铁离子对β-乳球蛋白糖基化的影响研究
发布时间：2023-10-30 18:35
本文主要研究不同浓度铁离子对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg)糖基化及致敏性的影响。采用多光谱技术分析铁离子介导的糖基化β-Lg结构和理化性质变化,间接竞争酶联免疫(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)以及液相质谱联用技术分析β-Lg的致敏性和糖基化修饰特性。补充完善了铁离子对β-Lg糖基化反应体系和致敏性的影响,为加铁乳粉工业中应用糖基化技术提供理论指导。铁离子影响的糖基化β-Lg的特性研究结果如下:(1)根据聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide Gelelectrophoresis,SDS-PAGE)和飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization Time of Flight,MALDI-TOF)实验结果,显示蛋白质的分子量没有发生明显的改变,有少部分的蛋白质分子发生聚集,这和蛋白质的交联和美拉德反应有关。(2)根据光谱学分析显示铁离子对β-Lg的结构有显著性的影响,β-Lg二级结构和三级结构都有不同程度的展开。二级卷曲结构变的紧密,并且趋向无规则化...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
符号说明
第1章 引言
1.1 概述
1.2 课题来源
1.3 国内外研究现状
1.3.1 β-Lg简介及研究现状
1.3.1.1 β-Lg简介
1.3.1.2 β-Lg过敏研究现状
1.3.1.3 β-Lg的功能特性研究现状
1.3.2 糖基化反应及其对蛋白质的影响
1.3.3 铁离子催化系统及其研究进展
1.3.4 生物质谱技术在蛋白质糖基化中的研究进展
1.4 研究课题意义
1.5 研究的主要内容
1.6 课题的创新之处
第2章 铁离子促进糖基化对β-Lg结构的影响研究
2.1 概述
2.2 实验材料与试剂
2.3 实验仪器与设备
2.4 试验方法
2.4.1 β-Lg处理及蛋白糖基化模型的建立
2.4.2 色度的测定
2.4.3 SDS-PAGE电泳
2.4.4 MALDI-TOF检测蛋白质分子量
2.4.5 内源荧光的测定
2.4.6 紫外光谱的测定
2.4.7 圆二色光谱(CD)的测定
2.4.8 核磁共振氢谱(1H NMR)测定
2.4.9 红外光谱测定
2.5 结果与讨论
2.5.1 样品的反应程度及色度测定
2.5.1.1 样品反应程度分析
2.5.1.2 样品的色度分析
2.5.2 SDS-PAGE电泳分析
2.5.3 MALDI-TOF分析分子量
2.5.5 内源荧光数据分析
2.5.6 紫外吸收程度分析
2.5.7 CD光谱分析
2.5.8 核磁共振氢谱(1H NMR)分析结果
2.5.9 红外光谱分析
2.6 本章小结
第3章 铁离子对β-Lg糖基化产物的影响
3.1 概述
3.2 实验材料与试剂
3.3 实验仪器和设备
3.4 实验方法
3.4.1 铁离子对β-Lg氨基酸分子的影响
3.4.1.1 自由氨基的测定
3.4.1.2 羰基含量的测定
3.4.1.3 巯基含量的测定
3.4.1.4 氨基酸组成分析
3.4.2 铁离子对β-Lg抗氧化性影响
3.4.2.1 还原力的测定
3.4.2.2 DPPH·自由基清除能力
3.4.2.3 亚铁离子螯合能力
3.4.3 糖基化产物的测定
3.5 结果与讨论
3.5.1 铁离子对β-Lg氨基酸的影响
3.5.1.1 自由氨基含量的分析
3.5.1.2 羰基含量的分析
3.5.1.3 巯基含量的分析
3.5.1.4 氨基酸组成分析
3.5.2 铁离子对糖基化β-Lg抗氧化性的影响
3.5.2.1 还原力
3.5.2.2 DPPH·自由基清除能力
3.5.2.3 亚铁离子螯合能力
3.5.3 铁离子对β-Lg糖基化产物的影响
3.5.3.1 羧甲基赖氨酸(CML)含量分析
3.5.3.2 类黑精含量分析
3.5.3.3 丙烯酰胺含量分析
3.5.3.4 羟甲基糠醛(HMF)含量分析
3.6 本章小结
第4章 铁离子对β-Lg糖基化位点及其致敏性的影响
4.1 概述
4.2 实验材料与试剂
4.3 实验仪器与设备
4.4 实验方法
4.4.1 铁离子对糖基化β-Lg的致敏性影响
4.4.1.1 抗原性的测定
4.4.1.2 过敏原性的测定
4.4.2 铁离子对β-Lg糖基化位点的影响
