花生NBS-LRR类基因P9的克隆与序列分析

发布时间：2024-12-18 05:38

　　 为探索花生NBS-LRR类基因在花生抗病中的分子作用机制,本研究以花生品种‘Z525’为试验材料,采用电子克隆与RT-PCR相结合的方法,克隆了花生叶片中的P9基因。结果表明,获得一个长度为3557 bp的序列,该序列包含一个完整的开放阅读框(ORF),ORF的长度为3 195 bp (93 bp～3 287 bp),编码1 064个氨基酸(120.4 kD),等电点pI为5.92。序列分析表明,该基因编码的蛋白与花生中假定的抗性蛋白RPP13-like及花生二倍体野生种Arachis duranensis和Arachis ipaensis推测的抗病蛋白At3g14460、RPP13-like高度相似;P9蛋白属于NBS-LRR家族,具有典型的NB-ARC和LRR-3两个保守结构域,推测该基因参与花生抗病调控过程。蛋白质亚细胞定位预测表明该基因编码的蛋白主要位于叶绿体中,可能少量分布于细胞核中,推测该基因可能主要作为叶绿体蛋白参与细胞的抗氧化、抗衰老等抗逆过程,其次作为转录因子参与转录调控作用。本研究克隆了P9基因的全长cDNA序列,并对该基因序列、结构和功能等方面进行了分析,为进一步...

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【部分图文】：

图1 引物对P9-F/P9-R扩增c DNA的电泳

利用NCBI上的Conserveddomainsearch工具分析编码1064个氨基酸残基的蛋白，结果表明该蛋白属于NBS-LRR家族，具有典型的NB-ARC和LRR-3两个保守功能区域，同时具有9个亮氨酸富集重复(leucine-richrepeat,LRR)结构域(图....

图3 P9蛋白亲疏水性分析

SignalP4.1服务器预测该蛋白的信号肽剪切位点结果表明(图4),P9蛋白第34位的赖氨酸残基具有最高的剪切点分值0.233，位于第4位的丙氨酸残基具有最大的信号肽分值0.408，第21位的精氨酸残基具有最高的结合剪切位点分值0.229。由于信号肽的平均值为0.269(小于....

图4 P9信号肽预测

图3P9蛋白亲疏水性分析蛋白质亚细胞定位预测表明，该蛋白被定位于叶绿体、细胞核和过氧化物酶体的概率分别为78.3%、17.4%和4.3%，说明该蛋白主要被定位于叶绿体中，细胞核中可能也有少量的分布。

图2 P9蛋白保守结构域的预测

GOR在线软件预测P9蛋白的二级结构，结果表明该P9蛋白主要由无规则卷曲(c)、α螺旋(h)和β折叠(e)构成，其中无规则卷曲比例最高为46.15%，其次是α螺旋(38.53)和β折叠(15.32%)(图5)。使用ProtFun2.2软件分析该蛋白的功能结合亚细胞定位分析，结果....

本文编号：4017009