FEN1重要酰基化修饰位点参与DNA损伤修复机制的研究

发布时间：2021-07-11 22:25

　　瓣状核酸内切酶（Flap Endonuclease 1,FEN1）是核酸酶Rad2超家族的一员,从古细菌到人类中均保守存在,能够广泛参与到DNA代谢途径中。FEN1在DNA复制、重组和修复过程中的重要作用决定了其在维持基因组稳定性中的关键地位,其表达或功能异常会导致生物体内的多个生命过程发生紊乱,对机体产生严重的危害。因此,FEN1在生物体内的表达和功能执行必须受到严格、精确、及时地调控。前期研究显示,翻译后修饰对FEN1蛋白的活性、亚细胞定位及功能稳定性起到重要的调控作用。其中,FEN1的酰基化（乙酰化和琥珀酰化）修饰可能在细胞代谢和DNA损伤修复过程中发挥作用,但其具体的作用机制和生物学效应目前尚不明确。鉴于此,本文主要对FEN1的酰基化修饰在维持细胞基因组稳定性中的功能及作用机制进行了研究。我们通过构建点突变细胞株,鉴定和验证了 FEN1的两个酰基化修饰位点（Lys200和Lys201）。体外酶动力学活性实验显示,与FEN1-WT蛋白相比,其点突变蛋白（K200E和K201E）的EXO活性和GEN活性分别下降了约40%和67%,表明该酰基化修饰可能参与DNA损伤应答和DNA修复过... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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ｄａｍａｇｅ?ｆｏｃｉ?，??图１．２ＦＥＮ１的动态亚细胞定位ｎｌ??Ｆｉｇｕｒｅ?ｌ?．２?Ｄｙｎａｍｉｃ?ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＦＥＮ?ｌ??ＦＥＮｌ蛋白存在于细胞核和线粒体，可定位于哺乳动物细胞中的四个不同的亚细胞区室：??细胞质，线粒体，核质和核仁。为响应细胞周期转换和ＤＮＡ损伤，ＦＥＮ１通过四种不同的??途径动态迁移：Ｉ代表来自细胞质的核转位；２代表来自核质的核仁积累；３代表从核质和??核仁形成复制／ＤＮＡ损伤的聚集；４代表从细胞质进入到线粒体。ＦＥＮ１的核酸酶结构表示??为蓝色圆形，Ｃ－末端表示为Ｚ字形尾部。??１．３．２蛋白质的相互作用??目前已鉴定出来自各种ＤＮＡ代谢途径的超过３４种蛋白质会与ＦＥＮ１蛋白相??互作用，但ＦＥＮ?１蛋白的分子量很小，一次最多只能和２－３个蛋白质发生互作［６７］，??表明ＦＥＮ１顺序性地参与各种代谢途径。根据ＦＥＮ１的活性和功能，可以将这些??蛋白分为以下四大类（图１．３）：??第一类：主要是在ＤＮＡ复制过程中发挥作用，以帮助ＦＥＮ１完成冈崎片段??成熟中ＲＮＡ引物的切除。在真核细胞中，首先由引物酶和ＤＮＡ聚合酶ｕ起始，??合成ＲＮＡ／ＤＮＡ引物。随后

２．３．１?ＦＥＮ１的Ｌｙｓ２００＇?Ｌｙｓ２０１位点在进化上高度保守??在ＮＣＢ１数据库检索ＦＥＮ１及其同源蛋白的序列，使用ＣｌｕｓｔｅｒＷ软件比对，??发现ＦＥＮ１的Ｌｙｓ２００、Ｌｙｓ２０１位点在不同种属生物中都是高度保守的（

【参考文献】：
期刊论文
[1]Construction of Yeast Vectors with Resistance to Geneticin[J]. 林会兰,张广,周全,陈国强.  Tsinghua Science and Technology. 2002(04)



本文编号：3278696