麦芽三糖生成酶在毕赤酵母的表面展示及在淀粉制备低聚异麦芽糖中的应用
发布时间：2023-10-18 18:17
随着社会经济的发展,以淀粉为底物制备的功能性糖等新型产品深受消费者喜爱。低聚异麦芽糖(Isomalto-oligosaccharides,IMOs)是一种益生元,甜度低热量低,保湿性强,能被双歧杆菌等有益菌利用,有改善肠道微生物菌群等作用,并且长链IMOs的益生元效果优于短链IMOs。IMOs有诸多优点,可以作为食品添加剂添加到食品、药物及饲料中。α-葡萄糖苷酶是IMOs制备中的关键酶,而黑曲霉来源的α-葡萄糖苷酶对短链底物具有特异性,对作用于麦芽三糖有更高的kcat/Km值。因此本研究选用能特异性产生麦芽三糖的麦芽三糖生成酶,加入到利用淀粉制备IMOs的糖化反应中,为黑曲霉α-葡萄糖苷酶提供更多的麦芽三糖底物。本课题将来源于Thermobifida fusca NTU22的麦芽三糖生成酶编码基因经过毕赤酵母密码子优化及全基因合成后,成功将麦芽三糖生成酶固定在毕赤酵母GS115细胞壁上,构建成重组菌株。测定其具有特异性生成麦芽三糖的能力,分析其酶学性质及重复批次利用性,并以麦芽糊精为底物制备麦芽三糖。同时,将表面展示麦芽三糖生成酶全细胞催化剂...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
1.1 麦芽三糖生成酶
1.1.1 麦芽三糖生成酶结构及作用方式
1.1.2 麦芽三糖生成酶来源及表达
1.1.3 麦芽三糖生成酶的应用
1.2 α-葡萄糖苷酶
1.2.1 α-葡萄糖苷酶的结构及催化机制
1.2.2 α-葡萄糖苷酶的应用
1.2.3 α-葡萄糖苷酶的研究现状
1.3 低聚异麦芽糖
1.3.1 低聚异麦芽糖的特性及功能
1.3.2 低聚异麦芽糖的生产
1.4 毕赤酵母细胞表面展示系统
1.4.1 毕赤酵母表达系统
1.4.2 影响酵母细胞表面展示的因素
1.4.3 毕赤酵母细胞表面展示的应用
1.5 本课题研究意义及主要研究内容
1.5.1 本课题的研究意义
1.5.2 本课题的主要研究内容
第二章 Thermobifida fusca NTU22 麦芽三糖生成酶在毕赤酵母的表面展示
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 菌株和质粒
2.2.2 主要仪器和设备
2.2.3 主要实验试剂
2.2.4 培养基与溶液
2.3 实验方法
2.3.1 菌株的培养方法
2.3.2 菌株的保存方法
2.3.3 重组质粒p PIC9K-tfa-flag-GCW61 的构建
2.3.4 重组毕赤酵母菌株的构建与筛选
2.3.5 重组菌株表面展示麦芽三糖生成酶的甲醇诱导表达
2.3.6 全细胞催化剂的制备
2.3.7 全细胞催化剂的酶活测定和酶学性质分析
2.3.8 表面展示麦芽三糖生成酶多批次重复利用性分析
2.3.9 麦芽三糖生成酶全细胞催化剂制备麦芽三糖
2.3.10 高效液相色谱检测方法
2.3.11 数据统计分析
2.4 结果讨论
2.4.1 表面展示重组质粒p PIC9K-tfa-flag-GCW61 的构建
2.4.2 重组毕赤酵母菌株的构建与筛选
2.4.3 重组毕赤酵母菌株的甲醇诱导表达
2.4.4 全细胞催化剂的活力测定及酶学性质分析
2.4.5 全细胞催化剂Pp-TFA-GCW61 的重复利用性
2.4.6 全细胞催化剂用于制备麦芽三糖分析
2.5 本章小结
第三章 表面展示麦芽三糖生成酶参与催化合成低聚异麦芽糖的研究
3.1 引言
3.2 设备与材料
3.2.1 主要仪器和设备
3.2.2 主要材料
3.2.3 溶液配制
3.3 实验方法
3.3.1 全细胞催化剂Pp-TFA-GCW61及Pp-ANGL-GCW(21+19)的制备
3.3.2 酶活定义
