NO在挤压大鼠双后肢致急性局部肌组织和远隔器官（肝脏、肺脏）损伤中的作用

发布时间：2018-03-13 16:32

  本文选题：挤压伤　切入点：一氧化氮　出处：《河北医科大学》2003年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：广泛软组织损伤为法医学实践所常见，且以臀部及双下肢损伤为主，其损伤特点是局部损伤貌似轻微，全身性继发性病理变化隐匿，后果严重，常导致远隔器官包括肾脏、心脏、肺脏、肝脏等的严重损伤，直至发生创伤性多器官功能不全综合症（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）。其发生机制至今尚不完全清楚。本研究室已经成功的复制出挤压复合内毒素造成动物MODS的动物模型，，发现双后肢挤压伤导致远隔器官如肝脏、肾脏、肺脏等功能障碍，并伴随抗氧化能力下降，多种炎症介质和细胞因子（如TNF-α、IL-1）是促成这种器官损伤的物质基础。一氧化氮（nitric oxide，NO）系一种新颖的气体信使分子，具有多向性调节作用，同时又是一种自由基，化学性质十分活泼。一氧化氮由一组一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）催化L-精氨酸氧化生成，NOS主要有诱导型（iNOS）和固有型（cNOS）两类。严重创伤应激、细胞因子可诱导iNOS表达或调节 cNOS活性，改变NO的生成与功能。NO在机体病理过程中的作用十分复杂，可由于作用时间、器官、剂量等差异而具有保护和／或损伤的作用，因而有双刃剑之称。严重双后肢挤压伤致局部及远隔器官NO和NOS的变化规律及其意义尚不清楚。本实验通过挤压双后肢致远隔器官损伤模型， WP=5 尝试探讨NO在局部肌肉组织和远隔器官（肺脏、肝脏）损伤中的作用。 方法：健康Wistar大鼠55只，体重160±20g，雌雄不拘，实验前12 h禁食，自由饮水。大鼠俯卧位固定于木板上，于双后肢上压15kg的标准重物，连续挤压5 h后释放动物，任其自由活动，观察5h后大鼠在全麻下行腹部切开术，从腹主动脉采血液。经腹主动脉快速放血处死，收集检材待检。大鼠随机分成4组（1）对照组（S组），（2）挤压组(C组)，（3）挤压加氨基胍组(A组)，（4）挤压加L-精氨酸组（L组）。S组除不挤压外，其余处理同挤压模型。C组处理同挤压模型。A组在挤压5h松开时舌下静脉注入氨基胍（AG）10 mg/kg bw。L组在挤压5h松开时舌下静脉注入L-精氨酸 (L-Arg) 150 mg/kg bw。实验首先探讨局部NO在严重挤压大鼠双后肢致局部肌组织继发性损伤中的作用，并检测血浆中NO含量和NOS活性。从腹主动脉采集血液约2ml，离心后吸取上层血清；大鼠放血处死后，留取局部肌肉组织约200mg，制备10%肌组织匀浆。用生化方法检测血清和肌组织NO含量和NOS活性；留取局部肌肉组织适量制做病理切片、观察形态学变化及进行iNOS、eNOS免疫组化检测；另留局部肌肉组织测湿干重比值。其次探讨严重挤压双后肢致远隔器官（肺脏和肝脏）损伤和与NO变化的关系。从腹主动脉采集血液约4 ml做血气分析和肝功能检测；留取肺脏、肝脏检材各3份，分别作病理切片、观察形态学变化和iNOS、eNOS免疫组化、检测NO含量、NOS活性和组织的湿干重比值。 结果： WP=6 1 挤压双后肢致局部肌肉组织损伤及NO、NOS变化 1.1 局部肌组织损伤 肌肉湿干重比值（W/D）变化 S组W/D为3.90±0.16，C组W/D为4.74±0.22，明显高于S组(P0.01)。A组、L组W/D分别为4.5±0.25、5.3±0.38。与C组比较A组W/D降低（P0.05），L组W/D明显升高（P0.01）；与 A组比较，L组W/D明显升高（P0.01）。 肌组织的病理变化 S组 肌纤维结构清楚，未见出血、坏死等改变。C 组 肌纤维肿胀，横纹不清，可见肌纤维溶解，间质水肿，可见小动脉充血和小静脉淤血及肌纤维间出血。A 组 肌纤维肿胀似有减轻，可见断裂及肌纤维溶解，间质水肿减轻，小动脉充血和小静脉淤血较C组减轻。L组 肌纤维肿胀加重，可见断裂，肌浆横纹不清，可见肌溶解，嗜伊红染色不均， 内可见空泡，肌浆凝聚与溶解相间，间质水肿较C组加重，小动脉充血和小静脉淤血及肌纤维间出血较C组加重。 1.2 局部肌肉组织NO含量、NOS活性变化 局部肌肉组织NO含量：S组NO含量为37.24±3.35μmol/g prot，C组NO含量为55.49±6.35μmol/g prot，明显高于S组(P0.01)。A组、L组NO含量分别为39.49±6.18μmol/g prot、71.34±6.29μmol/g prot。与C组相比较A组NO含量降低（P0.01），L组NO含量升高(P0.01)。 局部肌肉组织NOS活性: S组NOS值为10.97± 0.53U/mg prot，C组NOS值为16.41±0.85U/mg prot，明显高于S组（P0.01）A组、L组NOS值为分别为13.39 WP=7 ±0.64U/mg prot、15.12±0.73U/mg prot。与C组相比较，A组NOS值降低（P0.01）、L组NOS值无明显变化（P0.05）。 1.3 局部肌肉W/T与肌肉NO含量变化的相关分析 各组肌组织NO值与W/T值均呈明显正相关。S组相关系数为0.926（P0.05）；C组相关系数为0.992（P0.01）；A组相关系数为0.925（P0.05）；L组相关系数为0.892（P0.01）。 1.4 局部肌肉组织eNOS和iNOS蛋白表达免疫组化检测 局部肌肉组织eNOS蛋白表达免疫组化检测：S组肌肉组织可见血管内皮细胞和骨骼肌纤维有黄棕色的eNOS信号其中内皮细胞eNOS信号较强；C组血管内皮细胞和骨骼肌纤维中黄棕色的eNOS信号明显增强，以内皮细胞增强为明显；A组、L组血管内皮细胞和骨骼肌纤维中黄棕色的eNOS阳性信号与C组比较无明显差异。 局部肌肉组织iNOS蛋白表达免疫组化检测：S组骨骼肌纤维?
