马铃薯淀粉加工分离汁水中回收蛋白质的研究[J]. 顾文芬,曾凡逵,程锦春. 现代食品科技. 2018(03)
硕士论文
[1]南极磷虾酶解工艺优化及风味成分分析[D]. 崔亚菲.山东农业大学 2018
[2]南极磷虾中氟在贮藏过程中的迁移、转化规律及其生物学毒性评价[D]. 曹明秀.上海海洋大学 2016
[3]南极磷虾蛋白提取技术研究[D]. 廖鄂.中国海洋大学 2014
[4]南极磷虾蛋白加工利用的初步研究[D]. 任艳.中国海洋大学 2009
本文编号：3292455
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