二十二碳六烯酸及其氧化产物抑制前列腺癌的机制研究

发布时间：2023-10-27 20:36

　　ω3多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)是一种必需脂肪酸,其与ω6 PUFA的均衡摄入是健康的保证。然而西方化的饮食导致国民ω3 PUFA的膳食摄入相对于ω6 PUFA显著不足。这种失衡与多种疾病的发生高度相关其中包括肿瘤。由于前列腺癌“慢性癌症的特点”,营养支持和膳食干预不论是对于其预防、转归还是预后都有着尤为重要的意义。流行病学和本实验室前期研究均提示:ω3 PUFA能显著抑制前列腺炎症,抑制前列腺肿瘤的生长,减缓前列腺癌发展并提高小鼠成活率,而ω6 PUFA却是相反的效果。并且在ω3 PUFA中,二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)对于人前列腺癌的抑制效应较强。这提示,以DHA为代表的ω3 PUFA在前列腺癌的预防和治疗领域有重要应用价值。尽管已经有一些研究报道了DHA抗炎和抗肿瘤的作用,但是相关机制研究的还很不足,本课题通过体内外研究发现,DHA对于前列腺癌的抑制作用依赖于其氧化代谢过程,并至少通过两个机制:1)DHA经脂氧化酶(Lipoxygenase,LOX)氧化产生的D型消退素(Resolvin ...