[Abstract]:Purpose: extensive soft tissue injury is common in forensic practice, and to the hips and lower limbs injury, the injury is characterized by local damage seem slight, systemic secondary pathological changes of occult, serious consequences, often by different organs including the kidney, heart, lung, liver and other serious damage, until the occurrence of traumatic multiple organ dysfunction syndrome (MODS multiple organ dysfunction syndrome). Its pathogenesis is still unclear. This study has successfully replicate the animal model of extrusion composite endotoxin caused by animal MODS, found that the hind limbs crush injury in distant organs such as liver, kidney, lung dysfunction, accompanied by decreased antioxidant capacity and a variety of inflammatory mediators and cytokines (such as TNF- alpha, IL-1) is to facilitate the material basis of organ damage. Nitric oxide (nitric oxide NO) is a novel gas messenger Molecules that play a role in the regulation of diversity, and is a kind of free radicals, and chemical properties are very lively. By a group of nitric oxide nitric oxide synthase (nitric oxide synthase, NOS L-) to generate catalytic oxidation of arginine, NOS mainly induced by type (iNOS) and intrinsic (cNOS) two. Severe trauma. Cytokines can induce iNOS expression or regulate the activity of cNOS,.NO and NO change generation function in the body role in the pathological process is very complex, but because of the effects of time, organ dose differences such as protective and / or injury, so it is a double edged sword. Serious changes and significance of double hind limb crush injury local and remote organs induced by NO and NOS is not clear. In this experiment, by squeezing the hind limbs caused by remote organ injury model,
WP=5
To explore the role of NO in the injury of local muscle tissue and distant organs (lung, liver).
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本文编号：1607220