EGCG抑制甲基乙二醛及晚期糖基化终末产物对PC12细胞损伤作用研究
发布时间：2021-11-01 23:04
甲基乙二醛（methylglyoxal,MGO）来源于异常的糖酵解和食物,是晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）的前体。MGO可与蛋白质、脂质或核酸发生非酶促反应形成AGEs,MGO与AGEs既可通过饮食获得,也可以在体内生成。人体中MGO和AGEs的积累参与了多种病理学的发展,例如神经退行性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化和糖尿病等。随着人口的老龄化,神经退行性疾病发病率逐年上升,已经成为全球性的健康问题。抑制MGO和AGEs诱导的神经毒性可能是治疗神经退行性疾病的潜在方法。表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）主要来源于绿茶,有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种活性,然而EGCG是否能够抑制MGO和AGEs诱导的神经毒性及抑制AGEs生成需要进一步探讨。本研究利用大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（rat adrenal pheochromocytoma,PC12）模型进行实验,探究EGCG是否能够抑制MGO和AGEs诱导的PC12细胞损伤。通过MTT法确定EGCG的安全浓度和MGO、AGEs的损伤浓度...
【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
第1章 引言
1.1 甲基乙二醛(MGO)
1.1.1 MGO的体内和体外来源
1.1.2 MGO体内代谢
1.1.3 MGO的神经毒性
1.2 晚期糖基化终末产物(AGEs)
1.2.1 AGEs的种类和结构
1.2.2 AGEs的生成途径
1.2.3 AGEs体内和体外来源
1.2.4 AGEs的代谢
1.2.5 AGEs的神经毒性
1.3 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)
1.4 本课题研究意义
1.5 本课题研究内容
1.5.1 EGCG抑制MGO对 PC12 细胞损伤作用研究
1.5.2 EGCG抑制MGO诱导BSA生成AGEs
1.5.3 EGCG抑制AGEs对 PC12 细胞损伤作用研究
第2章 EGCG抑制MGO对 PC12 细胞损伤作用研究
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株、生化试剂和耗材
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 试剂配制
2.2 实验方法及步骤
2.2.1 细胞培养
2.2.1.1 细胞复苏
2.2.1.2 细胞换液
2.2.1.3 细胞传代
2.2.1.4 细胞冻存
2.2.2 细胞计数
2.2.3 EGCG浓度的选择
2.2.4 MGO浓度的选择
2.2.5 细胞分组
2.2.6 细胞存活率检测
2.2.7 ROS水平检测
2.2.8 线粒体膜电位检测
2.2.9 细胞凋亡检测
2.2.10 细胞总蛋白提取
2.2.11 细胞总蛋白浓度测定
2.2.12 细胞核蛋白提取
2.2.13 细胞核蛋白浓度测定
2.2.14 蛋白质免疫印迹技术
2.2.15 数据分析
2.3 研究结果
2.3.1 EGCG安全浓度的确定
2.3.2 MGO浓度的确定
2.3.3 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞存活率降低的影响
2.3.4 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞ROS水平升高的影响
2.3.5 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞线粒体膜电位水平降低的影响
2.3.6 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞凋亡的影响
2.3.7 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞GLO1 蛋白表达的影响
2.3.8 EGCG对 PC12 细胞MAPK信号通路的影响
2.3.9 EGCG对 PC12 细胞凋亡蛋白表达的影响
2.3.10 EGCG对 PC12 细胞NF-κB信号通路的影响
2.3.11 EGCG对 PC12 细胞ERK/CREB/BDNF信号通路的影响
2.4 讨论与小结
第3章 EGCG抑制AGEs生成研究
3.1 实验材料
3.1.1 生化试剂和耗材
3.1.2 主要仪器设备
3.2 实验方法及步骤
3.2.1 BSA-MGO体系建立
3.2.2 荧光光谱测定
3.2.3 紫外光谱测定
3.2.4 圆二色谱测定
3.2.5 分子对接
3.2.6 数据分析
3.3 研究结果
3.3.1 AGEs检测
