PCR法测定食品中猪源性成分的研究
发布时间：2021-09-30 00:45
随着社会经济的发展,人们饮食结构发生巨变的同时,食品行业也面临着越来越大的挑战。动物源性成分掺假事件等食品恶性违规事件对消费者健康以及市场经济造成了非常大的影响。为了能更好的对食品中动物源性成分掺假进行检测,保护消费者的健康和市场的稳定。本研究通过三种不同的方法对DNA进行提取,筛选出经济、快速、高质量的DNA提取方法,以满足后续PCR扩增。并通过荧光定量PCR和AFLP-PCR技术分别对食品中猪源性成分进行定量和定性检测,最后建立AFLP-PCR法对猪的不同品种进行鉴定,为食品中主猪源性成分检测提供技术依据,主要内容包括:（1）采用SDS法、异硫氰酸胍法和试剂盒法这三种方法提取动物肌肉组织DNA,对提取DNA的浓度和纯度进行了比较。并设计猪、牛、羊、鸡、草鱼的普通PCR引物进行普通PCR扩增,来验证三种方法所提取DNA的质量。结果显示,异硫氰酸胍法无需水浴加热,单个样品可以在30min内完成,所提取的DNAOD260/OD280比值为1.8左右,OD260/OD230的比值均大于2.0,异硫氰酸胍...
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A不同物种生鲜组织DNA电泳检测
第2章不同动物肌肉组织中DNA提取方法的研究27图2.1B不同高压组织DNA电泳检测Fig2.1BHigh-pressuretissueDNAelectrophoresisdetectionofdifferenttissues（M：marker(DL10000bp)；1、2、3、4、5为SDS法提取的高压组织基因组DNA；6、7、8、9、10为试剂盒法提取的高压组织基因组DNA；11、12、13、14、15为异硫氰酸胍法提取的高压组织基因组DNA。）2.3.2DNA的纯度及浓度测定用酶标仪测定所提取DNA的纯度和浓度，结果如表2.2、表2.3所示。OD260/OD280的比值用来体现蛋白质和酚等杂质的去除情况，OD260/OD280的比值在1.8左右，说明DNA纯度高，低说明DNA中有蛋白质以及苯酚等杂质未除尽，比值高则说明有RNA。230nm处是多肽、苯酚、碳水化合物的吸光度，所以OD260/OD230比值反映了DNA样品碳水化合物和盐类等物质的污染情况。OD260/OD230比值一般大于2，比值低说明有盐分、氨基酸和核苷酸等小分子物质存在[72]。表2.2不同物种生肉鲜DNA浓度及纯度检测（±s）Table2.2DetectionoffreshDNAconcentrationandpurityofrawmeatofdifferentspecies（±s）名称Name猪Pig牛Cattle羊Sheeo鸡Chicken草鱼GrasscarpSDS法SDSmethod浓度/ng/μL129.2±4.8115.7±6.6163.9±4.5157.6±4.8133.6±9.3OD260/2801.9±0.171.67±0.131.79±0.11.82±0.111.71±0.1OD260/2301.94±0.111.98±0.261.83±0.091.79±0.122.03±0.08试剂盒法DNAkitmethod浓度/ng/μL249.3±2.5251.9±1.69229.2±3.22262.6±5.8246.8±5.4OD260/2801.81±0.131.83±0.11.79±0.131.82±0.051.84±0.12
第2章不同动物肌肉组织中DNA提取方法的研究292.2A的试剂盒法和异硫氰酸胍法提取的生鲜组织DNA经过PCR扩增后，电泳检测的条带亮度明亮清晰，SDS法提取的基因组DNA经过PCR后条带明亮度程度不一，10、13、14号样品清晰度和明亮度较差。表明此三个样品PCR产物浓度低且产物质量差。图2.2B的三种方法提取的基因组DNA经PCR扩增后于琼脂糖凝胶电泳检测观察，发现4、9、14、15号条带颜色较暗且条带弥散严重，表明样品基因组DNA的PCR产物浓度低，且完整性低于其他样品。图2.2A不同组织生鲜肉PCR电泳检测Fig.2.2APCRdetectionoffreshmeatfromdifferenttissues（M：marker(100bp)；1、2、3、4、5为试剂盒提取的生鲜基因组作为模板；6、7、8、9、10为异硫氰酸胍法提取的生鲜基因组作为模板；11、12、13、14、15为SDS法提取的生鲜基因组作为模板，cytb基因扩增后的效果。）图2.2B不同组织高压肉PCR电泳检测Fig.2.2BPCRdetectionofdifferenttissuesofhigh-pressuremeat
