基于DNA/RNA杂交的农产品中有机磷农药残留生物条形码免疫分析方法研究

发布时间：2023-05-20 09:49

　　我国是农业大国,农产品质量与安全是保障国民健康和经济社会发展的前提。农药在防治虫害,调节农作物生长方面起着重要的作用,但是盲目使用农药会造成农药残留超标等问题,对人类健康和生态环境造成不可逆转的危害。因此急需建立一种灵敏度高、准确性好、可重复性强、操作性简便的检测方法来满足现阶段有机磷农药残留检测的需求,这对社会的发展、国民的健康具有重要意义。本研究是在生物条形码免疫分析方法的基础上,结合DNA/RNA杂交循环技术和核糖核酸酶H(RNase H)的特异性水解作用,实现对农产品中有机磷农药残留的检测分析研究。由于农药小分子只有一个结合位点,传统的“三明治”夹心免疫法无法实现对小分子的检测,所以实验采用间接竞争的方法实现对农药小分子残留的定性和定量检测,检测过程分为免疫反应阶段和杂交水解反应,将检测到的荧光信号间接转换为农药残留的浓度。研究的主要内容如下:将三唑磷农药单克隆抗体和DNA单链标记在胶体金纳米颗粒表面,制备胶体金纳米探针,并进行表征。首先对免疫反应的实验条件进行探索,对使用的磷酸盐缓冲液工作浓度和pH值、探针和OVA-半抗原的稀释倍数、甲醇的浓度进行优化;然后对杂交水解反应的实...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 农药残留及其危害
        1.1.2 有机磷农药残留检测技术
    1.2 生物条形码免疫分析方法
        1.2.1 生物条形码免疫分析方法原理
        1.2.2 生物条形码免疫分析方法的应用
        1.2.3 胶体金纳米粒子的研究进展
        1.2.4 寡聚核苷酸链的信号放大作用
        1.2.5 基于DNA-RNA杂交的循环放大技术
    1.3 本课题研究目的与研究内容
        1.3.1 本课题研究目的与意义
        1.3.2 本课题研究内容
第二章 基于DNA/RNA杂交的农产品中三唑磷残留生物条形码免疫分析方法研究
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料与仪器
        2.2.2 寡聚核苷酸胶体金探针的制备
        2.2.3 基于DNA/RNA杂交的三唑磷生物条形码免疫分析方法的建立
        2.2.4 样品处理
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 胶体金探针的表征
        2.3.2 免疫分析条件的优化
        2.3.3 杂交反应体系的优化
        2.3.4 标准曲线的建立
        2.3.5 基质效应
        2.3.6 添加回收实验
        2.3.7 实际样品的检测
    2.4 本章小结
第三章 基于DNA/RNA杂交的农产品中有机磷农药多残留生物条形码免疫分析方法研究
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料与仪器
        3.2.2 三种寡聚核苷酸胶体金探针的制备
        3.2.3 基于DNA/RNA杂交的有机磷农药多残留生物条形码免疫分析方法的建立
        3.2.4 添加回收实验
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 荧光标记物之间的交叉反应
        3.3.2 三种有机磷农药抗体的优化
        3.3.3 检测体系的交叉反应
        3.3.4 基于DNA/RNA杂交的农产品中有机磷农药多残留生物条形码免疫分析方法的建立
        3.3.5 添加回收实验
    3.4 本章小结
第四章 全文结论
    4.1 总结
    4.2 研究创新点
    4.3 研究展望
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3820899