3.3.2 EGCG对 AGEs形成的抑制作用
3.3.3 EGCG与 BSA的分子对接研究
3.4 讨论与小结
第4章 EGCG抑制AGEs对 PC12 细胞损伤作用研究
4.1 实验材料
4.1.1 细胞株、生化试剂和耗材
4.1.2 主要仪器设备
4.1.3 试剂配制
4.2 实验方法及步骤
4.2.1 细胞培养
4.2.2 制备AGEs
4.2.3 EGCG浓度的选择
4.2.4 AGEs浓度的选择
4.2.5 细胞分组
4.2.6 细胞存活率检测
4.2.7 ROS水平检测
4.2.8 线粒体膜电位检测
4.2.9 细胞凋亡检测
4.2.10 细胞总蛋白提取
4.2.11 细胞总蛋白浓度测定
4.2.12 细胞核蛋白提取
4.2.13 细胞核蛋白浓度测定
4.2.14 蛋白质免疫印迹技术
4.2.15 数据分析
4.3 研究结果
4.3.1 AGEs浓度的确定
4.3.2 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞存活率降低的影响
4.3.3 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞ROS水平升高的影响
4.3.4 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞线粒体膜电位水平降低的影响
4.3.5 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞凋亡的影响
4.3.6 EGCG对 PC12 细胞RAGE蛋白表达的影响
4.3.7 EGCG对 PC12 细胞MAPK信号通路的影响
4.3.8 EGCG对 PC12 细胞凋亡蛋白表达的影响
4.3.9 EGCG对 PC12 细胞NF-κB信号通路的影响
4.3.10 EGCG对 PC12 细胞ERK/CREB/BDNF信号通路的影响
4.4 讨论与小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]阿魏酸对晚期糖基化终末产物诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 李玲,谢峥,万有才. 中国临床药理学杂志. 2019(14)
[2]线粒体中的NF-κB调节脂多糖诱导损伤后PC12细胞的凋亡（英文）[J]. Ying SONG,Zhuo-chao WU,Wei DING,Yun BEI,Zhi-yun LIN. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2018(06)
[3]食品中甲基乙二醛的来源、毒性及其清除剂研究进展[J]. 过利敏,张文生,李士明. 食品科学. 2018(07)
[4]AGEs/RAGE/SphK1信号通路介导马钱苷抗AGEs损伤GMCs的机制研究[J]. 吕兴,许惠琴,吕高虹,吴云皓,陈玉萍,沈红胜,戴国英,徐康. 南京中医药大学学报. 2017(04)
[5]Exendin-4对甲基乙二醛诱导PC12细胞氧化应激的影响[J]. 周清,王燕萍,刘小莺,刘晓红,潘晓东,陈洲,刘礼斌. 中国应用生理学杂志. 2016(05)
[6]表没食子儿茶素没食子酸酯抗氧化作用机制的研究进展[J]. 刘婷婷,孟馨. 现代药物与临床. 2016(06)
[7]ERK/CREB信号通路在异菝葜皂苷元促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNF表达中的作用[J]. 张瑞,夏志明,孙小余,李加梅,张永芳,胡雅儿. 上海交通大学学报(医学版). 2016(05)
[8]牡丹皮体外抑制AGEs生成及活性成分筛选研究[J]. 陈娟,章丽,张明华,赵迪,袁嘉瑞,封亮,贾晓斌. 中国中药杂志. 2016(05)
[9]绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响[J]. 王艳,唐灵,周康,张秋艳. 中草药. 2015(20)
[10]槲皮素抑制蛋白糖基化及DNA损伤[J]. 陆敏,李晓明,卢永翎,郑铁松,张丹,吕丽爽. 食品科学. 2016(01)
博士论文
[1]茶叶中晚期糖基化终末产物的形成及影响因素的研究[D]. 焦叶.江南大学 2019
[2]EGCG缓解丙烯酰胺诱导的大鼠肝脏及神经损伤机理研究[D]. 贺音.沈阳农业大学 2017
[3]肉类热加工过程中晚期糖基化终末产物的形成及其内外源影响因素[D]. 孙晓华.上海海洋大学 2016
[4]晚期糖基化终末产物通过线粒体功能障碍和Fas-FasL途径诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的机制研究[D]. 王璞.武汉大学 2016
[5]跨血脑屏障的重组人PTD-BDNF的制备及生物学作用[D]. 周建平.中国人民解放军军事医学科学院 2007
硕士论文
[1]三种黄酮类化合物抑制a-葡萄糖苷酶活性和晚期糖基化终末产物生成作用研究[D]. 何勇林.辽宁大学 2019
[2]香菇菌丝体多糖对糖毒性所致胰岛β细胞损伤保护作用研究[D]. 刘丹.辽宁大学 2019
