氨苄青霉素单链抗体的构建及间接竞争ELISA方法的建立

发布时间：2023-09-13 23:02

　　为了提高畜牧业生产水平,兽药作为畜牧业的基础物质,被大量的使用,同时也对人们的身体造成了巨大的危害。因此兽药残留问题已经成为研究热点。兽药残留检测目前最常用的方法是免疫分析法,对于免疫分析法来说最具关键的就是抗体,抗体的稳定性对最终结果起着关键的作用,本论文利用基因工程技术成功获得了氨苄青霉素的单链抗体,并在此基础上建立了间接竞争ELISA检测方法,为氨苄青霉素残留检测提供一种经济、灵敏、快速的检测方法。从氨苄青霉素抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,利用RT-PCR反转录技术合成第一链cDNA。以针对鼠源重链可变区(V_H)及轻链可变区(V_L)基因的特异性引物,扩增获得V_H基因和V_L基因片段,通过扩增后,得到V_H基因片段大小为340 bp左右,扩增的V_L基因片段大小为320 bp,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)₃将V_H基因和V_L基因拼接成...

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 前言
    1.1 氨苄青霉素简介
    1.2 氨苄青霉素残留现状及危害
    1.3 氨苄青青霉素的检测方法
    1.4 单链抗体的制备及应用
    1.5 酶联免疫吸附法
    1.6 研究目的及意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料
    2.2 方法
第三章 结果与分析
    3.1 单链抗体的制备
    3.2 间接竞争ELISA方法的建立
    3.3 氨苄青霉素间接竞争ELISA检测方法性能指标的评价
第四章 讨论
    4.1 LINKER的选择
    4.2 SCFV的连接
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3846080