Lux基因重组铜绿假单胞菌的发光特性、抑菌评估和生物膜形成机理探究

发布时间：2024-12-11 02:15

　　发光细菌能够通过自身携带的lux CDABE基因簇编码合成荧光素酶及其相应的发光底物而产生独特的光信号。Lux CDABE基因由于其自发荧光背景低、非破坏、易于检测等优点,已被作为报告基因用于食品和环境中各种微生物的模型研究中。铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种条件致病菌,因其具有极强的环境适应性,较快的分裂速度,对生长环境（营养、湿度等）的要求较低,在环境中广泛分布,会导致食品腐败或引起人体中毒等安全问题。本研究利用来源于发光光杆状菌（Photobacterium luminescens）的lux CDABE基因簇,构建了重组发光铜绿假单胞菌,之后对其发光特性、抑菌评估和生物膜形成机理的探究展开研究,具体研究结果如下:（1）本研究基于发光光杆状菌的lux CDABE基因,构建了两株可成功表达生物发光的重组发光铜绿假单胞菌:PAO1-CE和PA27853-CE。这两种重组发光铜绿假单胞菌发光的最适温度为37℃,p H为7.0,Na Cl浓度为1.0 mg/m L。两种重组发光铜绿假单胞菌的发光表达量传代稳定,且室温条件下发光稳定。PAO1-CE的发光表达量...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-1已知生物发光系统的荧光素酶结构

相关研究已经发现并揭示了许多生物发光现象的谜底,同时也证明了从细菌到真菌和动物,在不同的基因型空间结构上,活的有机体都可以获得发光的能力。各种荧光素(即氧化后易于发光的小分子,有时也被统称为发光底物)是通过不同的生化途径产生的。目前报道较多的为伴随着ATP、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(....

图4-3不同浓度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)对PAO1-CE的发光抑制率的影响(EC50:浓度达到最大效果的50%;Regression:拟合曲线)

六种抗生素Str/Car/Amp/Ter/Tmp/Cip作用24h内PAO1-CE的发光曲线见附录B。通过对比后发现,作用时间为2h时,随着Str/Car/Amp/Ter/Tmp/Cip作用浓度的升高,PAO1-CE的IR%也随之升高。图4-3以抗生素作用浓度为横坐标,PAO....

图4-4不同浓度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)对PAO1-CE生长曲线的影响

图4-4中展示了P.aeruginosa在含有不同浓度的Str/Car/Amp/Ter/Tmp/Cip的LB培养基中的生长情况,利用修正的Gompertz方程拟合各水平的生长曲线并表征生长参数(表4-5),得出每个拟合方程的R2均大于0.98,表明该生长曲线模型可以准确描述PAO....

图4-4不同浓度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)对PAO1-CE生长曲线的影响

图4-4不同浓度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)对PAO1-CE生长曲线的影响4.2.5胞内ATP测定验证PAO1-CE对六种抗生素的敏感性

本文编号：4016020