[3]花旗松素抑制六价铬Cr（Ⅵ）诱导的细胞损伤及细胞粘附作用研究[D]. 王帅.辽宁大学 2019
[4]淫羊藿次苷Ⅱ抗氧糖剥夺/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤作用及机制研究[D]. 冯琳颖.遵义医学院 2018
[5]绿茶中晚期糖基化终产物含量调查及其生成影响因素研究[D]. 李凤丽.江南大学 2016
[6]甲基乙二醛诱导EA.hy926细胞线粒体膜通透性转换孔开放的机制[D]. 穆颍颍.西北农林科技大学 2016
[7]硫化氢对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制的探讨[D]. 杨丝丝.南华大学 2007
本文编号：3470856
【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
第1章 引言
1.1 甲基乙二醛(MGO)
1.1.1 MGO的体内和体外来源
1.1.2 MGO体内代谢
1.1.3 MGO的神经毒性
1.2 晚期糖基化终末产物(AGEs)
1.2.1 AGEs的种类和结构
1.2.2 AGEs的生成途径
1.2.3 AGEs体内和体外来源
1.2.4 AGEs的代谢
1.2.5 AGEs的神经毒性
1.3 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)
1.4 本课题研究意义
1.5 本课题研究内容
1.5.1 EGCG抑制MGO对 PC12 细胞损伤作用研究
1.5.2 EGCG抑制MGO诱导BSA生成AGEs
1.5.3 EGCG抑制AGEs对 PC12 细胞损伤作用研究
第2章 EGCG抑制MGO对 PC12 细胞损伤作用研究
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株、生化试剂和耗材
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 试剂配制
2.2 实验方法及步骤
2.2.1 细胞培养
2.2.1.1 细胞复苏
2.2.1.2 细胞换液
2.2.1.3 细胞传代
2.2.1.4 细胞冻存
2.2.2 细胞计数
2.2.3 EGCG浓度的选择
2.2.4 MGO浓度的选择
2.2.5 细胞分组
2.2.6 细胞存活率检测
2.2.7 ROS水平检测
2.2.8 线粒体膜电位检测
2.2.9 细胞凋亡检测
2.2.10 细胞总蛋白提取
2.2.11 细胞总蛋白浓度测定
2.2.12 细胞核蛋白提取
2.2.13 细胞核蛋白浓度测定
2.2.14 蛋白质免疫印迹技术
2.2.15 数据分析
2.3 研究结果
2.3.1 EGCG安全浓度的确定
2.3.2 MGO浓度的确定
2.3.3 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞存活率降低的影响
2.3.4 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞ROS水平升高的影响
2.3.5 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞线粒体膜电位水平降低的影响
2.3.6 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞凋亡的影响
2.3.7 EGCG对 MGO诱导PC12 细胞GLO1 蛋白表达的影响
2.3.8 EGCG对 PC12 细胞MAPK信号通路的影响
2.3.9 EGCG对 PC12 细胞凋亡蛋白表达的影响
2.3.10 EGCG对 PC12 细胞NF-κB信号通路的影响
2.3.11 EGCG对 PC12 细胞ERK/CREB/BDNF信号通路的影响
2.4 讨论与小结
第3章 EGCG抑制AGEs生成研究
3.1 实验材料
3.1.1 生化试剂和耗材
3.1.2 主要仪器设备
3.2 实验方法及步骤
3.2.1 BSA-MGO体系建立
3.2.2 荧光光谱测定
3.2.3 紫外光谱测定
3.2.4 圆二色谱测定
3.2.5 分子对接
3.2.6 数据分析
3.3 研究结果
3.3.1 AGEs检测
3.3.2 EGCG对 AGEs形成的抑制作用
3.3.3 EGCG与 BSA的分子对接研究
3.4 讨论与小结
第4章 EGCG抑制AGEs对 PC12 细胞损伤作用研究
4.1 实验材料
4.1.1 细胞株、生化试剂和耗材
4.1.2 主要仪器设备
4.1.3 试剂配制
4.2 实验方法及步骤
4.2.1 细胞培养
4.2.2 制备AGEs
4.2.3 EGCG浓度的选择
4.2.4 AGEs浓度的选择
4.2.5 细胞分组
4.2.6 细胞存活率检测
4.2.7 ROS水平检测
4.2.8 线粒体膜电位检测
4.2.9 细胞凋亡检测
4.2.10 细胞总蛋白提取
4.2.11 细胞总蛋白浓度测定
4.2.12 细胞核蛋白提取
4.2.13 细胞核蛋白浓度测定
4.2.14 蛋白质免疫印迹技术
4.2.15 数据分析
4.3 研究结果
4.3.1 AGEs浓度的确定