3.3.3 Pp-TFA-GCW61 参与催化合成低聚异麦芽糖
3.3.4 2L反应釜内制备低聚异麦芽糖
3.3.5 高效液相色谱检测方法
3.3.6 数据统计分析
3.4 结果讨论
3.4.1 HPLC-ELSD测定标准品
3.4.2 表面展示麦芽三糖生成酶对低聚异麦芽糖合成的影响
3.4.3 2L反应釜内制备低聚异麦芽糖
3.5 本章小结
结论与展望
结论
本论文创新点
展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3854943
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
1.1 麦芽三糖生成酶
1.1.1 麦芽三糖生成酶结构及作用方式
1.1.2 麦芽三糖生成酶来源及表达
1.1.3 麦芽三糖生成酶的应用
1.2 α-葡萄糖苷酶
1.2.1 α-葡萄糖苷酶的结构及催化机制
1.2.2 α-葡萄糖苷酶的应用
1.2.3 α-葡萄糖苷酶的研究现状
1.3 低聚异麦芽糖
1.3.1 低聚异麦芽糖的特性及功能
1.3.2 低聚异麦芽糖的生产
1.4 毕赤酵母细胞表面展示系统
1.4.1 毕赤酵母表达系统
1.4.2 影响酵母细胞表面展示的因素
1.4.3 毕赤酵母细胞表面展示的应用
1.5 本课题研究意义及主要研究内容
1.5.1 本课题的研究意义
1.5.2 本课题的主要研究内容
第二章 Thermobifida fusca NTU22 麦芽三糖生成酶在毕赤酵母的表面展示
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 菌株和质粒
2.2.2 主要仪器和设备
2.2.3 主要实验试剂
2.2.4 培养基与溶液
2.3 实验方法
2.3.1 菌株的培养方法
2.3.2 菌株的保存方法
2.3.3 重组质粒p PIC9K-tfa-flag-GCW61 的构建
2.3.4 重组毕赤酵母菌株的构建与筛选
2.3.5 重组菌株表面展示麦芽三糖生成酶的甲醇诱导表达
2.3.6 全细胞催化剂的制备
2.3.7 全细胞催化剂的酶活测定和酶学性质分析
2.3.8 表面展示麦芽三糖生成酶多批次重复利用性分析
2.3.9 麦芽三糖生成酶全细胞催化剂制备麦芽三糖
2.3.10 高效液相色谱检测方法
2.3.11 数据统计分析
2.4 结果讨论
2.4.1 表面展示重组质粒p PIC9K-tfa-flag-GCW61 的构建
2.4.2 重组毕赤酵母菌株的构建与筛选
2.4.3 重组毕赤酵母菌株的甲醇诱导表达
2.4.4 全细胞催化剂的活力测定及酶学性质分析
2.4.5 全细胞催化剂Pp-TFA-GCW61 的重复利用性
2.4.6 全细胞催化剂用于制备麦芽三糖分析
2.5 本章小结
第三章 表面展示麦芽三糖生成酶参与催化合成低聚异麦芽糖的研究
3.1 引言
3.2 设备与材料
3.2.1 主要仪器和设备
3.2.2 主要材料
3.2.3 溶液配制
3.3 实验方法
3.3.1 全细胞催化剂Pp-TFA-GCW61及Pp-ANGL-GCW(21+19)的制备
3.3.2 酶活定义
3.3.3 Pp-TFA-GCW61 参与催化合成低聚异麦芽糖
3.3.4 2L反应釜内制备低聚异麦芽糖
3.3.5 高效液相色谱检测方法
3.3.6 数据统计分析
3.4 结果讨论
3.4.1 HPLC-ELSD测定标准品
3.4.2 表面展示麦芽三糖生成酶对低聚异麦芽糖合成的影响
3.4.3 2L反应釜内制备低聚异麦芽糖
3.5 本章小结
结论与展望
结论
本论文创新点
展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3854943
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3854943.html