4.4.2.1 样品的酶解
4.4.2.2 质谱分析
4.5 结果与讨论
4.5.1 铁离子对糖基化β-Lg致敏性的影响
4.5.1.1 最适抗原包被、抗血清和酶标二抗浓度的确定
4.5.1.2 抗原性的分析
4.5.1.3 过敏原性的分析
4.5.2 β-Lg糖基化位点和糖基化程度分析
4.5.2.1 糖基化位点的鉴定
4.5.2.2 糖基化程度分析
4.5.3 铁离子促进糖基化修饰降低β-Lg致敏性机理分析
4.6 本章小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间成果
本文编号：3858978
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
符号说明
第1章 引言
1.1 概述
1.2 课题来源
1.3 国内外研究现状
1.3.1 β-Lg简介及研究现状
1.3.1.1 β-Lg简介
1.3.1.2 β-Lg过敏研究现状
1.3.1.3 β-Lg的功能特性研究现状
1.3.2 糖基化反应及其对蛋白质的影响
1.3.3 铁离子催化系统及其研究进展
1.3.4 生物质谱技术在蛋白质糖基化中的研究进展
1.4 研究课题意义
1.5 研究的主要内容
1.6 课题的创新之处
第2章 铁离子促进糖基化对β-Lg结构的影响研究
2.1 概述
2.2 实验材料与试剂
2.3 实验仪器与设备
2.4 试验方法
2.4.1 β-Lg处理及蛋白糖基化模型的建立
2.4.2 色度的测定
2.4.3 SDS-PAGE电泳
2.4.4 MALDI-TOF检测蛋白质分子量
2.4.5 内源荧光的测定
2.4.6 紫外光谱的测定
2.4.7 圆二色光谱(CD)的测定
2.4.8 核磁共振氢谱(1H NMR)测定
2.4.9 红外光谱测定
2.5 结果与讨论
2.5.1 样品的反应程度及色度测定
2.5.1.1 样品反应程度分析
2.5.1.2 样品的色度分析
2.5.2 SDS-PAGE电泳分析
2.5.3 MALDI-TOF分析分子量
2.5.5 内源荧光数据分析
2.5.6 紫外吸收程度分析
2.5.7 CD光谱分析
2.5.8 核磁共振氢谱(1H NMR)分析结果
2.5.9 红外光谱分析
2.6 本章小结
第3章 铁离子对β-Lg糖基化产物的影响
3.1 概述
3.2 实验材料与试剂
3.3 实验仪器和设备
3.4 实验方法
3.4.1 铁离子对β-Lg氨基酸分子的影响
3.4.1.1 自由氨基的测定
3.4.1.2 羰基含量的测定
3.4.1.3 巯基含量的测定
3.4.1.4 氨基酸组成分析
3.4.2 铁离子对β-Lg抗氧化性影响
3.4.2.1 还原力的测定
3.4.2.2 DPPH·自由基清除能力
3.4.2.3 亚铁离子螯合能力
3.4.3 糖基化产物的测定
3.5 结果与讨论
3.5.1 铁离子对β-Lg氨基酸的影响
3.5.1.1 自由氨基含量的分析
3.5.1.2 羰基含量的分析
3.5.1.3 巯基含量的分析
3.5.1.4 氨基酸组成分析
3.5.2 铁离子对糖基化β-Lg抗氧化性的影响
3.5.2.1 还原力
3.5.2.2 DPPH·自由基清除能力
3.5.2.3 亚铁离子螯合能力
3.5.3 铁离子对β-Lg糖基化产物的影响
3.5.3.1 羧甲基赖氨酸(CML)含量分析
3.5.3.2 类黑精含量分析
3.5.3.3 丙烯酰胺含量分析
3.5.3.4 羟甲基糠醛(HMF)含量分析
3.6 本章小结
第4章 铁离子对β-Lg糖基化位点及其致敏性的影响
4.1 概述
4.2 实验材料与试剂
4.3 实验仪器与设备
4.4 实验方法
4.4.1 铁离子对糖基化β-Lg的致敏性影响
4.4.1.1 抗原性的测定
4.4.1.2 过敏原性的测定
4.4.2 铁离子对β-Lg糖基化位点的影响
4.4.2.1 样品的酶解
4.4.2.2 质谱分析
4.5 结果与讨论
4.5.1 铁离子对糖基化β-Lg致敏性的影响
4.5.1.1 最适抗原包被、抗血清和酶标二抗浓度的确定
4.5.1.2 抗原性的分析
4.5.1.3 过敏原性的分析
4.5.2 β-Lg糖基化位点和糖基化程度分析
4.5.2.1 糖基化位点的鉴定
4.5.2.2 糖基化程度分析
4.5.3 铁离子促进糖基化修饰降低β-Lg致敏性机理分析
4.6 本章小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间成果
本文编号：3858978
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3858978.html