4.3.2 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞存活率降低的影响
4.3.3 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞ROS水平升高的影响
4.3.4 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞线粒体膜电位水平降低的影响
4.3.5 EGCG对 AGEs诱导PC12 细胞凋亡的影响
4.3.6 EGCG对 PC12 细胞RAGE蛋白表达的影响
4.3.7 EGCG对 PC12 细胞MAPK信号通路的影响
4.3.8 EGCG对 PC12 细胞凋亡蛋白表达的影响
4.3.9 EGCG对 PC12 细胞NF-κB信号通路的影响
4.3.10 EGCG对 PC12 细胞ERK/CREB/BDNF信号通路的影响
4.4 讨论与小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]阿魏酸对晚期糖基化终末产物诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 李玲,谢峥,万有才. 中国临床药理学杂志. 2019(14)
[2]线粒体中的NF-κB调节脂多糖诱导损伤后PC12细胞的凋亡（英文）[J]. Ying SONG,Zhuo-chao WU,Wei DING,Yun BEI,Zhi-yun LIN. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2018(06)
[3]食品中甲基乙二醛的来源、毒性及其清除剂研究进展[J]. 过利敏,张文生,李士明. 食品科学. 2018(07)
[4]AGEs/RAGE/SphK1信号通路介导马钱苷抗AGEs损伤GMCs的机制研究[J]. 吕兴,许惠琴,吕高虹,吴云皓,陈玉萍,沈红胜,戴国英,徐康. 南京中医药大学学报. 2017(04)
[5]Exendin-4对甲基乙二醛诱导PC12细胞氧化应激的影响[J]. 周清,王燕萍,刘小莺,刘晓红,潘晓东,陈洲,刘礼斌. 中国应用生理学杂志. 2016(05)
[6]表没食子儿茶素没食子酸酯抗氧化作用机制的研究进展[J]. 刘婷婷,孟馨. 现代药物与临床. 2016(06)
[7]ERK/CREB信号通路在异菝葜皂苷元促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNF表达中的作用[J]. 张瑞,夏志明,孙小余,李加梅,张永芳,胡雅儿. 上海交通大学学报(医学版). 2016(05)
[8]牡丹皮体外抑制AGEs生成及活性成分筛选研究[J]. 陈娟,章丽,张明华,赵迪,袁嘉瑞,封亮,贾晓斌. 中国中药杂志. 2016(05)
[9]绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响[J]. 王艳,唐灵,周康,张秋艳. 中草药. 2015(20)
[10]槲皮素抑制蛋白糖基化及DNA损伤[J]. 陆敏,李晓明,卢永翎,郑铁松,张丹,吕丽爽. 食品科学. 2016(01)
博士论文
[1]茶叶中晚期糖基化终末产物的形成及影响因素的研究[D]. 焦叶.江南大学 2019
[2]EGCG缓解丙烯酰胺诱导的大鼠肝脏及神经损伤机理研究[D]. 贺音.沈阳农业大学 2017
[3]肉类热加工过程中晚期糖基化终末产物的形成及其内外源影响因素[D]. 孙晓华.上海海洋大学 2016
[4]晚期糖基化终末产物通过线粒体功能障碍和Fas-FasL途径诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的机制研究[D]. 王璞.武汉大学 2016
[5]跨血脑屏障的重组人PTD-BDNF的制备及生物学作用[D]. 周建平.中国人民解放军军事医学科学院 2007
硕士论文
[1]三种黄酮类化合物抑制a-葡萄糖苷酶活性和晚期糖基化终末产物生成作用研究[D]. 何勇林.辽宁大学 2019
[2]香菇菌丝体多糖对糖毒性所致胰岛β细胞损伤保护作用研究[D]. 刘丹.辽宁大学 2019
[3]花旗松素抑制六价铬Cr（Ⅵ）诱导的细胞损伤及细胞粘附作用研究[D]. 王帅.辽宁大学 2019
[4]淫羊藿次苷Ⅱ抗氧糖剥夺/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤作用及机制研究[D]. 冯琳颖.遵义医学院 2018
[5]绿茶中晚期糖基化终产物含量调查及其生成影响因素研究[D]. 李凤丽.江南大学 2016
[6]甲基乙二醛诱导EA.hy926细胞线粒体膜通透性转换孔开放的机制[D]. 穆颍颍.西北农林科技大学 2016
[7]硫化氢对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制的探讨[D]. 杨丝丝.南华大学 2007
本文编号：3470856
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3470856.html
