BTI的理化性质、分子改造及在鲈鱼保鲜中的应用

发布时间：2022-12-04 15:17

　　荞麦胰蛋白酶抑制剂（buckwheat trypsin inhibitor,BTI）是胰蛋白酶的一种竞争性抑制剂,可以与胰蛋白酶特异性结合,从而达到抑制胰蛋白酶活性的效果。研究表明,BTI对于临床新药物的开发和抗虫转基因作物研究有着实际意义。本课题在已解析了BTI一级序列及三维结构的基础上,进一步研究了BTI的理化性质,并制备了BTI的突变体,获得一种新型抑制剂。最后初步研究了BTI在鲈鱼保鲜上的应用,拓宽了胰蛋白酶抑制剂的应用领域。本研究主要内容如下:第一部分:通过比较荞麦胰蛋白酶抑制剂和大豆胰蛋白酶抑制剂（soybean trypsin inhibitor,SBTI）的抑制活性,并进一步测定了温度、pH、盐离子、有机物等对两种抑制剂活性的影响。实验结果表明:100℃水浴加热后BTI与SBTI的抑制活性均降低,加热80 min后,BTI的剩余抑制率为75%,SBTI则全部失活。用pH 2-12缓冲液处理对BTI与SBTI活性均无影响。Zn²⁺对BTI活性有显著降低作用。当浓度为2-10 mM时,Mg²⁺、Cu²⁺、H<... 

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 胰蛋白酶抑制剂
    1.2 大豆胰蛋白酶抑制剂
    1.3 荞麦胰蛋白酶抑制剂
    1.4 定点突变技术
    1.5 食品中的内源酶
    1.6 乳酸链球菌素
    1.7 涂膜保鲜技术
第二章 BTI与SBTI理化性质的比较
    2.1 材料与仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 BTI的诱导表达和纯化
        2.2.2 BTI与SBTI抑制活性的测定
        2.2.3 温度对BTI及SBTI抑制活性的影响
        2.2.4 pH对BTI及SBTI抑制活性的影响
        2.2.5 盐离子对BTI及SBTI抑制活性的影响
        2.2.6 有机物对BTI及SBTI抑制活性的影响
        2.2.7 其他化合物对BTI及SBTI抑制活的影响
        2.2.8 抑制剂的动力学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 BTI与SBTI对胰蛋白酶的半抑制浓度
        2.3.2 温度对BTI与 SBTI抑制活性的影响
        2.3.3 pH对抑制剂抑制活性的影响
        2.3.4 金属离子对抑制剂活性的影响
        2.3.5 有机物对抑制剂活性影响结果
        2.3.6 不同化合物对抑制剂活性的影响
        2.3.7 抑制剂动力学分析
    2.4 讨论
第三章 BTI突变体BCI的制备及理化性质研究
    3.1 材料及仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 BCI突变体基因PCR扩增
        3.2.2 PCR产物的回收
        3.2.3 重组质粒的连接与转化
        3.2.4 BCI的诱导表达和纯化
        3.2.5 BCI抑制活性的测定
        3.2.6 温度对BCI抑制活性影响
        3.2.7 pH对BCI抑制活性影响
        3.2.8 离子、有机试剂等对BCI抑制活性影响
    3.3 结果与分析
        3.3.1 PCR产物的回收与测序
        3.3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        3.3.3 BCI抑制活性分析
        3.3.4 温度对BCI抑制活性影响分析
        3.3.5 pH对BCI抑制活性影响分析
        3.3.6 离子、有机试剂等对BCI抑制活性影响分析
    3.4 讨论
第四章 添加BTI的保鲜涂膜对鲈鱼的保鲜效果
    4.1 材料与仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 保鲜涂膜的制备
        4.2.2 肉样处理
        4.2.3 菌落总数的测定
        4.2.4 挥发性盐基氮的测定
        4.2.5 硫代巴比妥酸的测定
        4.2.6 pH值的测定
        4.2.7 蒸煮损失率的测定
    4.3 结果与分析
        4.3.1 菌落总数的变化分析
        4.3.2 挥发性盐基氮的变化分析
        4.3.3 硫代巴比妥酸的变化分析
        4.3.4 pH值变化分析
        4.3.5 蒸煮损失率的变化分析
    4.4 讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
个人简介及联系方式


【参考文献】：
期刊论文
[1]可食性涂膜及其对水产品品质的影响[J]. 赵丹丹,胡俊,陈文烜.  安徽农业科学. 2019(23)
[2]壳聚糖-咖啡酸衍生物涂膜对鲈鱼的保鲜效果研究[J]. 唐森,韦浪生,覃逸明,张鹏,吴国勇.  安徽农业科学. 2019(23)
[3]Nisin产生菌株的筛选及产物初步探究与鉴定[J]. 李俊辉,王燕,周宝琳,李丕武,赵鑫君,王婷.  中国调味品. 2019(12)
[4]羟基自由基氧化对乌贼蛋白分子间作用力及结构的影响[J]. 张洪超,薛张芝,徐晓蓉,丁源,李和生,金洋,王鸿飞,许凤.  核农学报. 2020(01)
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博士论文
[1]脂肪酶催化有机合成反应的合理调控[D]. 田雪梅.吉林大学 2016

硕士论文
[1]荞麦胰蛋白酶抑制剂的固定化及缓释载体的制备[D]. 李霞.山西大学 2019
[2]荞麦胰蛋白酶抑制剂对鸡肉肉糜凝胶特性的影响[D]. 栗安之.山西大学 2019
[3]兔肉微冻保鲜技术研究[D]. 兰洋.西南大学 2016
[4]明胶基纳米复合材料的制备、表征及其应用[D]. 陈广新.齐鲁工业大学 2015
[5]乳酸链球菌素产生菌株筛选及其抑菌机理研究[D]. 白泽朴.沈阳农业大学 2008



本文编号：3708505