施氏鲟鱼卵β’-c糖蛋白的结构表征与免疫交叉反应相关研究

发布时间：2022-01-17 20:35

　　鱼卵中含有丰富的卵黄蛋白,主要由卵黄脂磷蛋白（Lv）、卵黄高磷蛋白（Pv）和β’-组分（β’-c）组成,均属于糖蛋白。研究发现,鱼类鱼卵中主要的过敏原为β’-c糖蛋白,世界卫生组织和国际免疫学联合会的官方过敏原清单中把其命名为“Onc k 5”。迄今为止,与其他食物过敏原相比,鱼卵中过敏原β’-c的结构方面的信息较少,对于不同鱼种鱼卵的致敏原因也缺乏系统性地研究。本课题采用施氏鲟鱼卵作为研究对象,着重研究鲟鱼卵中β’-c糖蛋白结构表征、探究不同物种间过敏蛋白的交叉反应性,并从生物信息学方面验证其免疫相关性。主要研究结果如下:1.对分离纯化后得到鲟鱼卵β’-c蛋白进行多糖和蛋白含量的测定,多糖含量为4.87%,蛋白含量为33.2%。采用PNGase F酶释放糖蛋白中的N-糖链,经完全甲基化处理后,通过离子肼质谱仪共鉴定出7种N-糖链,包括3种高甘露糖型（Hex3HexNAc2、Hex4HexNAc2、Hex5HexNAc2）、4 种复杂型（Hex3HexNAc3、Hex3HexNAc4、Hex3HexNAc5、Hex3HexNAc6）,采用HILIC-ion trap-MSn对胰蛋白酶酶... 

【文章来源】：浙江工商大学浙江省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．２葡萄糖标准曲线??

－Ｃ蛋白粉末配成３?ｍｇ／ｍＬ的溶液，经ＢＣＡ蛋白测定发现Ｐ’－Ｃ多糖含量为０．９９７??ｍｇ／ｍＬ，故ｐ，－ｃ糖蛋中多糖含量沟４．８７?％。??０．７?－Ｉ??０．６?■?ｙ?＝?０．０１４１Ｘ?＋?０．０１０５??０．５－?Ｒ２?＝?０．９９３８??Ｅ?？？？？??ｓ?０４．??穿?０．３?－??＜?？，？？？??０．２?－??〇．１?．??０?ｍ?１?１?１?１?１??０?１０?２０?３０?４０?５０??葡萄糖浓度（ｕｇ／ｍＬ?）??图２．２葡萄糖标准曲线??Ｆｉｇ．２．２?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ??ＢＣＡ测蛋白含量标准曲线，如图２．３所示。标准曲线以蛋白浓度（ｍｇ／ｍＬ）为横坐标，??蛋＆溶液在５６２?ｎｍ处的吸光值为纵坐标，标准曲线方程为Ｙ＝１．０１０８Ｘ－０．１２９８，Ｒ２＞０．９９，??表明其线性效果良好，可用其测样品中蛋白浓度。将冻爭的Ｐ’－ｃ蛋白粉末配成３?ｍｇ／ｍＬ??的．溶液：，经ＢＣＡ蛋斑测定发现ｐ’－ｃ蛋．白含慧为０．９９７?ｍｇ／ｍＬ，故ｐ’－ｃ糖蛋肯中可洛性??蛋白含量为３３．２％。??０．７?－Ｉ??０．６?■?？？？？？??＿?０．５?■??＾?°＇４?■?ｙ?＝?１．０１０８Ｘ?＋?０．?１２９８??￥?０．３?■???？?Ｒ２?＝?０．?９９２２??＾０．２－??？?？？？??０１?〇??〇?０?０．１?０．２?０．３?０．４?０．５?０．６??蛋白质浓度（ｍｇ／ｍＬ）??图２．３?ＢＣＡ蛋白标准曲线??Ｆｉｇ．２．３?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ＢＣＡ?ｐｒｏｔｅｉｎ??２．４．

施氏轉鱼鄭Ｐ＿－Ｃ糖輋白猶结构表征与免疫突叉戾应相角研究??ｓ５ｅ＂?＇?＂＊５ｅ＂?＇?＂？ｉｓ?＇?ｔｉｓ＂?＇?ｔｉｅ＂?＇?Ｖｓｅ?＂ｊａｅ＇?Ｖ＊?＇?＇？？＇？＂?＇?＂？？？＂?＇?ｓｘ?＇?ｔｉｘ?＇?ｔ＊ｓｓ?＂?ｍ＇ｓｓ?＂?ｘ＊?＇?＂ａ＇ｘ＂?＂＊？＂＊?＇?＞？＇ｏｅ?＇?ｉｉｅｓ＇?＇?＜Ｗ?＇?＜ｘ?＇?＇＜？＊＂?＇?Ｖ？＇ｘ＇?＊＇？?＇?？＊＇＊＇?＇?＂？＊ｓｓ??？？??图２．１２?ＨＩＬＩＣ分离ｐ’－ｃ糖蛋白胰蛋白酶酶解产物：紫外检测液相色谱图??Ｆｉｇ．?２．１２?Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐ？－ｃ?ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ?ｔｒｙｐｔｉｃ?ｄｉｇｅｓｔ?ｉｎ?ＨＩＬＩＣ?ｗｉｔｈ?ＵＶ?２８０?ｎｍ??图２．１２为ＨＩＬＩＣ对酶解产物糖肽的分离图，如图知糖肽中的多种肽分离效果较好，??麗得到的离子峰信号値较高，糖基化的肽和非糖基化的肽清晰的分离，肽段在经过糖基??化后，亲水性加强，所以在色谱柱上的保留时间变长，相比较于非糖基化的肽更难洗脱，??因此，糖肽均在非糖基化肽后得到分离［７９］。通过对糖肽中糖链碎片离子的分析，自样品??中肽段洗脱完后＊糖肽开始进行洗脱，且后面的峰均为糖基化后的肽段，根据肽段的大??孝肽段中氨基酸的极性大孝糖链的大小及结构组成在色谱柱上进行洗脱分离。??糖肽经ＨＩＬＩＣ－ｉｏｎｔｒａｐ－ＭＳ１１分析并且采用多级质谱ＭＳ２和ＭＳ３碎裂模式采集。质谱??获得的ＭＳ／ＭＳ数据用于筛选糖肽的出现，糖肽的筛选是通过观察ＭＳ２提取离子流图中是??否会出现糖链的特征碎片，即一系列氧鑰离子如５２８?（ＨｅｘＮＡｃ＋２Ｈｅｘ＋Ｈ）＋、ｗ．４?５６９

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本文编号：3595397