氯丙嗪的法医毒物动力学研究
发布时间：2018-05-13 06:45
本文选题：氯丙嗪 + 气相色谱 ； 参考：《山西医科大学》2011年硕士论文
【摘要】：目的 1．建立生物检材中氯丙嗪的气相色谱和气相色谱/质谱检测方法； 2．建立氯丙嗪的死后分布、死后再分布、死后弥散、分解动力学动物模型； 3．研究氯丙嗪在动物体内的死后分布、死后再分布、死后弥散和分解动力学分布规律，为氯丙嗪中毒（死）案件的法医学鉴定提供实验依据。 方法 1.死后分布研究 1.1氯丙嗪在大鼠体内的死后分布研究：雄性SD大鼠6只，体重200g±10g经灌胃匀速注入6LD_(50)（1350 mg/kg）氯丙嗪。观察给药到死亡时的生命体征的变化以及中毒症状，待呼吸和心跳全部消失时，迅速解剖动物，取大脑、心、肝、脾、肺、肾、心血等冷冻保存，碱性乙醚提取，气相色谱质谱法定性、气相色谱法定量检测氯丙嗪。 1.2氯丙嗪在家兔体内的死后分布研究：家兔6只，实验前隔夜禁食。经灌胃匀速注入8LD_(50)（5990.4 mg/kg）氯丙嗪。待呼吸和心跳全部消失时，迅速解剖动物，取大脑、心、肝、脾、肺、肾、心血等冷冻保存，碱性乙醚提取，气相色谱质谱法定性、气相色谱法定量检测氯丙嗪。 2.死后再分布研究：雄性犬6只，固定于犬台上，插胃管，2min内注入1/2LD_(50)剂量（201.6mg/kg，按体表面积折算）氯丙嗪。2h后缺氧处死，仰卧位置于室温下（20℃），分别在死后0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h取捡材，-20℃冰箱保存待检。解冻，液-液萃取血液和各组织脏器，气相色谱质谱法定性、气相色谱法定量检测氯丙嗪。 3.死后弥散研究：家兔15只，随机分为5组。实验前隔夜禁食，将其仰卧位固定于兔台，插胃管，然后处死；处死1h后，经灌胃匀速注入LD_(50)（748.8mg/kg）氯丙嗪，分别于3h、1d、2d、4d和6d各解剖一组（3只）家兔，取大脑、心、肝、脾、肺、肾、左右后肢肌、心血、周围血、胆汁、尿液、玻璃体液，-20℃冰箱保存待检。解冻，液-液萃取血液和各组织脏器，气相色谱质谱法定性、气相色谱法定量检测氯丙嗪。 4.分解动力学研究：雄性犬6只，固定于犬台上，插胃管，2min内注入LD_(50)剂量（403.2mg/kg）氯丙嗪，给药体积为20mL。灌胃后2h，经股动脉插管采血，肝素抗凝；缺氧处死，取心血和肝脏。每只犬血分四等份分别置于20℃、4℃、-20℃、20℃（加NaF至1%），每只犬肝分四等份分别置于20℃、4℃、-20℃、20℃（4%甲醛），于第0d、7d、54d、90d、150d、280d、320d气相色谱质谱法定性、气相色谱法定量检测其中氯丙嗪。采用WinNonlin药代动力学软件处理平均药物浓度，拟合分解动力学方程，计算分解半衰期。 5.统计学方法：采用SPSS11.5统计软件处理数据，，结果以均数±标准差（(x|-)±S）表示，t检验。 结果 1.气相色谱和气相色谱/质谱检测：GC/MS分析氯丙嗪的特征离子m/z为86、233、272、318。心血中氯丙嗪气相色谱检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、最低检出浓度分别为Y=4.2403X＋0.2044 (μg/mL)、0.1～10μg/mL、0.9927、99.03±5.20％、0.1μg/mL。肝脏中氯丙嗪气相色谱检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、最低检出浓度分别为Y=10.38X＋0.2784 (μg/mL)、0.1～10μg/mL、0.9815、98.26±2.50％、0.1μg/mL。 2.死后分布：6LD_(50)剂量灌胃大鼠10～11h死亡，体内氯丙嗪含量由高到低分别为：胃（2249.18±164.23μg/g）肝（880.17±8.62μg/g）肺（571.09±0.82μg/g）脑（108.62±27.38μg/g）、脾（105.37±17.64μg/g）、肾（100.33±0.34μg/g）、心（95.11±4.63μg/g）心血（6.31±1.87μg/mL）。8LD_(50)剂量灌胃家兔5～6h死亡，体内氯丙嗪含量由高到低分别为：胃(3823.24±662.66μg/g ) 肝(489.67±230.44μg/g)、肺(396.16±237.70μg/g)脑(251.24±98.01μg/g)、脾(267.62±87.46μg/g)、肾(289.01±153.35μg/g)、心(117.88±52.79μg/g)心血(5.86±1.90μg/ mL)。 3.死后再分布：1/2LD_(50)氯丙嗪在灌胃致死犬心血中的浓度呈先升高后降低趋势，在肝脏中的浓度呈升高趋势。心血中氯丙嗪含量在死后4h之内稳定，8h时显著升高（LSD，P＜0.05），48h～96h内又逐渐降低。死后与死亡当时心血氯丙嗪浓度比（C_(死后血)/C_(死亡当时血_）达0.47～2.28；肝脏中氯丙嗪含量在24h之内稳定，48h～96h内显著升高（LSD，P＜0.05），死后与死亡当时肝脏氯丙嗪浓度比（C_(死后肝)/C_(死亡当时肝)）达1.57～6.74；在染毒犬死后96h内，肌肉中氯丙嗪浓度在死后无显著性变化（LSD，P㧐0.05）。 4.死后弥散：LD_(50)氯丙嗪灌胃染毒家兔3h后，大脑、心、肝、脾、肺、肾、左、右后肢肌和心血中均检出氯丙嗪成份，且脾中氯丙嗪含量最高。尿和胆汁中在6d后仍未检出氯丙嗪成份。 5.分解动力学：氯丙嗪在检材中的分解动力学符合一级动力学过程一室开放模型，Ct=C_0e~(-kt)表示。20℃、4℃、-20℃、20℃（加NaF至1%）保存犬血中氯丙嗪浓度第7d时犬血中氯丙嗪浓度下降至最初浓度的57.6%、97.3%、53.6%、80.2%，20℃、4℃、-20℃、20℃（加NaF至1%）保存280d时犬血中氯丙嗪浓度分别显者下降至最初浓度的29.80%、36.51%、19.62%、39.29%。20℃、4℃、-20℃、20℃（4%甲醛）保存犬肝中氯丙嗪浓度第7d时分别上升至最初浓度的237.01%、160.75%、165.52%、60.27%，保存320d时，分别显者下降至最初浓度的67.91%、78.60%、67.84%、12.63%。 