【参考文献】：
期刊论文
[1]食品中猪源性成分检测方法研究进展[J]. 程浩,李明生,陈士恩,丁功涛,田晓静,热孜万古力·赛买提,杜江龙,高丹丹. 食品与机械. 2018(08)
[2]瘦肉精的毒害作用及其试纸快速检测技术[J]. 李明. 食品安全导刊. 2018(16)
[3]双重实时荧光PCR定量检测动物产品中牛源性成分[J]. 高志强,汪琳,蒲静,尹羿,张伟,赵相鹏,姚震宇. 生物技术通报. 2018(09)
[4]一种食品中猪源性成分的快速检测技术[J]. 李鑫,孙甸甸,张慧娟,冯娜娜,尹秋源,尹锐. 今日畜牧兽医. 2018(02)
[5]PCR法检测清真灌肠中猪源性禁忌物[J]. 刘建利,侯琳琳,曹晓虹,侯亚男,赵子龙,白宇川. 食品科技. 2018(02)
[6]提取动物组织DNA的方法比较[J]. 王戊腾,胡鹏,安得霞. 甘肃畜牧兽医. 2016(23)
[7]我国病死猪肉利益链分析及监管对策研究[J]. 韦文英,金江军,姚卫浩. 食品界. 2015(11)
[8]猪源性成分检测中3种DNA提取方法比较[J]. 王萍,乔勇升,韩芷玲. 生物加工过程. 2015(06)
[9]PCR及其改进技术在食品安全检测中的应用[J]. 刘皓. 食品安全导刊. 2015(18)
[10]呷晡小肥羊以猪血冒充鸭血 街边麻辣烫含致癌物[J]. 胡笑红. 农产品市场周刊. 2015(11)
硕士论文
[1]微滴式数字PCR技术用于牛羊肉掺假定量检测方法的研究[D]. 陈晨.河北农业大学 2018
[2]畜禽类加工肉制品种属鉴定的研究[D]. 王冬亮.贵州大学 2016
[3]光谱分析技术在食品及医药检测上的应用[D]. 毛晓婷.中国计量学院 2016
[4]基于分子生物学的肉类鉴定方法研究[D]. 李通.北京化工大学 2013
[5]我国食品安全监管研究[D]. 张红梅.郑州大学 2012
[6]夹心ELISA方法检测熟肉中猪肉成分的研究[D]. 陈辉.华中农业大学 2011
本文编号：3414782
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A不同物种生鲜组织DNA电泳检测
第2章不同动物肌肉组织中DNA提取方法的研究27图2.1B不同高压组织DNA电泳检测Fig2.1BHigh-pressuretissueDNAelectrophoresisdetectionofdifferenttissues（M：marker(DL10000bp)；1、2、3、4、5为SDS法提取的高压组织基因组DNA；6、7、8、9、10为试剂盒法提取的高压组织基因组DNA；11、12、13、14、15为异硫氰酸胍法提取的高压组织基因组DNA。）2.3.2DNA的纯度及浓度测定用酶标仪测定所提取DNA的纯度和浓度，结果如表2.2、表2.3所示。OD260/OD280的比值用来体现蛋白质和酚等杂质的去除情况，OD260/OD280的比值在1.8左右，说明DNA纯度高，低说明DNA中有蛋白质以及苯酚等杂质未除尽，比值高则说明有RNA。230nm处是多肽、苯酚、碳水化合物的吸光度，所以OD260/OD230比值反映了DNA样品碳水化合物和盐类等物质的污染情况。OD260/OD230比值一般大于2，比值低说明有盐分、氨基酸和核苷酸等小分子物质存在[72]。