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略符号对照表
第一章 绪论
    1.1 多不饱和脂肪酸的氧化
        1.1.1 PUFA与类二十/二十二烷酸代谢
        1.1.2 PUFA与脂质过氧化
    1.2 类二十/二十二烷酸与巨噬细胞炎症
    1.3 铁死亡
        1.3.1 脂质过氧化与铁死亡
        1.3.2 铁死亡相关信号通路
    1.4 立题意义与研究内容
        1.4.1 立题意义
        1.4.2 主要研究内容
第二章 膳食ω3多不饱和脂肪酸对小鼠前列腺癌的作用
    2.1 前言
    2.2 实验材料与设备
        2.2.1 试剂
        2.2.2 细胞系与动物
        2.2.3 主要仪器和设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 小鼠组织石蜡切片的制作
        2.3.2 Western Blot
        2.3.3 数据统计与分析
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 膳食ω3PUFA对小鼠前列腺癌的作用
        2.4.2 膳食ω3 PUFA前列腺癌组织中的M2 巨噬细胞浸润的作用
    2.5 本章小结
第三章 D型消退素对巨噬细胞极化的作用
    3.1 前言
    3.2 实验材料与设备
        3.2.1 试剂
        3.2.2 细胞系与动物
        3.2.3 细胞培养用液
        3.2.4 主要仪器和设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 液质联用分析
        3.3.2 巨噬细胞极化
        3.3.3 MTT细胞计数实验
        3.3.4 流式细胞术
        3.3.5 RNA提取与q PCR
        3.3.6 数据统计与分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 组织中存在Rv D及 Rv D所需的代谢酶类
        3.4.2 DHA和 Rv D借助巨噬细胞抑制前列腺癌细胞增殖
        3.4.3 RvD作用于肿瘤相关巨噬细胞抑制前列腺癌细胞增殖
        3.4.4 Rv D对 TAM极化的作用
        3.4.5 RvD对M2a极化的作用
        3.4.6 RvD对M1极化的作用
    3.5 本章小结
第四章 Rv D对巨噬细胞PKA通路的调节作用
    4.1 前言
    4.2 实验材料与设备
        4.2.1 试剂
        4.2.2 主要仪器和设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 RNA提取与q PCR
        4.3.2 数据统计与分析
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 RvD受体在不同极化状态的巨噬细胞的表达
        4.4.2 不同极化状态的巨噬细胞中Rv D对 PKA通路的调控
        4.4.3 PKA通路对巨噬细胞极化的作用
    4.5 本章小结
第五章 二十二碳六烯酸对细胞铁死亡的作用
    5.1 前言
    5.2 实验材料与设备
        5.2.1 试剂
        5.2.2 细胞系与动物
        5.2.3 培养基
        5.2.4 主要仪器和设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 液质联用分析
        5.3.2 气质联用分析
        5.3.3 小干扰RNA的转染
        5.3.4 流式细胞术检测胞内ROS与 LPO
        5.3.5 流式细胞术检测凋亡指标
        5.3.6 经典生化反应
        5.3.7 裸鼠成瘤实验
        5.3.8 免疫荧光
        5.3.9 数据统计与分析
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 人体组织与培养的细胞中脂肪酸的含量
        5.4.2 不同的脂肪酸对铁死亡诱导剂介导的细胞死亡的作用
        5.4.3 不同饱和度脂肪酸对FIN相关细胞死亡的调控
        5.4.4 DHA对 FIN介导的细胞死亡对非肿瘤细胞的效应
        5.4.5 DHA与 FIN介导的细胞死亡方式
        5.4.6 DHA对铁死亡特异性的ROS积累的作用
        5.4.7 铁死亡过程中胞内多层次的氧化作用
        5.4.8 DHA对体内铁死亡依赖的肿瘤治疗作用
    5.5 本章小结
第六章 DHA在胞内发生脂质过氧化的机制
    6.1 前言
    6.2 实验材料与设备
        6.2.1 试剂
        6.2.2 主要仪器和设备
    6.3 实验方法
        6.3.1 薄层层析
        6.3.2 ALOX5代谢产物检测与脂质组学
        6.3.3 RT-PCR方法检测ACSL与 LPCAT的表达
        6.3.4 质粒的转染
        6.3.5 数据统计与分析
    6.4 结果与讨论
        6.4.1 DHA的添加对细胞脂质组成的影响
        6.4.2 DHA的作用不依赖于其受体GPR120
        6.4.3 游离DHA对铁死亡的作用
        6.4.4 铁死亡的ROS与 LPO的积累
        6.4.5 COX与 LOX途径在DHA参与的铁死亡中的作用
    6.5 本章小结
第七章 RIPK1对DHA参与的铁死亡的作用
    7.1 前言
    7.2 实验材料与设备
        7.2.1 试剂
    7.3 实验方法
        7.3.1 质粒的转染
        7.3.2 免疫共沉淀
        7.3.3 数据统计与分析
    7.4 结果与讨论
        7.4.1 DHA介导的铁死亡特征
        7.4.2 RIPK1抑制剂对铁死亡的作用
        7.4.3 铁死亡中RIPK1的磷酸化
        7.4.4 RIPK1各个位点的功能
        7.4.5 RIPK1的激酶活性对铁死亡的作用
        7.4.6 RIPK1没有形成经典的坏死复合体
        7.4.7 SQSTM1/p62与RIPK1 的结合
    7.5 本章小结
第八章 RIPK1-SQSTM1/p62-GSDMD对 DHA参与的铁死亡的作用
    8.1 前言
    8.2 实验材料与设备
        8.2.1 试剂
        8.2.2 主要仪器和设备
    8.3 实验方法
        8.3.1 蛋白质谱鉴定
        8.3.2 数据统计与分析
    8.4 结果与讨论
        8.4.1 DHA参与的铁死亡中SQSTM1/p62 的磷酸化
        8.4.2 DHA参与的铁死亡中SQSTM1/p62 的胞内聚集
        8.4.3 SQSTM1/p62对DHA参与的铁死亡的作用
        8.4.4 RIPK1对SQSTM1/p62 的磷酸化的调控
        8.4.5 自噬在铁死亡中的作用
        8.4.6 GSDMD与 RIPK1和SQSTM1/p62 的相互作用
        8.4.7 GSDMD对铁死亡的作用
        8.4.8 RIPK1与SQSTM1/p62对GSDMD活化的调控
        8.4.9 CASP5在铁死亡中的作用
        8.4.10 RIPK1对CASP5 活化的调控
    8.5 本章小结
主要结论与展望
    主要结论
    展望
论文创新点
致谢
参考文献
附录Ⅰ:作者在攻读博士学位期间发表的论文
附录Ⅱ:Co-IP方法鉴定的与SQSTM1/p62或RIPK1 结合的蛋白质



本文编号：3857230