结论 1.本文建立了生物检材中氯丙嗪的气相色谱/质谱和气相色谱检测方法，前者选择性好，定性准确，后者色谱简便，快速，敏捷，定量结果准确，可用于氯丙嗪中毒的临床快速检验诊断和氯丙嗪中毒（死）案件的法医学鉴定。 2.氯丙嗪死后分布不均匀，6LD_(50)灌胃染毒大鼠体内氯丙嗪含量顺序为：胃、肝、肺、脑、脾、肾、心、心血。8LD_(50)灌胃染毒家兔体内氯丙嗪含量顺序为胃、肝、肺、脑、脾、肾、心、心血。脏器组织中氯丙嗪浓度均高于血液。在氯丙嗪中毒（死）案件的法医学鉴定中，除采集血液和胃外，还可选取脾肝、肺、肾脑等组织为检材，其死后分布规律为氯丙嗪中毒（死）案件的法医学鉴定中检材采取和特殊案件血中药物浓度推断提供了实验依据。 3.氯丙嗪在染毒犬体内可发生死后再分布，1/2LD_(50)氯丙嗪在灌胃致死犬死后与死亡当时心血氯丙嗪浓度比（C_(死后)/C_(0h)）达0.47～2.28，死后与死亡当时肝脏氯丙嗪浓度比（C_(死后)/C_(0h)）达1.57～6.74，肌肉中含量变化不大。提示氯丙嗪在染毒致死犬体内存在死后时间依赖的血与脏器浓度变化，可发生死后再分布，肌肉组织受影响较小。因此，氯丙嗪意外死亡案件或多药滥用死亡法医学鉴定中，不仅要取心血，而且尽量采集肌肉、脑等受死后再分布影响较小的检材，在相关的死因分析上考虑死后尸检时间，取材部位、尸体存放环境等因素，进行综合分析。 4.氯丙嗪在家兔体内可发生死后弥散，LD_(50)氯丙嗪灌胃染毒3h后，大脑、心、肝、脾、肺、肾、左、右后肢肌和心血中均检出氯丙嗪成份，且脾中氯丙嗪含量最高。尿和胆汁中在6d后仍未检出氯丙嗪成份。在盐酸氯丙嗪中毒（死）法医学鉴定中可根据尿液和胆汁中是否检测出氯丙嗪来区分生前服毒和死后染毒。 5.氯丙嗪在染毒犬保存肝脏和心血中均可发生降解；保存温度降低或添加1%氟化钠能使其分解半衰期和检出期限延长，而4％的甲醛溶液（20℃）固定则能能使其分解半衰期和检出期限缩短。氯丙嗪在样品中的分解动力学符合一级动力学过程一室开放模型，可用C_t=C_0e~(-kt)表示，利用该分解动力学方程，可以推断解剖或采集当时检材中药物含量，为中毒（死）案件法医学鉴定中毒物检验结果的分析提供了实验依据。
[Abstract]:Purpose
1 . establishing a gas chromatograph and a gas chromatography / mass spectrometry detection method of the chlorprochlorin in the biological sample ;
2 , establishing the post - mortem distribution of the chlorpropine , distributing after death , dispersing after death , and decomposing the kinetic animal model ;
3 . The distribution of the post - mortem distribution , the redistribution after death , the post - mortem dispersion and the kinetic distribution of decomposition were studied , and the experimental basis was provided for the forensic identification of the case of the poisoning ( death ) .
method
1 . Post - mortem distribution study
1 . The post - mortem distribution in rats was studied : 6 male SD rats weighing 200 g 卤 10g were injected into 6LD _ ( 50 ) ( 1350 mg / kg ) by gavage at a constant rate . The changes of vital signs and the symptoms of poisoning were observed . The animals were dissected rapidly , and the brain , heart , liver , spleen , lung , kidney , heart and blood were rapidly dissected .
1 . The post - mortem distribution in rabbits was studied in rabbits : 6 rabbits were fasted overnight before the experiment . The rats were injected 8LD _ ( 50 ) ( 5990.4 mg / kg ) by gavage at a constant rate . The animals were dissected rapidly and the brain , heart , liver , spleen , lung , kidney , heart and blood were rapidly dissected .
2 . Post - mortem redistribution study : 6 male dogs were fixed on the dog table , the stomach tube was inserted into the stomach tube for 2 minutes , 1 / 2LD _ ( 50 ) dose ( 201.6 mg / kg , calculated according to the surface area ) was injected into the stomach at room temperature ( 20 鈩
本文编号：1882107
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