表2.2不同物种生肉鲜DNA浓度及纯度检测（±s）Table2.2DetectionoffreshDNAconcentrationandpurityofrawmeatofdifferentspecies（±s）名称Name猪Pig牛Cattle羊Sheeo鸡Chicken草鱼GrasscarpSDS法SDSmethod浓度/ng/μL129.2±4.8115.7±6.6163.9±4.5157.6±4.8133.6±9.3OD260/2801.9±0.171.67±0.131.79±0.11.82±0.111.71±0.1OD260/2301.94±0.111.98±0.261.83±0.091.79±0.122.03±0.08试剂盒法DNAkitmethod浓度/ng/μL249.3±2.5251.9±1.69229.2±3.22262.6±5.8246.8±5.4OD260/2801.81±0.131.83±0.11.79±0.131.82±0.051.84±0.12
第2章不同动物肌肉组织中DNA提取方法的研究292.2A的试剂盒法和异硫氰酸胍法提取的生鲜组织DNA经过PCR扩增后，电泳检测的条带亮度明亮清晰，SDS法提取的基因组DNA经过PCR后条带明亮度程度不一，10、13、14号样品清晰度和明亮度较差。表明此三个样品PCR产物浓度低且产物质量差。图2.2B的三种方法提取的基因组DNA经PCR扩增后于琼脂糖凝胶电泳检测观察，发现4、9、14、15号条带颜色较暗且条带弥散严重，表明样品基因组DNA的PCR产物浓度低，且完整性低于其他样品。图2.2A不同组织生鲜肉PCR电泳检测Fig.2.2APCRdetectionoffreshmeatfromdifferenttissues（M：marker(100bp)；1、2、3、4、5为试剂盒提取的生鲜基因组作为模板；6、7、8、9、10为异硫氰酸胍法提取的生鲜基因组作为模板；11、12、13、14、15为SDS法提取的生鲜基因组作为模板，cytb基因扩增后的效果。）图2.2B不同组织高压肉PCR电泳检测Fig.2.2BPCRdetectionofdifferenttissuesofhigh-pressuremeat
【参考文献】：
期刊论文
[1]食品中猪源性成分检测方法研究进展[J]. 程浩,李明生,陈士恩,丁功涛,田晓静,热孜万古力·赛买提,杜江龙,高丹丹. 食品与机械. 2018(08)
[2]瘦肉精的毒害作用及其试纸快速检测技术[J]. 李明. 食品安全导刊. 2018(16)
[3]双重实时荧光PCR定量检测动物产品中牛源性成分[J]. 高志强,汪琳,蒲静,尹羿,张伟,赵相鹏,姚震宇. 生物技术通报. 2018(09)
[4]一种食品中猪源性成分的快速检测技术[J]. 李鑫,孙甸甸,张慧娟,冯娜娜,尹秋源,尹锐. 今日畜牧兽医. 2018(02)
[5]PCR法检测清真灌肠中猪源性禁忌物[J]. 刘建利,侯琳琳,曹晓虹,侯亚男,赵子龙,白宇川. 食品科技. 2018(02)
[6]提取动物组织DNA的方法比较[J]. 王戊腾,胡鹏,安得霞. 甘肃畜牧兽医. 2016(23)
[7]我国病死猪肉利益链分析及监管对策研究[J]. 韦文英,金江军,姚卫浩. 食品界. 2015(11)
[8]猪源性成分检测中3种DNA提取方法比较[J]. 王萍,乔勇升,韩芷玲. 生物加工过程. 2015(06)
[9]PCR及其改进技术在食品安全检测中的应用[J]. 刘皓. 食品安全导刊. 2015(18)
[10]呷晡小肥羊以猪血冒充鸭血 街边麻辣烫含致癌物[J]. 胡笑红. 农产品市场周刊. 2015(11)
硕士论文
[1]微滴式数字PCR技术用于牛羊肉掺假定量检测方法的研究[D]. 陈晨.河北农业大学 2018
[2]畜禽类加工肉制品种属鉴定的研究[D]. 王冬亮.贵州大学 2016
[3]光谱分析技术在食品及医药检测上的应用[D]. 毛晓婷.中国计量学院 2016
[4]基于分子生物学的肉类鉴定方法研究[D]. 李通.北京化工大学 2013
[5]我国食品安全监管研究[D]. 张红梅.郑州大学 2012
[6]夹心ELISA方法检测熟肉中猪肉成分的研究[D]. 陈辉.华中农业大学 2011
本文编号：3414782
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